透明质酸产生促进剂及胶原产生促进剂的制作方法

1.本发明涉及皮肤状态改善的技术领域，具体而言涉及化妆、美容或医疗技术。

背景技术：

2.皮肤从外侧起由角质层、表皮、基底膜和真皮构成。真皮是其中区域最广的部分，不如表皮那样由细胞致密填塞。反而细胞外空间多，通过被称为“细胞外基质”的大分子的网状结构而被填充。该细胞外基质在真皮内的成纤维细胞等中产生，由透明质酸、硫酸皮肤素等被称为酸性粘多糖的多糖类、与胶原、弹性蛋白等纤维性蛋白质构成。细胞外基质与皮肤的弹性、紧致、水润感、新陈代谢等直接相关。如果成纤维细胞等中的细胞外基质的产生减弱，则皮肤的弹性、水润感丧失，肌肤粗糙易于发生，成为导致皮肤老化的一个原因。
3.上述纤维性蛋白质主要由胶原构成，其中i型胶原占整体的80％。除了i型胶原以外还已知iii、v、xii、和xiv型胶原的存在。在老化皮肤中观察到的松弛的成因之一是因为，皮肤组织随着年龄增长而减薄。在老化了的皮肤中，作为真皮的主要基质成分的胶原纤维的减少显著，这成为使皮肤的厚度薄的主要原因的可能性高。因此，可以认为使胶原的产生促进而维持胶原量对于松弛的预防/改善是有效的。此外胶原的产生促进除了上述以外，对皮肤的创伤治愈的改善、以及对骨质疏松症、关节炎、腱鞘炎等的、高血压的防止等也是有效的。
4.作为具有这样的胶原产生促进作用的成分，一直以来已知各种成分，例如，已知四棱豆及其溶剂提取物(专利文献1)等。此外，在专利文献2中示出n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸具有i型胶原的产生促进作用。
5.另一方面，上述多糖类中的透明质酸具有向细胞间隙的水分保持、基于在组织内形成胶状的基质的细胞的保持、组织的润滑性与柔软性的保持、对机械损伤等外力的阻力、和细菌感染的防止等多种功能。进一步，近来，关于透明质酸与癌转移的相关等也进行了大量研究。
6.可以认为皮肤的透明质酸量随着年龄增长而减少，与此相伴，细纹、干燥等皮肤老化出现。因此，可以认为使透明质酸的产生促进而维持透明质酸量对于皮肤的老化的防止是有效的。
7.这样，可以认为由年龄增长引起的胶原和透明质酸的量和产生能力的降低是皮肤的老化的主要原因之一。也进行了具有胶原和透明质酸的产生促进效果的成分的研究，报导了例如侧柏种子的有机溶剂提取物的处理物(专利文献3)。然而，依然要求可以广泛应用于以皮肤的老化为代表的与胶原和透明质酸的量和产生能力的降低相关的症状改善、预防/等的进一步的新成分的开发。
8.现有技术文献
9.专利文献
10.专利文献1：日本特开2010-24222号公报
11.专利文献2：日本特开2014-55116号公报
12.专利文献3：国际公开第2012/057123号

技术实现要素：

13.发明所要解决的课题
14.本发明的目的是提供新的胶原产生促进剂、透明质酸产生促进剂、用于促进胶原和/或透明质酸的产生的组合物、皱纹、紧致、肌理、或皮肤水分量改善剂、以及用于促进胶原和/或透明质酸的产生的美容或非的方法。
15.用于解决课题的方法
16.本发明者们为了开发具有胶原和透明质酸的产生促进效果的新成分而进行了深入研究，结果首次发现了可以使用n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为胶原产生促进剂和透明质酸产生促进剂的有效成分。进而发明了以含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为特征的、用于促进胶原和/或透明质酸的产生的组合物、皱纹、紧致、肌理、或皮肤水分量改善剂、以及用于促进胶原和/或透明质酸的产生的美容或非的方法。
17.因此，本发明涉及以下发明：
18.1.19.一种透明质酸产生促进剂，含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分。
20.2.21.一种胶原产生促进剂，含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分。
22.3.23.根据方案1所述的透明质酸产生促进剂，用于促进表皮细胞、表皮角质形成细胞、真皮细胞、和/或成纤维细胞中的透明质酸的产生。
24.4.25.根据方案2所述的胶原产生促进剂，用于促进i型胶原和/或iii型胶原的产生。
26.5.27.一种用于促进透明质酸和/或胶原的产生的组合物，含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分。
28.6.29.根据方案5所述的组合物，是用于由透明质酸或胶原的产生能力的降低引起的状态或疾病的剂。
30.7.31.根据方案5或6所述的组合物，是皮肤外用剂。
32.8.33.根据方案5～7中任一项所述的组合物，是皱纹改善剂、紧致改善剂、肌理改善剂、或皮肤水分量改善剂。
34.9.35.一种美容方法或非的方法，包括：应用含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分的透明质酸产生促进剂或胶原产生促进剂。
36.10.37.n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸用于促进透明质酸和/或胶原的产生的用途。
38.发明的效果
39.可以使用n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸来促进胶原产生和透明质酸产生。进一步，可以使用n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸来改善皱纹、紧致、肌理、或皮肤水分量。
附图说明
40.图1显示皮肤组织的免疫组织化学染试验的结果。显示出通过本发明的组合物的涂抹，从而促进i型胶原的产生。
41.图2显示皮肤组织的免疫组织化学染试验的结果。显示出通过本发明的组合物的涂抹，从而促进iii型胶原的产生。
42.图3显示皮肤组织的免疫组织化学染试验的结果。显示出通过本发明的组合物的涂抹，从而促进透明质酸的产生。
43.图4显示使用了表皮角质形成细胞的体外试验的结果。显示出通过本发明的组合物的添加，从而促进表皮角质形成细胞中的透明质酸产生。
44.图5显示使用了成纤维细胞的体外试验的结果。显示出通过本发明的组合物的添加，从而促进成纤维细胞中的透明质酸产生。
具体实施方式
45.在一个方案中，本发明涉及一种胶原产生促进剂或透明质酸产生促进剂，其特征在于，含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸。
46.此外，本发明的一个方案涉及一种用于促进透明质酸和/或胶原的产生的组合物，含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分。本方案涉及的组合物可以是上述透明质酸产生促进剂或胶原产生促进剂。
47.在本说明书中，将本发明涉及的胶原产生促进剂、透明质酸产生促进剂、和其它组合物有时简单记载为“本发明的组合物”或“本发明涉及的组合物”。
48.n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸为通过下述式而表示的化合物。
[0049][0050]
然而，也可以使用式中1个以上氢原子被低级烷基(例如，c
1-3
烷基)等取代了的化合物。
[0051]
n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸可以使用市售品(例如，由和光纯药工业社销售的市售品等)，或可以基于公知的方法来制造。
[0052]
在本发明中，所谓胶原和透明质酸的产生的促进，是指细胞、例如构成皮肤组织的细胞中的胶原和透明质酸的产生的促进或产生能力的提高。因此，本发明的组合物虽然不限定，但例如，可以为了促进表皮细胞、表皮角质形成细胞、真皮细胞、成纤维细胞等中的透明质酸和/或胶原的产生而使用。在一实施方式中，本发明的组合物可以在表皮角质形成细
胞和成纤维细胞两者中促进透明质酸的产生。
[0053]
另外，在本说明书中，胶原和透明质酸的产生能力的评价方法没有特别限定，例如，可以将应用(涂抹)了本发明的组合物的皮肤组织中的胶原(i型胶原和iii型胶原)或透明质酸的存在量通过免疫组织化学染进行可视化来评价。或者，可以将用包含本发明的组合物的培养液培养后的细胞培养液(培养上清液)中的胶原和/或透明质酸的存在量通过elisa等进行测定来评价。
[0054]
含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的本发明的组合物如后述实施例所公开的那样，不仅促进i型胶原的产生，而且兼具促进iii型胶原的产生、以及透明质酸的产生的效果。因此，在一方案中，本发明的组合物为了促进i型胶原和/或iii型胶原的产生而使用。此外，在一方案中，本发明的组合物为了促进透明质酸的产生而使用。n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸不仅具有i型胶原的产生的促进效果，而且兼具iii型胶原和透明质酸的产生促进效果是由本发明者们首次发现的认识。
[0055]
在构成皮肤的胶原中存在各种类型，但主要为i型胶原和iii型胶原，i型胶原主要担负皮肤的结构维持的功能，iii型胶原主要担负皮肤的柔软性赋予的功能。因此，在皮肤的弹性的维持和恢复中，不仅i型胶原，而且iii型胶原担负重要的作用。已知iii型胶原也被称为胎儿性胶原，具有随着年龄增长而迅速减少的倾向。因此，如果可以使用本发明的组合物，使皮肤中的iii型胶原量增加，则可以防止由年龄增长引起的皮肤的老化，带来优异的皱纹、紧致、肌理、皮肤水分量的改善效果。此外，由本发明的组合物带来的iii型胶原的产生促进效果也能够带来创伤治愈的促进、皮肤萎缩的改善、和与iii型胶原合成不全相关的状态和疾病的改善等效果。
[0056]
本发明的一方案涉及用于预防、改善、或由透明质酸或胶原的异常分解、或透明质酸或胶原的产生能力的降低引起的状态或疾病的剂。作为由透明质酸或胶原的异常分解、或透明质酸或胶原的产生能力的降低引起的状态或疾病的例子，可举出皮肤的老化、皱纹的增加、紧致的降低、肌理的降低、或皮肤水分量的降低等；通过外在、内在因素而产生的创伤例如切伤、裂伤、刺伤、咬伤、擦伤、伤、挫伤、灼伤、褥疮、糖尿病性溃疡、化学损伤等；起因于上述iii型胶原的合成不全的各种疾病例如埃勒斯-当洛斯综合征(ehlers-danlossyndrome)的临床症状iv型、和起因于此的动脉破裂、肠穿孔等；进一步肝炎、龈炎、风湿病、变形性关节炎、腱鞘炎、骨质疏松症、恶性肿瘤、肝硬化、移植排斥、硬皮病、肝硬化、动脉硬化、高血压、纤维化、干皮病、干燥肌肤、粗糙肌肤、肾炎、瘢痕瘤、过修复、败血症等，但不限定于此。
[0057]
本发明的组合物特别是作为皱纹改善剂、紧致改善剂、肌理改善剂、或皮肤水分量改善剂是有用的。
[0058]
本发明涉及的组合物中的n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的含量，例如，相对于后述化妆水、美容液这样的最终制品的总量，可以是0.0001～10重量％的范围所包含的任意的含量。例如，本发明涉及的组合物可以至少包含0.0001重量％、0.001重量％、0.01重量％、0.1重量％的n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸。此外，例如，本发明涉及的组合物可以包含10重量％以下、5重量％以下、1重量％以下、0.5重量％以下的n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸。根据最终制品的特性，这些上限值和下限值的任意组合可以被规定为n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的含量的范围。
[0059]
本发明的组合物以促进胶原和/或透明质酸的产生作为目的，能够混配于功能性
食品、化妆料、准药品、药品。换句话说，本发明涉及的含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的组合物可以被制备为功能性食品、化妆料、准药品、或药品。
[0060]
本发明的组合物可以通过包含经口施与、静脉注射的任意施与途径而使用，从使其直接作用于皮肤的观点考虑优选为经皮施与。通过为经皮施与，从而即使是在全身施与时产生副作用的药剂，在皮肤状态的改善的观点中也能够被容许。
[0061]
因此，本发明的组合物优选作为可以直接应用于皮肤的皮肤外用剂而混配。在这样的皮肤外用剂中，除了n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸以外，可以根据需要适当混配化妆品、药品等所使用的任意混配成分。作为那样的任意混配成分，可举出例如，油分、表面活性剂、粉末、料、水、醇类、增稠剂、螯合剂、有机硅类、抗氧化剂、紫外线吸收剂、保湿剂、香料、各种皮肤营养剂、ph调节剂、中和剂、粉末成分、料、水性成分、水等等。
[0062]
进一步，也可以适当混配乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、柠檬酸钠、多磷酸钠、偏磷酸钠、葡糖酸等多价螯合剂、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯等防腐剂、、单宁、维拉帕米、凝血酸及其衍生物、抗炎成分、甘草提取物、光甘草定、木瓜的果实的热水提取物、各种生药、生育酚乙酸酯、甘草酸及其衍生物或其盐、水杨酸及其衍生物或其盐等各种药效成分、维生素c、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸葡糖苷、3-o-乙基抗坏血酸、腺苷一磷酸二钠ot、熊果苷、曲酸、4-甲氧基水杨酸及其盐、4-正丁基间苯二酚和间苯二酚衍生物、亚油酸、鞣花酸、春黄菊提取液、5,5
’‑
二丙基-联苯-2,2
’‑
二酚、右泛醇等美白剂、视黄酸、视黄醛、视黄醇、乙酸视黄醇酯、丙酸视黄醇酯、棕榈酸视黄醇酯、和其它视黄醇衍生物、烟酰胺及其衍生物、三氟化异丙基氧代丙基氨基羰基吡咯烷羰基甲基丙基氨基羰基苯甲酰氨基乙酸钠、吡哆素及其盐、rice power提取物、以及葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、海藻等糖类等。
[0063]
皮肤外用剂能够广泛应用于被应用于外皮的化妆料、准药品等、特别适合为化妆料，其剂型也只要可以应用于皮肤就可以为任何剂型，应用溶液系、增溶系、乳化系、粉末分散系、水-油二层系、水-油-粉末三层系、软膏、化妆水、凝胶、气雾剂等任意的剂型。作为皮肤外用剂，可举出例如，外用固体制剂、外用散剂、外用液体制剂、搽剂、喷射剂、外用气雾剂、泵喷射剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、贴附剂、带剂、巴布剂等。
[0064]
使用形态也是任意的，可举出例如化妆水、美容液、乳液、霜、面膜等面部化妆料、粉底、口红、眼影等彩妆化妆料、防晒、护理液、防晒油等全身用化妆料、芳香化妆料、浴用剂等等，但只要被应用于皮肤就可以混配于任意的化妆料。
[0065]
此外，如果是彩妆化妆品，则能够广泛应用于粉底等形态，作为日化制品能够广泛应用于美体皂、肥皂等形态。进一步，如果是准药品，则能够广泛应用于各种软膏剂等形态。进而，本发明的组合物能够采用的形态不限定于这些剂型和形态。
[0066]
进一步，本发明的一个方案涉及一种美容方法或非方法，包括：应用含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的本发明的组合物(例如，透明质酸产生促进剂或胶原产生促进剂)。本方案的美容方法或非方法可以是用于预防、改善、或由对象中的透明质酸或胶原的异常分解、或透明质酸或胶原的产生能力的降低引起的状态或疾病的方法。
[0067]
在本方案中，对象没有限定，但可以是哺乳动物特别是人，以及犬、猫、牛、马、猪等非人哺乳动物。对象优选为人。
[0068]
在本方案涉及的美容或非的方法中，将本发明的组合物例如皮肤外用剂应用
于想要获得所希望的效果的部位，例如脸、颈、手、腕、脚等。应用可以以通过手、涂抹工具等进行涂抹等任意方式进行。应用的次数、频率、量等根据所希望的效果等来适当设定。另外，在一方案中，本发明涉及的美容或非的方法不包含所谓的医疗行为。
[0069]
进一步，本发明的一个方案涉及用于促进胶原和/或透明质酸的产生的n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的用途。如果从其它观点来说，本发明的方案包含用于胶原和/或透明质酸的产生的降低或不足的改善的n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸。本说明书所公开的数据证实了n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸对于胶原和/或透明质酸的产生的降低或不足的改善是有用的。因此，可以使用n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸，来制备用于胶原和/或透明质酸的异常分解、或胶原和/或透明质酸的产生能力的降低的改善的本发明的组合物。即，本发明的一个方案也涉及用于促进胶原和/或透明质酸的产生的组合物的制造中的n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的用途。在这些方案中，胶原和/或透明质酸的异常分解、或胶原和/或透明质酸的产生能力的降低的改善可以是皱纹、紧致、肌理、或皮肤水分量的改善。
[0070]
例示含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的本发明的组合物的处方例，但本发明不限定于这些处方例是不言而喻的。另外，各成分的数值为质量％。
[0071]
处方例1霜
[0072]
(处方)
[0073][0074][0075]
(制法)
[0076]
在离子交换水中加入双丙甘醇和氢氧化钾、n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸，加热而保持于70℃(水相)。将其它成分混合进行加热融解而保持于70℃(油相)。在水相中缓慢加入油相，全部加入结束后保持于该温度片刻而使反应发生。然后，用均质混合机均匀地乳化，一边充分搅拌一边冷却直到30℃。
[0077]
处方例2霜
[0078]
(处方)
[0079][0080]
(制法)
[0081]
在离子交换水中加入双丙甘醇和氢氧化钾、n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸，加热而保持于70℃(水相)。将其它成分混合进行加热融解而保持于70℃(油相)。在水相中加入油相而进行预乳化，用均质混合机均匀地乳化后，一边充分搅拌一边冷却直到30℃。
[0082]
处方例3乳液(皱纹改善剂、紧致改善剂、肌理改善剂、或皮肤水分量改善剂)
[0083]
(处方)
[0084][0085]
(制法)
[0086]
在少量的离子交换水中溶解羧基乙烯基聚合物(a相)。在剩下的离子交换水中加入聚乙二醇1500与三乙醇胺、n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸、凝血酸，加热溶解而保持于70℃(水相)。将其它成分混合进行加热融解而保持于70℃(油相)。在水相中加入油相进行预乳化，加入a相用均质混合机均匀乳化，乳化后一边充分搅拌一边冷却直到30℃。
[0087]
处方例4啫喱
[0088]
(处方)
[0089][0090]
(制法)
[0091]
将羧基乙烯基聚合物均匀地溶解于离子交换水，另一方面，将聚氧乙烯(50摩尔)油基醚溶解于酒精，添加于水相。接着，加入其它成分后用氢氧化钾、l-精氨酸使其中和而增稠。
[0092]
处方例5霜
[0093]
(处方)
[0094]
[0095][0096]
(制法)
[0097]
在离子交换水中加入双丙甘醇和氢氧化钾、n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸，将4-甲氧基水杨酸钾盐加热而保持于70℃(水相)。将其它成分混合进行加热融解而保持于70℃(油相)。在水相中缓慢加入油相，全部加入结束后在该温度保持片刻而使反应发生。然后，用均质混合机均匀地乳化，一边充分搅拌一边冷却直到30℃。
[0098]
处方例6乳液(皱纹改善剂、紧致改善剂、肌理改善剂、或皮肤水分量改善剂)
[0099]
(处方)
[0100][0101][0102]
(制法)
[0103]
在离子交换水中加入双丙甘醇、琥珀酰聚糖、氢氧化钾、n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸，加热而保持于70℃(水相)。将其它成分混合，加热融解而保持于70℃(油相)。一边将油相搅拌一边在其中缓慢加入水相，用均质混合机均匀地乳化。在乳化后一边充分搅拌一边冷却直到30℃。
[0104]
处方例7面膜
[0105]
(处方)
[0106]
(a相)
[0107]
双丙甘醇
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
5.0
[0108]
聚氧乙烯(60摩尔)硬化蓖麻油
ꢀꢀ
5.0
[0109]
(b相)
[0110][0111]
(c相)
[0112][0113]
(制法)
[0114]
将a相、b相、c相分别混合。c相加热而保持于70℃。在a相中加入b相进行混合。接着将其加入到c相中而充分混合后，冷却进行填充。
[0115]
处方例8霜
[0116]
(处方)
[0117][0118]
在本说明书中提及的全部文献的整体通过引用而并入到本说明书中。
[0119]
以下说明的本发明的实施例以仅例示作为目的，不限定本发明的技术范围。本发明的技术范围仅受专利权利要求书的记载限定。以不超出本发明的宗旨作为条件，可以进行本发明的变更例如本发明的构成要件的追加、删除和替换。
[0120]
实施例
[0121]
1.免疫组织化学染试验
[0122]
如下所述，在从获得了同意的被检者捐赠的皮肤组织涂抹试验组合物，进行了10天培养。使用培养后的皮肤组织通过免疫组织化学染试验进行了评价。
[0123]
[皮肤组织]
[0124]
部位：非曝光部(腹部)
[0125]
皮肤组织尺寸：1cm
×
1cm
[0126]
捐赠者：白人女性(40岁)
[0127]
[试验组合物]
[0128]
本发明的组合物：与上述处方例8同样地操作而制备出本发明的组合物。
[0129]
比较组合物(安慰剂)：不含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸，除此以外，与上述本发明的组合物同样地操作而制备出比较组合物。
[0130]
另外，以下显示在本试验中使用的n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸(和光纯药工业社)的结构。
[0131][0132]
[免疫组织化学染]
[0133]
试剂等
[0134]
一次抗体：
[0135]
anti-human collagen type i(rabbit)(抗人i型胶原(兔))
[0136]
anti-collagen type iii(rabbit)antibody(抗iii型胶原(兔)抗体)
[0137]
hyaluronic acid binding protein，bovine nasal cartilage，biotinylated(透明质酸结合蛋白，牛鼻软骨，生物素化)
[0138]
显底物：dab(3,3
’‑
二氨基联苯胺)(dako社制)
[0139]
对比染：苏木精溶液(富士
フイルム
和光純薬社制)
[0140]
将应用了试验组合物的皮肤组织用4％pfa固定，进行了石蜡封闭制作。组织切薄为5μm厚，进行了免疫组织化学染。简单来说，在脱石蜡处理、内源性过氧化物酶的失活处理、和封闭处理后，进行一次抗体的反应、采用显底物dab的显反应、和采用苏木精的对比染，进行了封入。
[0141]
将结果示于图1～3中。如图1和图2所示那样可知，通过含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的本发明的组合物的涂抹，从而促进i型胶原和iii型胶原两者的产生。此外，如图3所示那样可知，通过含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的本发明的组合物的涂抹，从而在表皮和真皮两者中促进透明质酸的产生。
[0142]
2.使用了表皮角质形成细胞的体外试验
[0143]
使用24孔板利用humedia培养基将人表皮角质形成细胞以2
×
104细胞/孔接种，一边进行培养直到细胞充分粘接一边静置24小时。
[0144]
1天后，与包含规定浓度的样本的humedia培养基置换而培养了2天。
[0145]
培养后，抽取培养上清液，用elisa(制品名：hyaluronic acid，elisa kit，qne(96孔))测定了透明质酸产生量。
[0146]
另外，作为样本，使用了n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸(培养基中浓度：0.00001％或0.0001％)，作为阴性对照使用了dmso(图4中“空白(dmso)”)，和作为阳性对照使用了视黄醇(图4中“ro”，培养基中浓度：0.01μm)。
[0147]
将结果示于图4中。结果作为相对于不包含n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的空白的透明质酸产生量100的相对值而计算出。此外，通过t检验验证了组间的显著性差异(p值的阈值0.05)。
[0148]
如图4所示那样可知，通过n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的添加，从而表皮角质形成细胞中的透明质酸产生以显著性差异(p＜0.01或p＜0.001)被促进。此外可知，n-苯甲酰甘氨酰
甘氨酸与视黄醇(p＜0.01)相比，具有同等或更优异的透明质酸产生促进效果。
[0149]
3.使用了成纤维细胞的体外试验
[0150]
使用24孔板利用含有10％fbs的dmem培养基将人成纤维细胞以6
×
104细胞/孔接种，一边进行培养直到细胞充分粘接为止一边静置6小时。降低血清浓度通过含有0.5％fbs的dmem培养基进行了培养。
[0151]
1天后，与包含规定浓度的样本的含有0.5％fbs的dmem培养基置换而培养了3天。
[0152]
抽取培养上清液，用elisa(制品名：hyaluronic acid，elisa kit，qne(96孔))测定了透明质酸产生量。
[0153]
另外，作为样本，使用了n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸(培养基中浓度：0.0001％或0.001％)，作为阴性对照使用了dmso(图5中“空白(dmso)”)，和作为阳性对照使用了5％fbs。
[0154]
将结果示于图5中。结果作为相对于不包含n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的空白的透明质酸产生量100的相对值而计算出。此外，通过t检验验证了组间的显著性差异(p值的阈值0.05)。
[0155]
如图5所示那样可知，n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸以与5％fbs同等的显著性差异(都为p＜0.001)而具有促进透明质酸产生的效果。
[0156]
由以上结果可知，包含n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸的本发明的组合物具有促进i型胶原和iii型胶原、以及透明质酸的产生的效果，因此对于皱纹、紧致、肌理、和皮肤水分量的改善是有用的。这些是在本发明中首次被发现的认识。
[0157]
产业可利用性
[0158]
本发明的透明质酸产生促进剂、胶原产生促进剂、和其它组合物由于具有优异的胶原产生促进作用和透明质酸产生作用，对于皱纹、紧致、肌理、和皮肤水分量的改善是有用的，因此可以在与化妆、美容、医药等相关的各种领域中利用。

技术特征：

1.一种透明质酸产生促进剂，含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分。2.一种胶原产生促进剂，含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分。3.根据权利要求1所述的透明质酸产生促进剂，用于促进表皮细胞、表皮角质形成细胞、真皮细胞、和/或成纤维细胞中的透明质酸的产生。4.根据权利要求2所述的胶原产生促进剂，用于促进i型胶原和/或iii型胶原的产生。5.一种用于促进透明质酸和/或胶原的产生的组合物，含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分。6.根据权利要求5所述的组合物，是用于由透明质酸或胶原的产生能力的降低引起的状态或疾病的剂。7.根据权利要求5或6所述的组合物，是皮肤外用剂。8.根据权利要求5～7中任一项所述的组合物，是皱纹改善剂、紧致改善剂、肌理改善剂、或皮肤水分量改善剂。9.一种美容方法或非的方法，包括：应用含有n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分的透明质酸产生促进剂或胶原产生促进剂。10.n-苯甲酰甘氨酰甘氨酸用于促进透明质酸和/或胶原的产生的用途。

技术总结

本公开的目的是提供新的透明质酸产生促进剂、胶原产生促进剂、用于促进透明质酸产生和/或胶原的产生的组合物、皱纹、紧致、肌理、或皮肤水分量改善剂、以及用于促进透明质酸的产生和/或胶原的产生的美容或非的方法。更具体而言，通过使用N-苯甲酰甘氨酰甘氨酸作为有效成分，从而能够制备透明质酸产生促进剂、胶原产生促进剂、以及用于促进透明质酸的产生和/或胶原的产生的组合物、皱纹、紧致、肌理、或皮肤水分量改善剂，在用于促进透明质酸的产生和/或胶原的产生的美容或非的方法中使用。用。