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一种真菌基因敲除双荧光筛选方法[发明专利]

专利名称：一种真菌基因敲除双荧光筛选方法专利类型：发明专利

发明人：陶芳，赵凯，项芳芝，赵倩倩

申请号：CN201910417135.0

申请日：20190520

公开号：CN110117609A

公开日：

20190813

专利内容由知识产权出版社提供

摘要：本发明公开了一种真菌基因敲除双荧光筛选方法，涉及真菌基因敲除技术领域，该方法包括扩增pYES2载体DNA模板中的2.9‑kb URA3‑2micro2_origin片段并将该片段插入pCAMBIA1300载体，获得pUM载体；然后分别扩增tef1启动子、eGFP基因、PgpdA启动子、ble抗性基因、RFP 基因、TtrpC终止子、目标基因x的上游同源臂、目标基因x的下游同源臂；最终构建目标基因x的敲除载体pKO‑x；将pKO‑x转化入农杆菌感受态细胞，通过农杆菌介导方法转化真菌，先进行抗生素筛选，获得抗性转化子，将抗性转化子再进行荧光显微镜检测，若只发红荧光，则为目标转化子，既有绿荧光也有红荧光者为异位整合的转化子，无荧光者为野生型；本发明提供的方法能够有效将目标转化子与异位整合的转化子区分开来。

申请人：安徽农业大学

地址：230031 安徽省合肥市长江西路130号

国籍：CN

代理机构：安徽汇朴律师事务所

代理人：汪蕙

本文发布于:2024-09-22 21:17:46，感谢您对本站的认可！

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