[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101470108A [43]公开日2009年7月1日
[21]申请号200710125463.0[22]申请日2007.12.24
[21]申请号200710125463.0
[71]申请人深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公
司
地址518057广东省深圳市南山区高新技术产业
园区科技南十二路迈瑞大厦
[72]发明人刘兵 许文娟 孟祥平 乔岩梅 刘牧龙 [74]专利代理机构深圳鼎合诚知识产权代理有限公司代理人罗瑶
[51]Int.CI.G01N 33/48 (2006.01)G01N 21/84 (2006.01)C12Q 1/02 (2006.01)
权利要求书 2 页 说明书 9 页 附图 5 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明公开了一种对白细胞进行分类的试剂，
包括a.至少两种阳离子表面活性剂；b.至少一种带
疏水基团及阴离子基团的有机化合物；c.能够将pH
值调整在2～8范围内的缓冲剂。本发明还公开了采
用上述试剂对白细胞进行分类的方法。利用本发明
的试剂及方法可快速溶解红细胞，实现在同一个通
道中将白细胞进行五分类，反应可以在10～40℃的
温度条件下进行并且只需检测两个角度的散射光信
号即可对白细胞进行五分类检测。
200710125463.0权 利 要 求 书第1/2页
1.一种对白细胞进行分类的试剂，其特征在于：所述试剂包括
a、可以溶解红细胞，且使白细胞的细胞膜部分损伤的至少两种阳离子表面活性剂；
b、可与白细胞内阳离子结合，使白细胞之间产生形态差异的至少一种带疏水基团及阴离子基团的有机化合物；
c、能够将pH值调整在2～8范围内的缓冲剂。
2、根据权利要求1所述的一种对白细胞进行分类的试剂，其特征在于：所述对白细胞进行分类是指将白细胞分为与淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞以及嗜碱性粒细胞分别对应的五个集团。
3、根据权利要求2所述的一种对白细胞进行分类的试剂，其特征在于：所述阳离子表面活性剂为季铵盐型阳离子表面活性剂。
4、根据权利要求3所述的一种对白细胞进行分类的试剂，其特征在于：所述阳离子表面活性剂为具有下式所示结构的季铵盐型阳离子表面活性剂，
其中，R1为C原子数6～16的烷基或链烯基，
R2及R3为C原子数1～4的烷基或链烯基，
R4为C原子数1～4的烷基或链烯基或苄基，
X为卤素原子。
5、根据权利要求2所述的一种对白细胞进行分类的试剂，其特征在于：所述有机化合物的疏水基团选自芳香族组成的基团、C原子数6以上的烃基形成的基团或者C原子数大于6的杂环，所述有机化合物的阴离子基团为羧基或磺酸基。
6、根据权利要求2所述的一种对白细胞进行分类的试剂，其特征在于：所述有机化合物为酸性素。
200710125463.0权 利 要 求 书 第2/2页
7、根据权利要求2所述的一种对白细胞进行分类的试剂，其特征在于：所述试剂包括醇类，并且所述醇类占所述试剂的体积百分比浓度为0.1～10％。
8、根据权利要求7所述的一种对白细胞进行分类的试剂，其特征在于：所述醇类为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或2-苯氧乙醇。
9、一种对白细胞进行分类的方法，所述方法包括将权利要求1～8中任意一项所述的白细胞分类试剂与血样混合后测定细胞的大小和形态信息。
10、根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法包括在10～40℃的温度条件下，将所述白细胞分类试剂与血样按10～100:1的比例混合12～30s后，通过低角度和高角度两种散射光分别测定细胞的大小和形态信息，所述低角度散射光的测定角度为1～5度，高角度散射光的测定角度为6～20度。
200710125463.0说 明 书第1/9页
一种对白细胞进行分类的试剂和方法
技术领域
本发明涉及一种细胞分类试剂及对细胞进行分类的方法，特别是涉及一种用于对血液中白细胞进行分类的试剂以及利用该试剂对血液中白细胞进行分类检测的方法。
背景技术
用患者的全血对白细胞进行分类计数，为临床诊断和提供依据，具有十分重要的意义。
迄今为止，有关对白细胞进行分类的装置和方法发表了许多。这些装置是将血液用溶血剂或染剂处理，基于处理后的细胞的物理学、电学或光学特性来对白细胞进行分类计数。
例如，有的分类方法采用染剂对白细胞进行染，检测染后白细胞发出的荧光来对白细胞进行分类；有的分类方法采用溶血剂对白细胞进行特殊处理，检测其电信号或光散射信号，从而对白细胞进行分类。 现有技术一公开了使用白细胞四分类测定用试剂和嗜碱细胞测定用试剂，将白细胞五分类的方法。白细胞四分类测定用试剂包括至少一种离子表面活性剂、至少一种带负电的有机化合物、一种非离子表面活性剂和缓冲剂，其与第一份血样作用，将血细胞分成淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞和嗜碱细胞加中性粒细胞四个类；嗜碱细胞测定用试剂，与第二份血样作用，将血细胞分成嗜碱细胞和其他细胞类。综合两种结果将白细胞五分类。检测方法为两角度激光散射法。
现有技术二提出了通过两角度光散射使用白细胞四分类试剂和嗜碱细胞测定试剂将白细胞五分类和计数的方法，四分类试剂包括至少一种离子表面活性剂用以溶解红细胞和损伤白细胞膜，至少一种带负电的有机化合物用以与白细胞中带正电荷的物质结合使白细胞形态发生变化，一种非离子表面活性剂和用以调pH的缓冲液。嗜碱细胞测定试剂包括至少一种聚合度3-10的聚氧乙烯类非离子表面活性剂，至少一种阳离子表面活性剂，一种
200710125463.0说 明 书 第2/9页缓冲液调pH至2.5-4.0。在第一份血样中加入第一试剂将白细胞分成四
个：淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞、中性粒和嗜碱细胞；在第二份血样中加入第二试剂，根据细胞的形态和大小，用来区分白细胞中的嗜碱细胞，从而获得白细胞五分类结果。
现有技术三是关于对白细胞四分类的试剂，这种试剂包括至少一种离子表面活性剂，可以是阳离子或两性表面活性剂中一种，用来溶解红细胞同时部分损伤白细胞膜；至少含一种带阴离子的有机化合物，通过与白细胞上带正电荷的组分结合使各类白细胞形态差异显现；一种非离子表面活性剂和用来调整p H值的缓冲剂。检测方法可为两角度激光散射法。 现有技术四提出使用含至少一种阴离子或两性表面活性剂短时间内溶解红细胞，同时维持白细胞在一定时间内保持或接近原始状态，通过收集前角光散射和侧向光散射信号对白细胞进行四分类。
现有技术五提出了一种从全血样本中快速分离、分析白细胞的方法和试剂系统。该溶血剂系统由第一试剂选自甲酸、乙酸及两者的混合物和第二试剂抑制剂组成。试剂使红细胞溶解并使白细胞发生微小改变以使可通过仪器对细胞进行五分类。其优点和独特性在于其惊人的溶血速度并能对白细胞进行进一步修饰。溶血后加入抑制剂，防止进一步的溶血及白细胞明显的变化。血样经过处理后能保持细胞的免疫化学特性。检测方法可为两角度光散射法，或直流阻抗和射频阻抗法，或直流阻抗和光散射法。 现有技术六公开了一种对白细胞进行五分类的溶血剂和方法。溶血剂包括芳香族氧乙醇、pK值接近8.5的有机缓冲剂、非离子去垢剂。首先，血样与稀释液混合，加入所述溶血剂溶解红细胞，在至少30秒内不影响白细胞的光散射特性，通过收集四个角度光散射信号，从而对白细胞进行五分类。
现有技术七是通过一种pH2.6-4的酸性溶解剂对红细胞快速溶解和白细胞保持完整后加入抑制剂可以对白细胞进行五分类的方法，其检测系统可以使用光散射也可以使用射频/直流阻抗法。
但是，以上现有技术中还存在许多不足。
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