[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 1995800A [43]公开日2007年7月11日
[21]申请号200510022445.0[22]申请日2005.12.29
[21]申请号200510022445.0
[71]申请人成都中医药大学
地址610075四川省成都市十二桥路37号
[72]发明人孟宪丽 张艺 段俊国 盛艳梅 张静 龙
怡 曾洁萍 [74]专利代理机构成都虹桥专利事务所代理人李高峡
[51]Int.CI.F17C 1/00 (2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 1 页
[54]发明名称
[57]摘要
包括由下壳(10)、壳盖(11)构成的耐压壳体，设置
在下壳(10)、壳盖(11)接触端面之间的密封件，以
及加压后使壳盖(11)与下壳(10)紧固连接的锁止结
构(20)。本发明还提供了该加压装置的用途，用于
发明加压装置用于药物的筛选，操作简便，重现性
高，可操作性强，能为临床药物筛选试验提供较准
确的数据，为正确判断药物使用提供了依据，为模
拟体内高压进行细胞水平的药物筛选提供一种新的
选择。
200510022445.0权 利 要 求 书第1/1页 1、加压装置，包括由下壳(10)、壳盖(11)构成的耐压壳体，设置在下壳(10)、壳盖(11)接触端面之间的密封件，以及加压后使壳盖(11)与下壳(10)紧固连接的锁止结构(20)，其特征在于：所述耐压壳体上设置有压力检测端口(12)、进气端口(13)，压力检测端口(12)外固定连接有压力表(15)，进气端口(13)外则连接有控制阀(16)和进气管(17)。
2、根据权利要求1所述的加压装置，其特征在于：所述壳盖(11)通过铰链(14)与下壳(10)连接，所述压力检测端口(12)、进气端口(13)均开设在壳盖(11)上。
3、根据权利要求2所述的加压装置，其特征在于：所述锁止结构(20)设置在下壳(10)与铰链(14)相对一侧，它包括设置在下壳(10)、壳盖(11)结合部处的曲臂(21)，该曲臂(21)的下端通过销轴(22)与下壳(10)形成铰链连接，曲臂(21)的上端则设置有可抵压在壳盖(11)上的螺杆(23)。
4、根据权利要求2所述的加压装置，其特征在于：所述壳盖(11)上开设有卸压端口(18)，该卸压端口(18)外设置有卸压阀(19)。
5、根据权利要求1所述的加压装置，其特征在于：所述下壳(10)的端口上开设有环形凹槽，所述密封件为设置于该环形凹槽内的密封圈(24)。
6、一种药物筛选方法，它是利用权利要求1所述的加压装置进行细胞水平药物筛选的方法。
7、根据权利要求6所述的药物筛选方法，它包括如下步骤：
a、分离培养目的细胞；
b、将目的细胞放入加压装置中，加入供筛选的药物，在40～140mmHg的压力下培养12～72h，观察，记录、分析数据。
8、根据权利要求7所述的药物筛选方法，其特征在于：所述的目的细胞是视网膜神经细胞，加压装置压力是80mmHg；所述的培养时间是48h。
9、根据权利要求8所述的药物筛选方法，其特征在于：所述的培养容器是染缸、培养板、培养皿或培养瓶；所述的培养液是800ml·L-1DMEM高糖培养基、200ml·L-1胎牛血清、L-谷氨酰胺0.45g·L-1、NaHCO33g·L-1、HEPES 4.5g·L-1、青霉素1×106U·L-1和链霉素1×106U·L-1。
10、根据权利要求7所述的药物筛选方法，其特征在于：所述的目的细胞是大鼠视网膜神经细胞、牛眼小梁细胞、血管内皮细胞或大鼠成骨细胞。
11、权利要求1所述的加压装置用于筛选青光眼或高血压的药物中的用途。
200510022445.0说 明 书第1/6页
一种加压装置及其用途
技术领域
本发明涉及加压装置，尤其涉及用于药物筛选的加压装置，以及利用该加压装置进行药物筛选的方法和用途。
背景技术
常压环境下视网膜神经细胞的培养方法已经比较成熟、稳定，能够较好的反映细胞的生长状态及药物对细胞体外存活的影响，但是不能针对性的考察药物对高压下培养细胞的影响。整体动物的高眼压模型尽管研究较多，但不能全程观察高眼压导致视网膜神经细胞损伤的病理过程。由此，需要建立一种体外高压培养视网膜神经细胞的方法，便于进行相关细胞水平的药物筛选。
目前国内外常用的加压培养装置多为注液式加压，即在密封的容器内注满培养液，然后连接另一装有培养液的容器，通过调节两容器内液体高度差来改变压力大小。该装置的缺陷表现在：首先培养瓶中缺乏气体，特别是氧气，不能排除缺氧导致细胞损伤的可能；密封装置虽能保证无液体渗漏，但不能确保外部管道中的液体是否回吸入培养瓶，因而回吸会造成污染等。而现有的注气式加压装置，即加压时将培养瓶口密封，然后用注射器注入无菌气体，单人即可操作；利用和培养瓶相连的压力表，可以实时监测
瓶内压力。但该装置仍存在一些不足之处：加压操作繁琐，需要同时监控多个培养瓶，且不同培养瓶之间压力不容易保持稳定；实验需要样本量多，细胞数量大，相应的试剂用量也增多，不能满足大量的细胞筛选需要。整体动物的高眼压模型尽管研究较多，但不能全程观察高眼压导致视网膜神经细胞损伤的病理过程。
目前，已有采用培养瓶注气式加压装置考察不同压力或加压时间对大鼠视网膜神经细胞、牛眼小梁细胞等的影响的报道。也有关于考察了持续压力不同时程对大鼠成骨细胞的影响等的报道。但尚未有模拟体内高压，根据不同细胞的特点进行不同药物筛选的加压装置的相关报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种加压装置，利用该加压装置能满足药物筛选过程中大量筛选细胞需要。为解决该技术问题本发明所采用的技术方案是：本发明的加压装置，包括由下壳、壳盖构成的耐压壳体，和设置在下壳、壳盖结合端面之间的密
封件，以及加压后使壳盖与下壳紧固连接的锁止结构，所述耐压壳体上开设有压力检测端口、进气端口，压力检测端口外固定连接有压力表，进气端口外则连接有控制阀和进气管。
本发明还提供了一种药物筛选方法，它是利用本发明加压装置进行细胞水平药物筛选的方法。
该药物筛选方法包括如下步骤：
a、分离培养目的细胞；
b、将目的细胞放入加压装置中，加入供筛选的药物，在40～140mmHg的压力下培养12～72h，观察，记录、分析数据。
其中，所述的目的细胞是视网膜神经细胞，加压装置压力是80mmHg；所述的培养时间是48h。
其中，所述的培养容器是染缸、培养板、培养皿或培养瓶；所述的培养液是800 ml·L-1DMEM高糖培养基、200ml·L-1胎牛血清、L-谷氨酰胺0.45g·L-1、NaHCO3 3 g·L-1、H E P E S 4.5g·L-1、青霉素1×106U·L-1和链霉素1×106U·L-1。 其中，所述的目的细胞还可以是大鼠视网膜神经细胞、牛眼小梁细胞、血管内皮细胞或大鼠成骨细胞。
本发明还提供了该加压装置用于筛选青光眼或高血压的药物中的用途。 在本发明加压装置中，可以根据不同细胞的特点选择不同的培养方式，如贴壁细胞可以先在盖玻片(24×24mm)上培养，贴壁完全后，将覆有细胞的盖玻片嵌入染缸内，然后将染缸统一放入加压装置中进行高压培养；如悬浮培养的细胞可以直接用培养瓶、培养板或培养皿进行培养，然后转入加压装置中进行高压培养。本发明加压装置适用于模拟体内与青光眼相关的视网膜神经细胞、小梁细胞及与高血压相关的血管内皮细胞等相关细胞
的体外高压培养试验研究。本发明筛选方法模拟了体内青光眼高眼压环境，建立了体外高压视网膜神经细胞培养模型，确定了诱导细胞凋亡的加压条件，并考察了药物对高压诱导的视网膜神经节细胞凋亡的影响。
本发明加压装置内可同时放入多个染缸、培养皿、培养板或培养瓶，不用对每个培养瓶分别加压，大大减少了工作量；可以根据不同细胞的特点选择不同的培养方式，而且各受试药组和模型组可以同时在一个完全相同的条件下进行高压培养，尽可能的避免操作带来的差异；解决了用培养板、培养皿等培养时无法加压等问题；还可以根据不同细胞的特点及检测手段要求的不同，选择不同的培养容器，节约大量的培养及检测试剂，
减少细胞用量，从而大大降低实验成本。本发明加压装置的操作方法简便可行，为模拟体内高压进行细胞水平的药物筛选提供一种新的选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。 附图说明
本说明书包括如下两幅附图：
图1是本发明加压装置的结构示意图；
图2是本发明加压装置的局部放大示意图。
图中零部件、部位及编号：下壳10、壳盖11、压力检测端口12、进气端口13、铰链14、压力表15、控制阀16、进气管17、密封圈18、卸压阀19、锁止结构20、曲臂21、销轴22、螺杆23。
以下通过附图结合实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
如图1所示，本发明的加压装置，包括由下壳10、壳盖11构成的耐压壳体，设置在下壳10、壳盖11接触端面之间的密封件，以及加压后使壳盖11与下壳10紧固连接的锁止结构20。耐压壳体上设置有压力检测端口12、进气端口13，压力检测端口12外固定连接有压力表15，进气端口13外则连接有控制阀16和进气管17。下壳10底部平坦，可以放入染缸、培养皿、培养板或培养瓶数个，将下壳10、壳盖11锁止后，通过进气管17向耐压壳体注入消毒空气进行加压并达到所需压力。
本发明的加压装置适应于模拟体内与青光眼相关的视网膜神经细胞、小梁细胞及与高血压相关的血管内皮细胞等相关细胞的体外高压培养实验研究。
壳盖11与下壳10可以采用多种连接方式，图1示出了其中一种，如该图所示，壳盖11通过铰链14与下壳10连接，压力检测端口12、进气端口13均开设在壳盖11上，下壳10的端口上开设有环形凹槽，所述密封件为设置于该环形凹槽内的密封圈24。。同样，锁止结构20也可以采用多种结构，图2示出了其中一种，如该图所示，锁止结构20设置在下壳10与铰链14相对一侧，它包括设置在下壳10、壳盖11结合部处的曲臂21，该曲臂21的下端通过销轴22与下壳10形成铰链连接，曲臂21的上端则设置有可抵压在壳盖11上的螺杆23。
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