(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010242767.0
(22)申请日 2020.03.31
(83)生物保藏信息
CCTCC NO:M20191071 2019.12.20
(71)申请人 石河子大学
地址 832003 新疆维吾尔自治区石河子市
北四路211号石河子大学
(72)发明人 孙燕飞 王琦琦 孙杰 刘思洋
李杨 褚贵新
(74)专利代理机构 北京高沃律师事务所 11569
代理人 瞿晓晶
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
C05G 3/00(2020.01)
C12R 1/01(2006.01)
(54)发明名称
菌株glutamicibacter soli 1-3-3的耐盐 促生效果及其应用
(57)摘要
本发明提供了菌株glutamicibacter soli
glutamicibacter soli 1-3-3的保藏编号为
CCTCC M 20191071，NCBI登录号为：MK016481。本
发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3具
有固氮、解磷，解钾，产ACC脱氨酶的能力；本发明
所述的菌株glutamicibacter soli 1-3-3对不
同植物均有促生效果。权利要求书1页 说明书7页序列表2页 附图2页CN 111423995 A 2020.07.17
C N 111423995
A
1.一株耐盐促生菌g l u t a m i c i b a c t e r s o l i 1-3-3，其特征在于，菌株glutamicibactersoli 1-3-3的保藏编号为CCTCC M 20191071。
2.根据权利要求1所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3，其特征在于，所述菌株glutamicibactersoli 1-3-3的16S rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种固氮、解磷和解钾菌剂，其特征在于，所述菌剂的组分中包括权利要求1或2所述菌株glutamicibactersoli 1-3-3。 4.一种产ACC脱氨酶菌剂，其特征在于，所述菌剂的组分中包括权利要求1或2所述菌株glutamicibactersoli 1-3-3。
5.一种促进作物生长菌剂，其特征在于，所述菌剂的组分中包括权利要求1或2所述菌株glutamicibactersoli 1-3-3。
6.根据权利要求5所述促进作物生长菌剂，其特征在于，所述作物包括拟南芥、小麦和棉花。
7.根据权利要求6所述促进作物生长菌剂，其特征在于，当所述作物为拟南芥时，所述菌株glutamicibactersoli 1-3-3能提高拟南芥的耐盐性，促进叶片生长；当所述作物为小麦时，所述菌株glutamicibactersoli 1-3-3促进小麦根生长，增加鲜重，促进脯氨酸积累；当所述作物为棉花时，所述菌株glutamicibactersoli 1-3-3增加棉花蕾期和花铃期鲜重、干重、株高及果枝数，并能提高吐絮期棉花产量。
权 利 要 求 书1/1页CN 111423995 A
菌株glutamicibacter soli 1-3-3的耐盐促生效果及其应用
技术领域
[0001]本发明属于耐盐促进植物生长的微生物技术领域，具体涉及菌株glutamicibacter soli 1-3-3的耐盐促生效果及其应用。
背景技术
[0002]新疆属于亚欧大陆腹地，温带大陆性气候，夏季降雨量少，蒸发量大，导致新疆土壤呈现出不同程度的盐渍化。土壤盐渍化严重制约经济作物的生长，且易引发病虫害，降低农产品的产量及品质，成为制约农业发展的重要因素之一。目前农业对盐渍化土壤的改良方法主要包括物理(深耕，灌溉排盐等)，化学(土壤改良剂)，生物改良法(盐生植物，微生物改良)。物理和化学改良法具有较多的弊端，限制因素因素较多，物理改良消耗成本大，而化学改良如若改良剂的使用不规范，极有可能对土壤造成二次污染，而生物改良是一种环境友好型，且持久有效的改良方法，能通过生物的生长代谢，对盐渍化土壤进行改良。盐生植物种植能吸收土壤中的部分盐分，缓解土壤盐渍化造成的压力，而微生物制剂不仅能改变土壤团粒结构，增加土壤肥力，还能与经济作物互作，提高作物的耐盐性，促进植物生长，增加产量，从而提高经济效益。寻适应新疆本土生态环境且行之有效的微生物菌株已成为农业生产中较为重要的一部分。 发明内容
[0003]有鉴于此，本发明的目的在于提供一株耐盐促生菌glutamicibacter soli1-3-3，该菌株具有固氮、解磷、解钾、产ACC脱氨酶等作用，可用于多种作物的促生。
[0004]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0005]本发明提供了一株耐盐促生菌g l u t a m i c i b a c t e r s o l i 1-3-3，菌株glutamicibacter soli 1-3-3的保藏编号为CCTCC M 20191071。
[0006]优选的，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3的16S rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]本发明还提供了一种固氮、解磷和解钾菌剂，所述菌剂的组分中包括所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3。
[0008]本发明还提供了一种产ACC脱氨酶菌剂，所述菌剂的组分中包括所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3。
[0009]本发明还提供了一种促进作物生长菌剂，所述菌剂的组分中包括所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3。
[0010]优选的，所述作物包括拟南芥、小麦和棉花。
[0011]优选的，当所述作物为拟南芥时，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3能提高拟南芥的耐盐性，促进叶片生长；当所述作物为小麦时，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3促进小麦根生长，增加鲜重，促进脯氨酸积累；当所述作物为棉花时，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3增加棉花蕾期和花铃期鲜重、干重、株高及果枝数，并能提高
吐絮期棉花产量。当所述作物为拟南芥时，施加0、50、100mM NaCl胁迫，本发明所述菌株glutamicibacter soli1-3-3能提高其耐盐性，促进叶片生长；当所述作物为小麦时，施加0、100、2000mM NaCl胁迫，本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3下促进其根生长，增加鲜重，促进脯氨酸积累；当所述作物为棉花时，本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3增加其蕾期和花铃期鲜重，干重，株高以及果枝数，并能提高吐絮期棉花产量。[0012]相比于现有技术，本发明具有以下有益效果：(1)本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3，具有固氮、解磷和解钾能力，可促进作物对N素吸收以及增加土壤中可利用磷钾含量；
[0013](2)所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3具有产ACC脱氨酶的能力；
[0014](3)所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3，可在不同盐胁迫情况下，对拟南芥、小麦和棉花都具有显著的促生作用，表现为当所述作物为拟南芥时，施加0、50、100mM NaCl 胁迫，本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3可提高其耐盐性，促进叶片生长；当所述作物为小麦时，施加0、100、2000m
M NaCl胁迫，本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3可促进其根生长，增加鲜重，促进脯氨酸积累；当所述作物为棉花时，本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3可增加其蕾期和花铃期棉花的鲜重，干重，增加株高及果枝数，提高吐絮期产量。
[0015]生物保藏信息
[0016]菌株glutamicibacter soli 1-3-3，于2019年12月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，具体地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏编号为CCTCC M 20191071。
附图说明
[0017]图1为glutamicibacter soli 1-3-3菌落形态及革蓝氏染结果图；
[0018]图2为glutamicibacter soli 1-3-316SrDNA序列系统发育树图；
[0019]图3为glutamicibacter soli 1-3-3对拟南芥生长的影响图；
[0020]图4为接种glutamicibacter soli 1-3-3的菌液天65后(花铃期)，对棉花生长的影响图，其中A表示接种glutamicibacter soli 1-3-3处理后的棉花地上部分，B表示对照组棉花地上部分；a表示接种glutamicibacter soli 1-3-3处理后的棉花地下部分，b表示对照组棉花地下部分。
具体实施方式
[0021]本发明提供了一株耐盐促生菌glutamicibacter soli 1-3-3，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3的保藏编号为CCTCC M 20191071。
[0022]本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3优选自新疆碱蓬根际的土壤中筛选得到，其筛选方法，优选包括：取5g土样于无菌水中，摇床室温培养30min，静置30s，将上清进行梯度稀释，取稀释了10-2、10-3、10-4、10-5倍的菌液各100μL，采用稀释涂布法涂布于含有80g/L NaCl的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃倒置培养24h，挑取分离纯化获得的耐盐菌株单菌落，接种于牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基中，4℃保存备用。
[0023]本发明将利用所述筛选方法筛选得到的耐盐菌株，使用斜面保藏，使用形态学及
分子生物学进行菌株鉴定。本发明所述菌株glutamicibacter soli1-3-3菌落如图1所示，呈圆形，黄，质地稀薄，边缘规则，表面光滑，为革兰氏阳性杆菌。
[0024]本发明优选使用CTAB法提取所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3的16S rDNA，使用引物27F(SEQ ID NO.2)：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3和1492R(SEQ ID NO.3)：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′对菌株16S rDNA进行PCR扩增。本发明所述PCR扩增的反应体系优选
为：DNA模板1μL，2×Taq PCR Master Mix 10μL，5μmol/L引物27F 1μL，5μmol/L1492R 1μL，ddH2O 12μL，共25μL。本发明所述PCR扩增的条件为：94℃5min；94℃ 45s，55℃ 45s，72℃ 1min，共30个循环；72℃ 10min。
[0025]本发明将扩增得到的序列16S rDNA送至上海生工进行测序，测序后序列为1445bp，如SEQ ID NO.1所示。本发明将所述序列在EzBiocloud数据库进行比对，并构建所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3的系统发育树，结果如图2所示。本发明所述系统发育树优选通过Mega7软件，使用最大似然法构建所述系统进化树，结果显示，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3与模式菌株Glutamicibacter soli SYB2(EF660748)序列相似度为97.96％，鉴定属于Glutamicibacter soli。本发明已将所述菌株的序列上传至NCBI 中，序列登录号为：MK016481。
[0026]本发明还提供了一种固氮、解磷和解钾菌剂，所述菌剂的组分中包括所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3。
[0027]本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3具有固氮、解磷和解钾的功能，可将其应用于制备具有相应功能的菌剂。本发明对所述菌剂的制备方法并没有特殊限定，利用本领域的常规方法即可。
[0028]本发明还提供了一种产ACC脱氨酶菌剂，所述菌剂的组分中包括所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3。本发明所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3具有产ACC 脱氨酶活性，可用于制备产ACC脱氨酶菌剂。
本发明对所述菌剂的制备方法并没有特殊限定，利用本领域的常规方法即可。
[0029]本发明还提供了一种促进作物生长菌剂，所述菌剂的组分中包括所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3。
[0030]本发明所述作物优选包括拟南芥、小麦和棉花。在本发明中，当所述作物为拟南芥时，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3能提高拟南芥的耐盐性，促进叶片生长；当所述作物为小麦时，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3促进小麦根生长，增加鲜重，促进脯氨酸积累；当所述作物为棉花时，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3增加棉花蕾期和花铃期鲜重、干重、株高及果枝数，并能提高吐絮期棉花产量。在本发明中，当所述作物为拟南芥时，优选施加0、50、100mM NaCl模拟胁迫，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3能提高其耐盐性，促进叶片生长；当所述作物为小麦时，优选施加0和200mM NaCl模拟胁迫，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3可促进其根生长，增加鲜重，促进脯氨酸积累；当所述作物为棉花时，在自然生长条件下，所述菌株glutamicibacter soli 1-3-3可提高蕾期及花铃期棉花鲜重，干重，增加株高和果枝数，提高吐絮期棉花产量。
[0031]下面结合实施例对本发明提供的耐盐促生菌glutamicibacter soli 1-3-3及其应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0032]实施例1
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