(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910922333.2
(22)申请日 2019.09.26
(83)生物保藏信息
CGMCC NO. 16028 2018.06.29
CGMCC No.16022 2018.06.29
CGMCC No.16023 2018.06.29
CGMCC No.16024 2018.06.29
CGMCC No.16025 2018.06.29
CGMCC No.16026 2018.06.29
CGMCC No.16027 2018.06.29
CGMCC No.16021 2018.06.29
CGMCC No.16077 2018.07.10
(71)申请人 天津创源生物技术有限公司
地址 300301 天津市滨海新区滨海科技园
康泰大道59号绿谷健康产业园31号楼
(72)发明人 张震 王海宽 梁武 李树森
王飞 (51)Int.Cl.A23L 11/00(2016.01)A23L 33/135(2016.01)
(54)发明名称
制备方法
(57)摘要
本发明属于微生物发酵应用领域，具体涉及
一种由多种益生菌分段固态发酵黄豆生产的功
能性食品及其制备方法。本发明所提供的调节肠
道健康的益生菌发酵功能食品，是将大豆制粉后
按比例与水混匀接入益生菌进行分段固态发酵
菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌、副
干酪乳杆菌、青春双歧杆菌、凝结芽孢杆菌和枯
草芽孢杆菌。通过益生菌发酵，使大豆中的有益
活性物质增多，且使其更易被人体消化吸收，增
强其对机体的保健功效，还可对机体的健康调节
发挥重要作用。权利要求书1页 说明书10页CN 110521939 A 2019.12.03
C N 110521939
A
1.一种调节肠道健康的益生菌发酵功能食品，其特征在于，是将大豆制粉后按比例与水混匀接入益生菌进行分段固态发酵而得，所述分段固态发酵具体如下：
①将活化完成的枯草芽孢杆菌与凝结芽孢杆菌接入培养基中，使每克发酵培养基中枯草芽孢杆菌的接种量为105-106CFU/g，凝结芽孢杆菌的接种量为106-107CFU/g，维持温度37℃，通气量0.1-0.5m 3/min，发酵10-18h；
②待第①步发酵完成后，将活化好的动物双歧杆菌、乳酸片球菌与植物乳杆菌接入，使每克发酵培养基中动物双岐杆菌的接种量为106-107CFU/g，乳酸片球菌的接种量为106-107CFU/g，植物乳杆菌的接种量为105-106CFU/g，维持温度37℃，密闭发酵12-24h；
③待第②步发酵完成后，将活化好的青春双歧杆菌、长双岐杆菌与副干酪乳杆菌接入，使每克发酵培养基中青春双歧杆菌的接种量为105-106CFU/g，长双岐杆菌的接种量为106-107CFU/g，副干酪乳杆菌的接种量为106-108CFU/g，维持温度37℃，密闭发酵18-36h；
④待第③步发酵完成后，将活化好的罗伊氏乳杆菌接入，使每克发酵培养基中罗伊氏乳杆菌的接种量为107-108CFU/g，维持温度37℃，密闭发酵24-48h。
2.如权利要求1所述的一种调节肠道健康的益生菌发酵功能食品，其特征在于，大豆粉与水的质量体积比为1∶1.2—1∶2.0。
3.如权利要求1所述的一种调节肠道健康的益生菌发酵功能食品，其特征在于，发酵结束后，放入真空冷冻干燥机内冻干24-35h，制得调节肠道健康的益生菌发酵功能食品。
4.如权利要求1所述的一种调节肠道健康的益生菌发酵功能食品，其特征在于，
所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)IOB602，保藏编号为CGMCC No.16021；
所述动物双歧杆菌为动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)IOB402，保藏编号为CGMCC No.16028；
所述副干酪乳杆菌为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)IOB413，保藏编号为CGMCC No.16022；
所述青春双歧杆菌为青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)IOB506，保藏编号为CGMCC No.16026；
所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)IOB502，保藏编号为：CGMCC No.16025；
所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)IOB430，保藏编号为CGMCC No.16024；
所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)IOB423，保藏编号为CGMCC No.16023；
所述长双歧杆菌为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)IOB515，保藏编号为CGMCC No.16027；
所述乳酸片球菌为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)IOB701，保藏编号为CGMCC No.16077。
权 利 要 求 书1/1页CN 110521939 A
一种调节肠道健康的益生菌发酵食品及其制备方法
技术领域：
[0001]本发明属于微生物发酵应用领域，具体涉及一种由多种益生菌分段固态发酵黄豆生产的功能性食品及其制备方法。
背景技术：
[0002]肠道菌与人体健康存在密切的关系，一些疾病的发生发展往往伴随着肠道菌的变化。此外，肠道还是人体最大的免疫器官，肠道黏膜免疫系统包括肠道相关淋巴组织和有关细胞、分子成分，它能够抵御细菌、病毒和毒素从消化道入侵，担负着重要的免疫功能，是防止外界致病因子入侵体内的一道坚固屏障。但随着当前人们生活节奏的加快，饮食习惯与环境的变化，许多人生活在疾病、劳累、压力过大、抗生素滥用、睡眠不足、饮酒等环境中，使得相当一部分人出现不同程度的肠道菌失衡，进而影响身体健康。数据显示，我国肠胃病患者的人数高达2.3亿人，其中约有40％患者长期受胃肠病的困扰，大肠癌患者也呈上升趋势。此外，在我国约70％的居民存在不同程度的胃肠不适；每年超过10亿人次出现腹泻或便秘症状，新增大肠癌患者达40万。不仅如此，肠道菌失衡还会严重影响身体的免疫
系统机能，造成免疫功能低下，进而引发多种疾病，如肝硬化、胆结石、冠心病、心肌梗塞、脑动脉硬化等。目前市场上针对肠道健康问题开发的产品并不少见，主要包括较为传统的中西医药物和近几年兴起的益生菌产品，但前者往往适应性低，专病专药，且多数有副作用，不能作为维持肠道健康的功能性食品长期服用，只能在肠道出现问题时服用，局限性大。而益生菌产品近几年发展迅速，益生菌被称为活的微生物食品补充剂，其通过改善肠道微生物平衡，从而影响宿主健康。目前已有一些利用益生菌来调节肠道健康的专利：[0003]公开号：CN106820155A的发明《用于调节肠道菌及增强免疫力的乳酸菌组合物及其制备方法》公开了一种用于调节肠道菌及增强免疫力的乳酸菌组合物，包括乳酸菌组合核，所述乳酸菌组合核外包裹有包被层：所述包被层包括重量份数的成份：低聚异麦芽糖30-50、蛋白物质30-50、硝酸纤维素5-10、有机酸根稀土盐0.5-1；所述乳酸菌组合核由如下重量份数的菌株组成：乳双歧杆菌30-40、罗伊氏乳杆菌20-30、鼠李糖乳杆菌10-20、婴儿双歧杆菌10-20。
[0004]公开号：CN106820156A的发明《一种调节肠道菌健康的益生菌组合物》公开了一种包含乳铁蛋白、菊粉、菠萝蛋白酶、白萝卜提取物的综合益生菌产品，该产品中富含嗜酸乳杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、两歧双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热链球菌等肠道益生菌且本发明中加入了乳铁蛋白、菊粉以及菠萝蛋白酶、白萝卜提取物等物质。
[0005]公开号：CN107125745A的发明《调节肠道菌与通便功能的酵素及其制备方法》公开了一种调
节肠道菌与通便功能的酵素及其制备方法，包括以下原料与复合微生物发酵制备得到：水果75-82wt％，草本药材10-14wt％以及配料6-10wt％，所述复合微生物的添加量为所述原料的总重量的10-14wt％；所述水果为菠萝、木瓜、番茄与胡萝卜的混合物，所述草本药材为小麦、燕麦与芦荟的混合物，所述配料为菊粉、水苏糖、乳酮糖、低聚异麦芽酮糖
与低聚果糖的混合物，所述复合微生物为两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌与嗜热链球菌的混合菌或者两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、青春双歧杆菌、发酵乳杆菌与瑞士乳杆菌的混合菌。
[0006]上述利用益生菌发酵生产调节肠道产品的专利多为益生菌液态发酵，且多为一次发酵产品，各菌种生长水平单一或不平衡，而原料与成品须经萃取，浓缩，离心等步骤，对益生菌整体微环境的破坏大，发酵前期与后期工艺复杂且废料多，活性成分损失大，产品易受污染，且加入较多辅料，产品对不同人的适应性和产品效果无法保证。而利用益生菌进行分段固态发酵且生产过程无废料，有益活性成分无损失，各益生菌生长水平平衡的益生菌发酵食品及其制备方法未见报道。
发明内容：
[0007]本发明旨在针对现有技术不足，提供一种调节肠道健康的益生菌发酵食品，并提供该食品的制备方法，特别是针对有消化系统问题和肠道菌紊乱，免疫力低下的人，并为相关产品的生产提供研究
思路。
[0008]本发明通过益生菌分段固态发酵大豆来生产一种调节肠道菌平衡，维持肠道健康，增强机体免疫力的功能性食品。针对大豆底物，设计开发了一种分段固态发酵方法，将不同益生菌按其在大豆中的生长规律分时段接入大豆中发酵，使得发酵产物中各菌种数量平衡，代谢产物含量丰富，益生菌数量高，并最终获得一种具有调节肠道菌平衡，改善消化系统微生态，维持肠道健康，增强机体免疫力的益生菌功能性发酵食品。
[0009]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0010]一种调节肠道健康的益生菌发酵功能食品，是将大豆制粉后按比例与水混匀接入益生菌进行分段固态发酵而得。
[0011]所述益生菌包括罗伊氏乳杆菌、长双歧杆菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌、副干酪乳杆菌、青春双歧杆菌、凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。
[0012]所述大豆制粉的细度较佳的为不低于100目。
[0013]所述大豆粉与水的比例较佳的为1∶1.2—1∶2.0(质量体积比)。
[0014]本发明提供上述调节肠道健康的益生菌发酵功能食品的制备方法，具体步骤如下：
[0015](1)将大豆清洗后置于60℃烘箱烘干5-6小时，磨粉过100目筛，得大豆粉；[0016](2)配制活化培养基：每100ml水中添加12g大豆粉，得活化培养基；对活化培养基进行灭菌，条件为，121℃，20min；
[0017](3)配置发酵培养基：取大豆粉∶水＝1∶1.2—1∶2.0(质量体积比)，混匀后置于固态发酵罐中灭菌制得固态发酵培养基备用；灭菌条件为，121℃，20min；
[0018](4)菌种活化：罗伊氏乳杆菌、长双歧杆菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌、副干酪乳杆菌、青春双歧杆菌、凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的甘油管分别按1％(v/v 活化培养基的体积比)接种于活化培养基进行活化，pH自然，控制温度为37℃；分别活化24h 后，按5％(v/v)的接菌量再次转接活化培养基进行二次活化，37℃再活化24h后得二级种子液；
[0019](5)益生菌分段发酵：
[0020]①将活化完成的枯草芽孢杆菌与凝结芽孢杆菌接入固态发酵罐中，使每克发酵培养基中枯草芽孢杆菌的接种量为105-106CFU/g，凝结芽孢杆菌的接种量为106-107CFU/g，维持温度37℃，通气量0.1-0.5m3/min，发酵10-18h；
[0021]②待第①步发酵完成后，将活化好的动物双歧杆菌、乳酸片球菌与植物乳杆菌接入固态发酵罐中，使每克发酵培养基中动物双岐杆菌的接种量为106-107CFU/g，乳酸片球菌的接种量为106-107CFU/g，植物乳杆菌的接种量为105-106CFU/g，维持温度37℃，密闭发酵12-24h；
[0022]③待第②步发酵完成后，将活化好的青春双歧杆菌、长双岐杆菌与副干酪乳杆菌接入固态发酵罐中，使每克发酵培养基中青春双歧杆菌的接种量为105-106CFU/g，长双岐杆菌的接种量为106-107CFU/g，副干酪乳杆菌的接种量为106-108CFU/g，维持温度37℃，密闭发酵18-36h；
[0023]④待第③步发酵完成后，将活化好的罗伊氏乳杆菌接入固态发酵罐中，使每克发酵培养基中罗伊氏乳杆菌的接种量为107-108CFU/g，维持温度37℃，密闭发酵24-48h；[0024](6)发酵结束后，放入真空冷冻干燥机内冻干24-35h，制得调节肠道健康的益生菌发酵功能食品；
[0025]所述大豆为市售非转基因大豆；
[0026]优选的，所述大豆：水＝1∶1.5(质量体积比)；
[0027]优选的，固态发酵结束后，进行真空冷冻干燥30h，至含水量不大于10％；[0028]优选的，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌IOB602(Lactobacillus plantarum)，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.16021；[0029]优选的，所述动物双歧杆菌为动物双歧杆菌I O B402(B if id o ba c t e r i u m animalis)，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.16028；
[0030]优选的，所述副干酪乳杆菌为副干酪乳杆菌IOB413(Lactobacillus paracasei)，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.16022；
[0031]优选的，所述青春双歧杆菌为青春双歧杆菌IOB506 (Bifidobacteriumadolescentis)，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.16026；
[0032]优选的，所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌IOB502(Bacillus coagulans)，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为：CGMCC No.16025；
[0033]优选的，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌IOB430(Bacillus subtilis)，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝
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