[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101059482A
[43]公开日2007年10月24日[21]申请号200610118771.6
[22]申请日2006.11.24[21]申请号200610118771.6
[71]申请人上海第一生化药业有限公司
地址200240上海市闵行区剑川路1317号[72]发明人陆琛 黄臻辉
[74]专利代理机构上海智信专利代理有限公司
代理人薛琦
[51]Int.CI.
G01N 30/02 (2006.01)G01N 30/06 (2006.01)G01N 30/26 (2006.01)G01N 30/60 (2006.01)
权利要求书 5 页 说明书 12 页 附图 8 页
[54]发明名称
瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相谱指纹图谱测试方法[57]摘要
本发明公开了一种瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相谱指纹图谱的测试方法，其步骤为：(1)将瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液制成样品溶液；(2)分别吸取瓜氨酸水溶液和样品溶液注入液相谱仪，依次用含邻苯二甲醛的溶液和含一氯甲酸芴甲酯的溶液进行柱前衍生化；(3)液相谱测定。本发明的测试方法为首次公开的瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相谱指纹图谱测试方法，且精密度高、稳定性好、重现性好，可作为一种较好的控制产品质量的分析测试方法应用于产品质量测试。采用本发明的测试方法首次获得了瓜蒌皮和瓜蒌皮注射液的高效液相谱对照指纹图谱，如图1、图2所示。 200610118771.6权 利 要 求 书第1/5页
1.一种瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相谱指纹图谱的测试方法，其步骤为：
(1)将瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液制成样品溶液；
(2)分别吸取瓜氨酸水溶液和样品溶液注入液相谱仪，依次用含邻苯二甲醛的溶液和含一氯甲酸芴甲酯的溶液进行柱前衍生化；
(3)液相谱测定。
2.根据权利要求1所述的测试方法，其特征在于，当测试对象为瓜篓皮时，所述的步骤(1)的制备步骤为：将瓜篓皮制成粉，过筛，加水配制成溶液，称重，加热回流，冷却后称重，用水补足减失重量，摇匀，离心，取上清液即得。
3.根据权利要求2所述的测试方法，其特征在于：所述的过筛步骤所用的筛为二号筛。
4.根据权利要求2所述的测试方法，其特征在于：所述的加水配制步骤采用的比例为1g瓜篓皮/20ml水。
5.根据权利要求2所述的测试方法，其特征在于：所述的加热回流的时间为30分钟。
6.根据权利要求2所述的测试方法，其特征在于：所述的离心步骤采用的转速为5000-10000转/分钟。
7.根据权利要求1所述的测试方法，其特征在于，当测试对象为瓜篓皮注射液时，所述的步骤(1)的制备步骤为：将瓜篓皮注射液用水稀释制得样品溶液。
8.根据权利要求7所述的测试方法，其特征在于：所述的用水稀释步骤采用的比例为瓜篓皮注射液比水1∶5。
9.根据权利要求1所述的测试方法，其特征在于：当测试对象为瓜篓皮时，步骤(2)所述的瓜氨酸水溶液的浓度为1mg/ml。
10.根据权利要求1所述的测试方法，其特征在于：当测试对象为瓜篓皮注射液时，步骤(2)所述的瓜氨酸水溶液的浓度为0.5mg/ml。
11.根据权利要求1所述的测试方法，其特征在于：所述的步骤(2)中，吸取的瓜氨酸水溶液和样品溶液的体积都为1μl。
12.根据权利要求1所述的测试方法，其特征在于，步骤(2)所述的柱前衍生化步骤所采用的进样程序为：
①吸取硼酸盐缓冲液、含邻苯二甲醛的溶液、样品溶液，在空气中混合；
②再吸取含一氯甲酸芴甲酯的溶液，在空气中混合；
③再吸取水，在空气中混合；
④进样。
13.根据权利要求1或12所述的测试方法，其特征在于：所述的含邻苯二甲醛的溶液中，邻苯二甲醛的浓度为0.01g/ml。
14.根据权利要求13所述的测试方法，其特征在于，所述的含邻苯二甲醛的溶液可由下述方法制得：每80mg邻苯二甲醛，取pH10.2的0.4mol/L硼酸盐缓冲液7ml，乙腈1ml，巯基丙酸125μl，混匀即得。
15.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：所述的硼酸盐缓冲液为pH10.2的0.4mol/L硼酸盐缓冲液。
16.根据权利要求14或15所述的测试方法，其特征在于，所述的pH10.2的0.4mol/L硼酸盐缓冲液可由下述方法制得：0.4mol/L硼酸水溶液，用0.4
g/ml氢氧化钠水溶液调节pH值至10.2即得。
17.根据权利要求1或12所述的测试方法，其特征在于：所述的含一氯甲酸芴甲酯的溶液中，一氯甲酸芴甲酯的浓度为0.005g/ml。
18.根据权利要求17所述的测试方法，其特征在于，所述的含一氯甲酸芴甲酯的溶液可由下述方法制得：每50mg一氯甲酸芴甲酯，用乙腈使其溶解，用水稀释至10ml即得。
19.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤①所述的硼酸盐缓冲液所吸取的体积为5μl。
20.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤①所述的含邻苯二甲醛的溶液所吸取的体积为1μl。
21.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤①所述的样品溶液所吸取的体积为1μl。
22.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤①所述的空气中混合的次数为10次。
23.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤①所述的空气中混合的体积为7μl。
24.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤②所述的含一氯甲酸芴甲酯的溶液所吸取的体积为1μl。
25.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤②所述的空气中混合的次数为30次。
26.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤②所述的空气中混合的体积为8μl。
27.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤③所述的水所吸取的体积为32μl。
28.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤③所述的空气中混合的次数为2次。
29.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤③所述的空气中混合的速度为仪器最大速度。
30.根据权利要求12所述的测试方法，其特征在于：步骤③所述的空气中混合的体积为20μl。
31.根据权利要求1所述的测试方法，其特征在于：步骤(3)所述的液相
谱为高效液相谱。
32.根据权利要求31所述的测试方法，其特征在于：所述的高效液相谱所采用的谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的谱柱。
33.根据权利要求32所述的测试方法，其特征在于：所述的以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的谱柱为美国Hypersil公司的ODS产品，即孔径为5μm，直径为4.6mm，长度为20cm的谱柱。
34.根据权利要求31所述的测试方法，其特征在于：所述的高效液相谱所采用的流动相为：
流动相A，可由下述方法制得：取醋酸钠10.88g，加水4000ml使溶解，加三乙胺0.8ml，四氢呋喃24ml，混匀，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.20，即得；
流动相B，可由下述方法制得：取醋酸钠10.88g，加水800ml使溶解，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.20，加乙腈1400ml，甲醇1800ml，混匀即得。
35.根据权利要求31所述的测试方法，其特征在于：所述的高效液相谱所采用的洗脱程序如表1所示：
表1高效液相谱洗脱程序
时间(分钟)流动相A(wt％)流动相B(wt％)流速(ml/min)
010001
89281
2286141
3173271
3871291
542179 1.5
588515 1.5
6010001
36.根据权利要求31所述的测试方法，其特征在于：所述的高效液相谱所
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