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红鲫、日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法[发明专利]

[19]

中华人民共和国国家知识产权局

[12]发明专利申请公开说明书

[11]公开号CN 1709046A [43]公开日2005年12月21日

[21]申请号200510031689.5[22]申请日2005.06.10

[21]申请号200510031689.5

[71]申请人湖南师范大学

地址410081湖南省长沙市河西岳麓山湖南师范

大学生命科学学院

[72]发明人刘少军刘筠罗凯坤孙远东张纯申

佳珉 [74]专利代理机构湖南兆弘专利事务所代理人赵洪

[51]Int.CI 7A01K 61/00

权利要求书 1 页说明书 2 页附图 4 页

[54]发明名称

红鲫、日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法

[57]摘要

本发明涉及鱼类的远缘杂交技术。本发明选择

红鲫、日本白鲫为母本，团头鲂为父本，采用人工

干法授精，受精卵经孵化，培育出三倍体和四倍体

的杂交后代，不仅性状改善，而且是一种产生四倍

体和三倍体鱼的新途径。

200510031689.5权利要求书第1/1页 1、一种红鲫、日本白鲫与团头鲂的亚科间远缘杂交方法，其特征在于以红鲫或日本白鲫为母本，以团头鲂为父本，将性成熟的红鲫或日本白鲫的卵子分别与团头鲂的精子进行人工干法授精，受精卵在20～21℃水温下孵化，鱼苗在池塘中饲养。

200510031689.5说明书第1/2页

红鲫、日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法

技术领域：

本发明涉及鱼类的杂交方法，具体涉及鱼类的远缘杂交技术。

背景技术：

杂交技术是改良鱼类性状常用的方法，一般亲缘关系在种间或种间之上的杂交为远缘杂交。国内外关于鱼类远缘杂交的研究已有一些报道，如鳙(♀)×鲢(♂)、草鱼(♀)×鲢(♂)、红鲫(♀)×鲤(♂)等，其中前两种为亚科间的杂交。通过远缘杂交，鱼类的性状可以得到改良，如红鲫与湘江野鲤的属间远缘杂交形成的杂交后代具有生长速度快、肉质鲜嫩、抗病力强、存活率高等优点。红鲫(Carassius auratus red var.)属于鲤科、鲤亚科中的二倍体鱼(2n＝100)，日本白鲫(Carassius auratus cuvieri)属于鲤科、鲤亚科中的二倍体鱼(2n＝100)，团头鲂(Megalobrama amblycephala)属于鲤科、鲌亚科中的二倍体鱼(2n＝48)；在遗

传、分类和体形等生物学特性方面，红鲫、日本白鲫与团头鲂之间存在较大的差异，尤其是他们之间体细胞染体数目差异很大，红鲫和日本白鲫的染体数目为100，而团头鲂的染体数目为48，而且不成倍性关系，因此远缘杂交困难较多。至今国内外还没有鲫鱼与团头鲂亚科间的远缘杂交成功的报道。探索一种使红鲫、日本白鲫与团头鲂之间的杂交获得成功的技术是具有应用价值的。

发明内容：

本发明旨在通过父母本的选择获得鲫鱼与团头鲂远缘杂交的成功，并获得性状优良的后代个体。

本发明目的是通过以下技术方案实现的：

以红鲫或日本白鲫为母本，以团头鲂为父本，将性成熟的红鲫或日本白鲫的卵子分别与团头鲂的精子混合，进行人工干法授精，受精卵在20～21℃水温下孵化，鱼苗在池塘中饲养。

下面结合附图进一步详细本发明。

附图说明：

图1红鲫(♀)×团头鲂(♂)后代外形

图2红鲫(♀)×团头鲂(♂)后代中四倍体鱼的染体(4n＝148)

图3白鲫(♀)×团头鲂(♂)后代外形

图4白鲫(♀)×团头鲂(♂)后代中三倍体鱼的染体(3n＝124)

本发明的关键在于父母本的选择，以红鲫、日本白鲫为母本，以团头鲂为父本，具体

200510031689.5说明书第2/2页方法为：挑选性成熟的雌性红鲫、白鲫，挤出他们的成熟卵子，分别与团头鲂的精子混合进行人工干法授精，用干净的鸡毛充分搅拌精子和卵子。受精卵放在培养皿中孵化，水温20～21℃，孵化出的鱼苗在池塘中饲养。用肾细胞直接制片法对红鲫(♀)×团头鲂(♂)、白鲫(♀)×团头鲂(♂)的后代的体细胞染体数目进行检测。肾细胞直接制片法的方法为：在18～22℃水温下培育实验鱼1～3天后，对实验鱼注射P H A 1～3次，每次剂量为2～8μg/克体重，间隔时间为12～24小时，在解剖取材前2～6小时，注射秋水仙素，剂量为2～4μg/克体重。取出肾组织，在生理盐水下剪碎肾组织，0.075mol/LKCL 低渗处理，在20℃温度下低渗40～60分钟；用冰醋酸∶甲醇(1∶3)固定肾细胞1～3次；在冰冻载玻片上滴片；Giemsa染液染。

实验证明，在红鲫(♀)×团头鲂(♂)、日本白鲫(♀)×团头鲂(♂)组合中都能够产生存活的后代，而他们的反交组合红鲫(♂)×团头鲂(♀)、日本白鲫(♂)×团头鲂(♀)组合不能产生存活的后代。红鲫(♀)×团头鲂(♂)的受精率为80％～85％，孵化率达22％～30％。红鲫(♀)×团头鲂(♂)后代中出现两种体，一种体较深，近似墨黑，另一种体为青灰，在体形上，这些杂交后代兼有红鲫和团头鲂的特征，如他们的头部

偏向于团头鲂，而身体部位类似于红鲫，但是可以明显的看出杂交后代的特征，如体高明显增大(见图1)。在红鲫(♀)×团头鲂(♂)后代中发现有四倍体(4n＝148)(见图2)，也发现有三倍体(3n＝150)。日本白鲫(♀)×团头鲂(♂)的受精率为85％～90％，孵化率为60％～65％。日本白鲫(♀)×团头鲂(♂)的体为银灰，在体形上，他们兼有日本白鲫和团头鲂的特征，如他们的头部类似于团头鲂，而身体偏向于日本白鲫(见图3)。检测日本白鲫(♀)×团头鲂(♂)后代的染体，证明他们是三倍体(3n＝124)(见图4)。

本方法为利用鱼类远缘杂交产生新型四倍体和三倍体鱼开辟了新途径。通过进一步的选育，可以选育出集红鲫和团头鲂优势的新型四倍体和三倍体鱼，以及集日本白鲫和团头鲂优势的的新型三倍体鱼类。

200510031689.5说明书附图第1/4页

图1

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