(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710346988.0
(22)申请日 2017.05.16
(71)申请人 山东省海洋生物研究院
地址 266000 山东省青岛市崂山区游云路7
号
(72)发明人 李莉 王晓红
(74)专利代理机构 青岛申达知识产权代理有限
公司 37243
代理人 蒋遥明
(51)Int.Cl.
A23K 50/80(2016.01)
A23K 10/18(2016.01)
A23K 10/30(2016.01)
A23K 20/163(2016.01)
A23K 20/174(2016.01)
A01K 61/50(2017.01)
(54)发明名称一种用于贝类育苗的微生物活菌饵料及其生产方法(57)摘要一种用于贝类育苗的微生物活菌饵料，按照如下步骤制备：(1)根据贝类苗种生长发育的营养需求和摄食特点，选择复合微生物菌；(2)将营养物质用研磨机研磨成细粉末状，放入水中煮沸10分钟，冷却后即得营养液；(3)将微生物活菌饵料培养用水、所需使用的容器及气泡石用次氯酸消毒并调节pH值；所述培养用水的盐度采用适宜于贝类苗种生长的盐度范围；(4)将步骤(1)获得的复合微生物菌液与步骤(2)获得的营养液均匀的泼洒至步骤(3)经消毒的培养用水中，在水温20-25℃下，充气培养12-48小时即可使用。所述微生物活菌饵料既可满足贝类苗种生长发育的营养需求，又可调节贝类苗种生长的内外部环境， 促进苗种的健康生长。权利要求书1页 说明书4页CN 107183406 A 2017.09.22
C N 107183406
A
1.一种用于贝类育苗的微生物活菌饵料，按照以下方法制备：
(1)根据贝类苗种生长发育的营养需求和摄食特点，选择复合微生物菌，其中包括类球红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌；
(2)将营养物质用研磨机研磨成细粉末状，放入水中煮沸10分钟，冷却后即得营养液；
(3)将微生物活菌饵料培养用水、所需使用的容器及气泡石用次氯酸消毒，消毒12-15小时后投放硫代硫酸钠中和，次氯酸与硫代硫酸钠按照摩尔比1:1使用；所述培养用水的盐度采用适宜于贝类苗种生长的盐度范围；
(4)将步骤(1)获得的复合微生物菌液与步骤(2)获得的营养液均匀的泼洒至步骤(3)经消毒的培养用水中，在水温20-25℃下，充气培养12-48小时即可使用。
2.根据权利要求1所述的饵料，其特征在于步骤(1)中所述菌种优选是类球红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌按照0.2-5：0.2-5：1的比例混合，更优选是等比例混合。
3.根据权利要求1所述的饵料，其特征在于步骤(1)中所述的贝类苗种为贝类浮游幼虫。
4.根据权利要求1所述的饵料，其特征在于步骤(2)中所述营养物质的组成及配比如下：山楂200-300份；神曲100-200份；麦芽50-100份；红枣50-150份；低聚异麦芽糖5-20份；复合维生素1-5份。
5.根据权利要求1所述的饵料，其特征在于步骤(2)中所述营养物质的粉末粒径小于50微米，优选粒径是10-30微米。
6.根据权利要求1所述的饵料，其特征在于所述微生物活菌饵料的用量为：培养水1m 3使用微生物菌液100-500mL，更优选是100-300mL。
7.根据权利要求1所述的饵料，其特征在于所述营养液的用量是培养水1m 3使用营养液300-800g，更优选是500-600g，所述营养液重量是以干营养物质计。8.将权利要求1-7任一项所述饵料用于贝类幼苗培育的用途。
权 利 要 求 书1/1页CN 107183406 A
一种用于贝类育苗的微生物活菌饵料及其生产方法
技术领域
[0001]本发明涉及水产养殖贝类苗种繁育领域，具体涉及一种用于贝类育苗的微生物活菌饵料及其生产方法。
背景技术
[0002]2013年我国海水养殖产量为1.74×107吨，其中贝类养殖产量为1.27×107吨，占73.0％。海水养殖贝类的苗种绝大部分来自全人工苗种繁育。目前，在海水贝类人工育苗过程中，贝类幼虫和稚贝饵料主要依靠全人工单胞藻饵料的培养。但因单胞藻饵料培养周期长、成本高，占用水体面积大，且易受藻种品质、原生动物污染以及天气变化等因素的影响(Robert等，1997)，一直困扰着苗种生产企业，束缚了苗种产业的发展。为解决这些问题，科研与技术人员开展了大量的研究工作：一方面开展了饵料微藻的新品系培育与高密度生产工艺的优化。如中科院海洋研究所筛选出抗逆性强的小球藻、三角褐指藻，耐高温的角毛藻藻株等多株优良饵料微藻(李凌，2016)；Naumann等(2013)采用新型双层固体生物反应器进行微藻高密度培养，可无需浓缩采收。另一方面进行了人工代用饵料方面的研究，以期替代
或部分替代单胞藻饵料，如植物淀粉(Erjr等，1984；Perez等，1998)、干藻粉(等，2007)、浓缩藻泥(Ponis等，2003)、大型藻酶解单细胞(戴继勋等，2004)、干酪(Enes等，2003)等，但多存在破坏水质或不易消化吸收等问题。
[0003]上个世纪70年代，一些科研工作者尝试使用微生物进行贝类苗种代用饵料的研究(Epifanio，1979)。酵母菌因其易于培养的特点，成为研究的主要对象，以期直接应用于贝类工厂化苗种繁育。如Epifanio(1979)对4种滤食贝类的幼贝投以不同比例的酵母和硅藻，研究表明酵母可替代50％的单胞藻活
饵料，但不能完全使用酵母为饵料投喂。李雷斌等(2008)将自溶面包酵母与小球藻混合投喂马氏珠母贝浮游幼虫，结果表明混合投喂效果最佳，单独投喂面包酵母，幼虫无法正常发育至附着变态。由上可见，酵母饵料因其营养不均衡且不易消化吸收，不是一种非常合适的代用饵料。但有研究认为，微生物一直存在于贝类苗种生产用水、人工单胞藻饵料以及贝类生长的自然环境中，可能为幼虫及稚贝的生长提供营养(Robert等，1997)。微生物种类的选择以及营养调控等问题还有待进一步研究。[0004]CN102960269 A公开了一种利用养殖水培育贝类苗种的方法，该方法是将微藻放入养殖塘中与虾类一起培养，然后将养殖塘中含有微藻的养殖水引入育苗池中用于培育贝类幼苗。CN103211129 A公开了一种海洋硅藻作为缢蛏饵料的应用，即选择威氏海链藻分别采用特定的培养液配方进行三级扩大培养，并在缢蛏稚贝生长到平均体长大于0.45mm后进行投喂。根据本发明提供的培养液配方，该海洋硅藻繁殖速度极快，而且根据本发明提供的投喂方式，投喂该微藻后可以明显提高缢蛏稚贝的生长速度。上述方法仅针对贝类幼稚贝阶段，缓解单胞藻饵料的培养压力，但无法满足浮游幼虫阶段对饵料营养的要求。[0005]现有技术中仍存在贝类育苗需要分级培养，工艺较为复杂，且培养成本较高的问题。
发明内容
[0006]本发明的目的在于克服上述已有技术的不足，提供一种用于贝类育苗的无需前期分级培养、工艺简单、培养成本低的古方微生物活菌饵料及其生产方法。
[0007]本发明中的一种用于贝类育苗的古方微生物活菌饵料，是由以下微生物菌种经培养后按比例混合的复合微生物菌液，其组成为类球红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌，三种菌等比例混合，总有效菌数达到20亿/ml。
[0008]本发明人意外的发现，将用于贝类育苗的微生物活菌饵料与经过优选的中药材配合使用，不仅可以提供饵料活菌生长所需的外源营养物质，而且还提高了贝类幼苗的免疫力和生长速度，有利于提高贝类幼苗的成活率。具体来说就是先将药材经过粉碎处理，然后经过加热熬制。粉碎处理可以将药材细化，而加热煮沸则可以让药材颗粒进一步膨胀，并有效析出营养成分，溶解在水中的营养成分可以供菌类生长，而药材的未溶解残渣则可以作为食物直接被贝类幼苗食用，这样一方面增加了贝类的食物，另一方面又可以促进菌类生长，提供更加丰富的菌类食物。本发明所述营养物质的选择与组成参考了传统中医补益理论，同时针对贝类和菌的生长所需的营养，调整了用量和使用方法。本发明避免了化学试剂的使用，减少了对贝类苗种的影响，同时大大简化了贝类幼苗培养常见的步骤，不需要进行幼苗的转移和换水，避免了由于环境变化对贝类幼苗生长带来的不利影响。
[0009]一种用于贝类育苗的微生物活菌饵料，按照如下步骤制备：
[0010](1)根据贝类苗种生长发育的营养需求和摄食特点，选择复合微生物菌，其中包括类球红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌；
[0011](2)将营养物质用研磨机研磨成细粉末状，放入水中煮沸10分钟，冷却后即得营养液；
[0012](3)将微生物活菌饵料培养用水、所需使用的容器及气泡石用次氯酸消毒，消毒12-15小时后投放硫代硫酸钠中和，次氯酸与硫代硫酸钠按照摩尔比1:1使用；所述培养用水的盐度采用适宜于贝类苗种生长的盐度范围；
[0013](4)将步骤(1)获得的复合微生物菌液与步骤(2)获得的营养液均匀的泼洒至步骤(3)经消毒的培养用水中，在水温20-25℃下，充气培养12-48小时即可使用。
[0014]步骤(1)中所述菌种优选是类球红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌按照0.2-5：0.2-5：1的比例混合，更优选是等比例混合。
[0015]步骤(1)中所述的贝类苗种为贝类浮游幼虫。
[0016]以1立方水体用量为1份，步骤(2)中所述营养物质的组成及配比如下：
[0017]山楂200-300份；神曲100-200份；麦芽50-100份；红枣50-150份；低聚异麦芽糖5-20份；复合维生素1-5份。
[0018]步骤(2)中所述营养物质的粉末粒径小于50微米，优选粒径是10-30微米。[0019]所述微生物活菌饵料的用量为：培养水1m3使用微生物菌液100-500mL，更优选是100-300mL。
[0020]所述营养液的用量是培养水1m3使用营养液300-800g，更优选是500-600g，所述营养液重量是以干营养物质计。
[0021]本发明还包括将利用所述饵料进行贝类育苗的用途。
[0022]本发明具有以下的优点：
[0023](1)将传统中医理论与现代微生物技术相结合，获得的古方微生物活菌饵料既可满足贝类苗种生长发育的营养需求，又可调节贝类苗种生长的内外部环境，促进苗种的健康生长。
[0024](2)微生物活菌饵料生成工艺简单，可直接进行工厂化生产，满足了贝类苗种规模化生产对大量饵料的需求，同时避免了前期分级培养的繁琐工序，节约了生产成本。
具体实施方式
[0025]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0026]实施例1
[0027]将古方微生物活菌饵料应用于毛蚶苗种生产；根据毛蚶催产计划，提前2-3天开始进行古方微生物活菌饵料培养。
[0028]复合微生物活菌包括类球红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌等比例混合；饵料培养用营养物质为山楂240份、神曲150份、麦芽70份、红枣100份、低聚异麦芽糖10份和复合维生素2份，按比例混合后，使用研磨机研磨成细粉末状，经300目筛绢过滤，放入经过滤的淡水中，煮沸10分钟，冷却后即得营养液待用。饵料培养用海水经双层过滤至饵料培育池，使用次氯酸消毒过夜，次氯酸浓度为200ppm；次日早使用等量的硫代硫酸钠进行中和。将复合微生物活菌与营养液均匀泼洒于培养海水中，添加比例为培养水1m3中添加微生物菌液200ml，添加营养液572g(以干营养物质计)，充气培养。
[0029]于当日晚进行毛蚶亲贝催产。产卵30小时后，幼虫发育至D型幼虫，开始摄食。依据幼虫密度，少量投喂古方微生物活菌饵料，初始投喂量为1.5-2.0L/m3。随着幼虫生长，古方微生物活菌饵料的投喂量逐渐增加至40-50L/m3·天。幼虫培育至第17天开始附着变态为稚贝，幼虫平均壳长256μm，经过6天全部幼虫完成附着变态；自D型幼虫至完成附着变态，幼虫成活率为91％。
[0030]对比例1
[0031]将古方微生物活菌饵料应用于毛蚶苗种生产；根据毛蚶催产计划，提前2-3天开始进行古方微生物活菌饵料培养。
[0032]复合微生物活菌包括类球红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌等比例混合；饵料培养用海水经双层过滤至饵料培育池，使用次氯酸消毒过夜，次氯酸浓度为200ppm；次日早使用等量的硫代硫酸钠进行中和。将复合微生物活菌与营养液均匀泼洒于培养海水中，比例为培养水1m3中添加微生物菌液200ml，充气培养。
[0033]于当日晚进行毛蚶亲贝催产。产卵30小时后，幼虫发育至D型幼虫，开始摄食。依据幼虫密度，少量投喂古方微生物活菌饵料，初始投喂量为1.5-2.0L/m3。随着幼虫生长，古方微生物活菌饵料的投喂量逐渐增加至40-50L/m3·天。幼虫培育至第21天开始附着变态为稚贝，幼虫平均壳长186μm，经过8天全部幼虫完成附着变态；自D型幼虫至完成附着变态，幼虫成活率为42％。
[0034]对比例2
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