汪程远;张燕;谭月晗
【摘 要】Objective To establish the TLC and HPLC detection method of ligustilide in Chinese medicines with Chuanx-iong and Angelica. Methods 16 commonly Chinese medicines with Chuanxiong and Angelica were used to establish the methods about TLC qualitative detection and HPLC quantitative assay of ligustilide. Ligustilide was tested in these Chinese medicines. Results The methods of TLC qualitative detection and HPLC quantitative assay of ligustilide were established and used to detect these Chinese medicines. And the results were accurate and reliable. Conclusion The methods are simple and can be used to determine ligustilide in Chinese medicines with satisfactory accuracy and reproducibility.%目的 建立含当归、川芎中成药中藁本内酯的薄层谱(TLC)、高效液相谱(HPLC)检测分析方法.方法 选择常用16种含当归、川芎的中成药,系统建立其藁本内酯TLC定性检测以及HPLC定量分析方法,对各中成药中藁本内酯进行检测分析.结果 建立了中成药中藁本内酯TLC定性检测和HPLC定量分析方法,测定了各中成药,结果准确可靠.结论 建立的藁本内酯TLC和HPLC方法简便,准确,重现性好,可用于含当归、川芎中成药的检测分析.
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2012(009)026
【总页数】3页(P119-121)
【关键词】川芎;当归;中成药;藁本内酯;薄层谱法;高效液相谱法
【作 者】汪程远;张燕;谭月晗
【作者单位】重庆工商大学药物化学与化学生物学研究中心,重庆,400067;重庆工商大学药物化学与化学生物学研究中心,重庆,400067;重庆工商大学药物化学与化学生物学研究中心,重庆,400067
【正文语种】中 文
【中图分类】R284.2
当归、川芎是养血活血的常用传统中药，也是中成药制剂的常用药材。在《中国药典》2005
年版一部中[1]，仅含当归的中成药制剂有52个品种，仅含川芎的中成药制剂有36个品种，当归和川芎都含有的制剂有47个品种，含有当归、川芎药材的中成药制剂品种在《中国药典》2005年版中数量占23.9%，因而当归、川芎成为了《中国药典》2005年版中用量最广泛的常用药材。现常用阿魏酸和川芎嗪作为当归、川芎的指标检测成分，但实际上当归、川芎中藁本内酯含量远高于阿魏酸和川芎嗪在药材中的含量[2-6]。据文献报道藁本内酯在当归、川芎中分别高达2.689%[7]、1.857%[8]，因此藁本内酯为当归、川芎中含量最高的活性成分。已有大量研究报道藁本内酯对心血管系统有较强药理活性[9-11]，其可解除血管痉挛、增加冠脉流量、扩张微血管等，这些作用符合当归、川芎活血化瘀的药理功效。因此，将藁本内酯作为含当归、川芎中成药中活性检测成分是最有科学依据的。但由于藁本内酯结构特殊稳定性差[12-13]，其藁本内酯对照品制备难，保存更难[14]，现还未有文献报道中成药制剂中的藁本内酯检测分析。笔者在用HPLC测定川芎中藁本内酯研究的基础上[8]，用自制稳定的藁本内酯对照品建立了藁本内酯的薄层谱法（TLC）和高效液相谱（HPLC）检测分析方法，分别对含当归、川芎的代表性中成药制剂中藁本内酯进行定性和定量分析检测，为此类药材复方制剂的分析检测、质量控制和临床用药监测提供参考。
1 仪器与试药
TU-Ⅱ暗箱式紫外观察仪（内置254 nm/366 nm紫外光灯管，上海科哲生化科技有限公司）；Agilent 1260型液相谱仪（带四元泵、自动进样器、UV检测器，安捷伦科技有限公司）；超声波清洗仪（SB-5200D，宁波新芝生物科技股份有限公司）；梅特勒AG204电子天平；Nikon数码相机（D700，日本尼康公司）；Milli-Q纯水仪；Eppendorf 5417C高速离心机。 防风通圣丸（河南省宛西制药股份有限公司，批号：100401）；妙济丸（陕西利君现代中药有限公司，批号：100803）；心通口服液（鲁南厚普制药有限公司，批号：10062007）；天麻丸（重庆桐君阁药厂有限公司，批号：10070002）；十全大补丸（重庆中药二厂，批号：1002001）；黄氏响声丸（无锡济民药业股份有限公司，批号：110616）；木瓜片（吉林亚泰明星制药有限公司，批号：20101101）；止痛化癥片（江西杏林白马药业有限公司，批号：20100706）；石斛夜光丸（长春人民药业集团有限公司，批号：111207）；川芎茶调浓缩丸（重庆中药二厂有限公司，批号：1012026）；补肾益脑丸（牡丹江灵泰药业股份有限公司，批号：100802）；逍遥丸（江苏康缘药业股份有限公司，批号：091213）；黄连上清丸（四川绵阳制药有限公司，批号：55110016）；九味羌活丸（四川绵阳制药有限公司，批号：55110042）；乌鸡白凤丸（江西民济药业有限公司，批号：100612）；人参再
造丸（吉林天强制药有限公司，批号：1000901）。甲醇（美国Merck公司）为谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。藁本内酯对照品（自制，经核磁共振氢谱和碳谱鉴定，其纯度以HPLC和GC测定，按面积归一化法计算大于98.0%）。
2 方法与结果
2.1 TLC检测分析
2.1.1 样品溶液制备 取各中成药用研钵研磨成细末状，分别称取2 g各药细末加入10 mL的甲醇溶解，再用超声波清洗机分别超声30 min，离心，取上清液作为供试样品，备用。称取藁本内酯对照品10 mg加入10 mL甲醇溶解，作为对照样品，备用。
2.1.2 谱条件 以HF254硅胶板为固定相，以石油醚∶乙酸乙酯（10∶1）为展开剂，在层析缸中充分饱和，展开，取出晾干，在TU-Ⅱ暗箱式紫外仪254 nm和365 nm波长下视检，用数码相机照相，记录谱图。
2.1.3 检测结果 取上述制备好的各供试样品和藁本内酯对照品液，点样于一块长HF254硅胶板上，饱和，展开，记录谱图，藁本内酯的Rf值为0.52，总谱见图1。
图1 各中成药TLC图谱1.防风通圣丸；2.妙济丸；3.心通口服液；4.天麻丸；5.十全大补丸；6.黄氏响声丸；7.木瓜片；8.止痛化癥片；9.石斛夜光丸；10.川芎茶调浓缩丸；11.补肾益脑丸；12.逍遥丸；13.黄连上清丸；14.九味羌活丸；15.乌鸡白凤丸；16.人参再造丸；“标”为藁本内酯对照品
从图 1 可看出 2、3、7、8、13、15、16 在藁本内酯对照品点处没有类似的荧光斑点，说明这几个中成药制剂中TLC检测不到当归、川芎的有效成分藁本内酯，可以初步判断这几个制剂中当归、川芎的药材加入量很低或没有加入正品当归、川芎药材。
2.2 HPLC含量检测
2.2.1 对照品溶液制备 精密称取藁本内酯对照品5.3 mg置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，配制成浓度为106 μg/mL标准溶液，备用。
2.2.2 样品溶液制备 取各中成药用研钵研磨成细末状，分别称取2 g各药细末，加入20 mL甲醇，共加两次，超声提取30 min，过滤，滤液置于50 mL容量瓶中，加甲醇定容，得到各样品溶液，备用。
2.2.3 谱条件[8]Agilent 1260型液相谱仪（四元泵、自动进样器、UV 检测器）；谱柱：Hypersil ODS（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-5%异丙醇（45∶55）；检测波长：280 nm；流速：1 mL/min；柱温：25℃。在此条件下，样品中的藁本内酯与其他峰均能达到基线分离，藁本内酯的保留时间为12.1 min，对照品和样品的谱见图2～4，其中样品图随机选择11和15号。
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