(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202111606999.0
(22)申请日 2021.12.27
(71)申请人 北京贝尔医疗设备有限公司
地址 102629 北京市大兴区仲景西路15号
院
(72)发明人 赵丽娜 朱明月
(74)专利代理机构 北京悦和知识产权代理有限
公司 11714
代理人 司丽春 刘青霞
(51)Int.Cl.
G01N 33/543(2006.01)
G01N 33/573(2006.01)
G01N 33/68(2006.01)
G01N 33/532(2006.01)
G01N 21/76(2006.01)
(54)发明名称
备方法和应用
(57)摘要
本发明实施例涉及一种磁微粒吖啶酯化学
发光检测试剂盒及其制备方法、检测方法，涉及
检测领域，包括sFlt ‑1抗体检测试剂和/或PIGF 抗体检测试剂；还包括预激发液和激发缓冲液；
所述sFlt ‑1抗体检测试剂包括吖啶酯标记的第
一sFlt ‑1抗体、包被有第二sFlt ‑1抗体的磁微
粒；吖啶酯标记的sFlt ‑1抗体中第一sFlt ‑1抗体
与吖啶酯摩尔比为1：(5‑15)；所述PIGF抗体检测
试剂包括吖啶酯标记的第一PIGF抗体、包被有第
二PIGF抗体的磁微粒；吖啶酯标记的PIGF抗体中
第一PIGF抗体与吖啶酯摩尔比为1：(5‑15)。本发
明所述方法吖啶酯与抗体偶联的标记方法简单，
重复性较好，并且偶联效率高，发光信号强，便于
大规模应用。以该方法可以得到灵敏度更高、线
性范围广。权利要求书3页 说明书16页CN 114295827 A 2022.04.08
C N 114295827
A
1.一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括sFlt‑1抗体检测试剂和/或PIGF抗体检测试剂；还包括预激发液和激发缓冲液；
所述sFlt‑1抗体检测试剂包括吖啶酯标记的第一sFlt‑1抗体、包被有第二sFlt‑1抗体的磁微粒；吖啶酯标记的sFlt‑1抗体中sFlt‑1抗体与吖啶酯摩尔比为1：(5‑15)；
所述第一、第二sFlt‑1抗体分别识别可溶性fms样酪氨酸激酶‑1的不同表位；
所述PIGF抗体检测试剂包括吖啶酯标记的第一PIGF抗体、包被有第二PIGF抗体的磁微粒；吖啶酯标记的PIGF抗体中PIGF抗体与吖啶酯摩尔比为1：(5‑15)；
所述第一、第二PIGF抗体分别识别胎盘生长因子的不同表位；
所述预激发液包括无机酸和氧化剂，且pH＜2；
所述激发缓冲液包括无机碱和增强剂，且缓冲液的pH>13；
所述增强剂为季铵盐型阳离子表面活性剂，选自八烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三化铵、十四烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基三化铵和二十二烷基三甲基氯化铵中的一种或几种；可选地为十六烷基三甲基溴化铵。
2.根据权利要求1所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒，其特征在于，吖啶酯标记的第一sFlt‑1抗体中，第一sFlt‑1抗体与吖啶酯摩尔比为1：10；
和/或，吖啶酯标记的第一sFlt‑1抗体中，还包括包括用于定容吖啶酯标记的第一sFlt‑1抗体的标记缓冲液；可选地吖啶酯标记的第一sFlt‑1抗体的浓度为0.5ug/mL，可选地，标记缓冲液为磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液，可选地为0.1mol/L的碳酸盐缓冲液，pH8.2；
和/或，吖啶酯标记的第一PIGF抗体中，第一PIGF抗体与吖啶酯摩尔比为1：10；
和/或，吖啶酯标记的第一PIGF抗体中，还包括用于定容吖啶酯标记的第一PIGF抗体的标记缓冲液；可选地吖啶酯标记的第一PIGF抗体的浓度为0.25ug/mL，可选地，标记缓冲液为磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液，可选地为0.1mol/L的碳酸盐缓冲液，pH8.2；
和/或，包被有第二sFlt‑1抗体的磁微粒中，磁微粒和第二sFlt‑1抗体的质量比为100：(4～8)；可选地，还包括用于定容包被有第二sFlt‑1抗体的磁微粒的MES缓冲液，可选地，第二sFlt‑1抗体的磁微粒的浓度为0.5mg/mL；可选地，MES缓冲液的浓度为0.02mol/L，pH4.5‑5.5；
和/或，包被有第二PIGF抗体的磁微粒中，磁微粒和第二PIGF抗体的质量比为100：(4～8)；可选地，还包括用于定容包被有第二PIGF抗体的磁微粒的MES缓冲液，可选地，第二PIGF 抗体的磁微粒的浓度为0.5mg/mL；可选地，MES缓冲液的浓度为0.02mol/L，pH4.5‑5.5。
3.根据权利要求1所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述预激发液中，所述酸为硝酸或盐酸或硫酸或硼酸；所述氧化剂为过氧化氢或过氧化脲；可选地，所述预激发液中，所述酸的浓度为0.01‑0.18M，所述氧化剂的质量浓度为0.1‑2.0％；进一步可选地，所述预激发液中包括0.07M硝酸和0.6wt％过氧化氢，pH为1.1；
和/或，所述激发缓冲液中，所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾；可选地，所述缓冲液中，所述碱的浓度为0.2‑0.8M，所述增强剂的质量浓度为0.2‑2.0％；进一步可选地，所述缓冲液中包括0.5M氢氧化钾和0.478wt％十六烷基三甲基溴化铵，pH为13.5。
4.一种权利要求1至3任一所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的制备方法，其特
征在于，包括如下步骤：
吖啶酯标记的第一sFlt‑1抗体的制备方法包括：标记缓冲液中加入第一sFlt‑1抗体和吖啶酯溶液，混匀，室温避光震荡反应，透析，加入标记缓冲液定量，获得吖啶酯标记的第一sFlt‑1抗体试剂；
包被有第二sFlt‑1抗体的磁微粒的制备方法包括：磁微粒悬浮液中加入EDC水溶液混悬30‑60min，磁分离去上清，重悬，加入第二sFlt‑1抗体包被，混悬16‑20h；磁分离去上清，定量，获得包被有第二sFlt‑1抗体的磁微粒试剂；
吖啶酯标记的第一PIGF抗体的制备方法包括：标记缓冲液中加入第一PIGF抗体和吖啶酯溶液，混匀，室温避光震荡反应，透析，加入标记缓冲液定量，获得吖啶酯标记的第一PIGF 抗体试剂；优选地，标记缓冲液为0.1mol/L的碳酸盐缓冲液，pH8.2；
包被有第二PIGF抗体的磁微粒的制备方法包括：磁微粒悬浮液中加入EDC水溶液混悬30‑60min，磁分离去上清，重悬，加入第二PIGF抗体包被，混悬16‑20h；磁分离去上清，定量，获得包被有第二PIGF抗体的磁微粒试剂。
5.根据权利要求4所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，吖啶酯标记的第一sFlt‑1抗体的制备方法和吖啶酯标记的第一PIGF抗体的制备方法中相互独立地包括：室温避光震荡反应的时间为10‑120分钟；
和/或，标记缓冲液为磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液，可选地为0.1mol/L的碳酸盐缓冲液，pH8.2；
和/或，透析方法包括：将反应混合物装入透析袋中，2‑8℃避光透析，2h/次更换一次透析液，可选地透析液为磷酸盐缓冲液溶液，可选地其浓度为0.02mol/L。
6.根据权利要求4或5所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包被有第二sFlt‑1抗体的磁微粒的制备方法、包被有第二PIGF抗体的磁微粒的制备方法中相互独立地包括：每100g
磁微粒对应加入0.5‑1mL的浓度为10mg/mL的EDC水溶液；可选地，磁微粒悬浮液采用MES缓冲液重悬磁微粒获得；可选地，重悬或定量时采用MES缓冲液；可选地，MES缓冲液的浓度为0.02mol/L，pH4.5‑5.5；可选地，定量浓度为0.5mg/mL；可选地，磁微粒悬浮液或重悬液中，每100g磁微粒对应10mL的MES缓冲液；可选地，混悬为室温混悬。
7.根据权利要求4所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，预激发液的制备方法包括：将纯化水、浓硝酸和30％双氧水混合，定容，搅拌混匀后，过滤得预激发液；预激发液的pH为1.10，其中各组分的浓度为：0.07M硝酸和0.6wt％过氧化氢。
8.根据权利要求4所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，激发缓冲液的制备方法包括：将纯化水、增强剂混合，溶解，加入氢氧化钾，溶解，定容，过滤得激发缓冲液；可选地，激发缓冲液的pH为13.5，可选地，激发缓冲液中氢氧化钾浓度为0.5M；可选地，增强剂为十六烷基三甲基溴化铵，可选地其质量分数为0.478wt％。
9.一种磁微粒吖啶酯化学发光检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、加20体积份的的校准品、质控品或待测标本至检测管中；
S2、加50体积份的包被有抗体的磁微粒至检测管中；
S3、加50体积份的吖啶酯标记的抗体至检测管中；
S4、混匀后，37±0.5℃温育15分钟；
S5、加300体积份的清洗液至检测管中，混匀；
S6、磁分离去上清；
S7、重复步骤S5、S6，至少两遍；
S8、加入预激发液及激发缓冲液至检测管中，预激发液及激发缓冲液的加入量为200体积份；
S9、1s后检测发光强度；
其中，当定量检测样本中的可溶性fms样酪氨酸激酶‑1时，步骤S2中抗体为第二sFlt‑1抗体，步骤S3中抗体为第一sFlt‑1抗体；当定量检测样本中的胎盘生长因子时，步骤S2中抗体为第二PIGF抗体，步骤S3中抗体为第一PIGF抗体；
预激发液与激发缓冲液的体积比为2∶5‑5∶2；可选地为1∶1；
可选地，还包括：计算可溶性fms样酪氨酸激酶‑1与胎盘生长因子的比值，用于作为判断早期癫痫的依
据。
10.一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒在制备检测早期癫痫或先兆子痫药物中的应用，其特征在于，采用权利要求1至3任一所述的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒或权利要求5至8任一所述的制备方法制备的磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒。
磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用
技术领域
[0001]本发明涉及检测领域，特别涉及一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒、磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的制备方法、磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒的检测方法和磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒在制备检测早期癫痫或先兆子痫药物中的应用。背景技术
[0002]公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]子痫前期是妊娠期常见的并发症，目前全球发病率约为3‑5％。同时，子痫前期是孕产妇死亡的主要原因之一，约42％的孕产妇死亡由子痫前期导致。此外，全球约15％的早产亦由子痫前期导致。
[0004]子痫前期的基本病理生理变化为血管内皮细胞受损、全身细小动脉痉挛，继而可能导致全身各系统、脏器损伤，导致一系列严重并发症，严重威胁母婴健康。目前子痫前期的方法主要为对症，包括解痉、降压、利尿、合理扩容、终止妊娠；然而，这些方法并不能从根本上子痫前期。只有终止妊娠才能解除疾病对母体的短期危害。如果能在孕早期识别子痫前期风险并对高危患者予以预防，可能是降低孕产妇不良结局的途径。发明内容
[0005]发明目的
[0006]本发明的目的在于提供一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒及其制备方法、检测方法，本发明根据双抗体夹心法实验原理，利用磁微粒及吖啶酯化学发光免疫分析技术，建立一种定量测定血清中可溶性fms样酪氨酸激酶‑1(sFlt ‑1)及胎盘生长因子(PlGF)含量的检测方法。由于吖啶酯化学发光免疫技术是一种非常精确的定量检测，使检测确率更高，而一般免疫学检测的准确率明显低于吖啶酯发光免疫技术的结果，且时间长，不方便。
[0007]解决方案
[0008]为实现本发明目的，第一方面，本发明实施例提供了一种磁微粒吖啶酯化学发光检测试剂盒，包括sFlt ‑1抗体检测试剂和/或PIGF抗体检测试剂；还包括预激发液和激发缓冲液；
[0009]所述sFlt ‑1抗体检测试剂包括吖啶酯标记的第一sFlt ‑1抗体、包被有第二sFlt ‑1抗体的磁微粒；吖啶酯标记的sFlt ‑1抗体中sFlt ‑1抗体与吖啶酯摩尔比为1：(5‑15)；
[0010]所述第一、第二sFlt ‑1抗体分别识别可溶性fms样酪氨酸激酶‑1的不同表位；
[0011]所述PIGF抗体检测试剂包括吖啶酯标记的第一PIGF抗体、包被有第二PIGF抗体的磁微粒；吖啶酯标记的PIGF抗体中PIGF抗体与吖啶酯摩尔比为1：(5‑15)；
[0012]所述第一、第二PIGF抗体分别识别胎盘生长因子的不同表位；
[0013]所述预激发液包括无机酸和氧化剂，且pH＜2；
[0014]所述激发缓冲液包括无机碱和增强剂，且缓冲液的pH>13；
说 明 书1/16页CN 114295827 A
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