(10)申请公布号 CN 102841155 A
(43)申请公布日 2012.12.26C N 102841155 A
*CN102841155A*
(21)申请号 201210361344.6
(22)申请日 2012.09.25
G01N 30/02(2006.01)
(71)申请人东北制药集团股份有限公司
地址110027 辽宁省沈阳市沈阳经济技术开
发区昆明湖街8号
(72)发明人冯文宇 崔莹 周岩 吴涛 谢丹
尤楠 唐奎山 尹宏 娄玉涛
周秀峰 孟涛 刘志清
(74)专利代理机构沈阳维特专利商标事务所
(普通合伙) 21229
代理人
甄玉荃
(54)发明名称
(57)摘要
一种应用于化合物物质检测领域中的采用高
效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，取
磷霉素峰与杂质A 峰的分离度应大于或等于1.5；
取对照品溶液，平行进样，注入高效液相谱仪，
记录谱图，计算磷霉素峰面积的相对标准偏差应
小于或等于0.85%；取供试品溶液、参照溶液二分
别注入高效液相谱仪，记录谱图，计算供试品溶
液中杂质的峰面积。该发明对于磷霉素钠中有关
物质检测的重现性好、灵敏度高、专属性强、检测
精确、操作简便、检测条件温和、检测设备和仪器
应用广泛、流动相正磷酸盐水溶液原料来源广、配
制简单。
(51)Int.Cl.
权利要求书2页 说明书12页 附图2页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请
权利要求书 2 页 说明书 12 页 附图 2 页
1.一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
（1）谱条件
谱柱为氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱，检测器为示差折光检测器，流动相为正磷酸盐水溶液；
（2）对照品溶液的制备
取磷霉素钠标准品用流动相配制成磷霉素钠的对照品溶液；
（3）参照溶液一的制备
（a）用水湿润的磷霉素钠原料，在烘箱中进行加热，得到磷霉素钠残渣，残渣中含杂质 （b）取磷霉素钠原料溶于适量所述残渣溶A，用适量流动相溶解所述残渣，得到残渣溶液；
液中得到参照溶液一；
（4）供试品溶液的制备
取磷霉素钠原料用流动相配制成供试品溶液；
（5）参照溶液二的制备
将供试品溶液用流动相进行稀释，得到参照溶液二；
（6）测定方法
取参照溶液一注入高效液相谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰与杂质A峰的分离度应大于或等于1.5；取对照品溶液，平行进样，注入高效液相谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰面积的相对标准偏差应小于或等于0.85%；取供试品溶液、参照溶液二分别注入高效液相谱仪，记录谱图，计算供试品溶液中杂质的峰面积。
2.根据权利要求1所述的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于：在步骤（1）中，所述的氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱为Zorbax-NH2柱；所述检测器的温度为30-40℃，优选温度为35℃；所述正磷酸盐选自磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾中的一种或几种，优选磷酸二氢钾；所述正磷酸盐水溶液的浓度为0.05-0.12mol/l，优选0.08mol/l。
3.根据权利要求1所述的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于：在步骤（2）中，所述对照品溶液中磷霉素钠的浓度为0.06-0.24g/ml，优选0.12g/ml。
4.根据权利要求1所述的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于：在步骤（
3）中的步骤（a）中，所述烘箱加热的温度为50-70℃，优选温度60℃；所述加热的时间为16-30小时，优选时间为24小时；所述残渣溶液为每100ml含有将1-2g所述磷霉素钠原料加热所得残渣的残渣溶液，优选每100ml含有将1.5g所述磷霉素钠原料加热所得残渣的残渣溶液；在步骤（3）中的步骤（b）中，所述参照溶液一为每10ml含有溶于所述残渣溶液中的磷霉素钠原料0.6-2.4g，优选每10ml含有溶于所述残渣溶液中的磷霉素钠原料1.2g。
5.根据权利要求1所述的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于：在步骤（4）中，所述供试品溶液中磷霉素钠的浓度为0.06-0.24g/ml，优选磷霉素钠的浓度为0.12g/ml。
6.根据权利要求1所述的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其
特征在于：在步骤（5）中，每200ml所述参照溶液二含有0.5-1.5ml所述供试品溶液，优选每200ml所述参照溶液二含有1ml所述供试品溶液。
7.根据权利要求1所述的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于：在步骤（6）中，所述参照溶液一、对照品溶液、供试品溶液、参照溶液二的进样体积为3-20μl，优选进样体积为10μl；所述杂质为杂质A、非特定杂质及总杂质。
8.根据权利要求1所述的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于：所述的正磷酸盐水溶液的配制方法为将适量所述正磷酸盐置于水中溶解，过滤，超声。
9.根据权利要求1所述的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，其特征在于：所述的杂质A为（1,2-二羟基丙基）膦酸。
一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及化合物物质检测领域中的一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法。
背景技术
[0002] 磷霉素(Fosfomycin)系1967年由美国默克公司和西班牙CEPA公司从西班牙土壤中的链丝菌中发现的一种广谱抗生素，其分子量很小，是一个不同于其他任何一种抗生素结构的全新抗生素。目前磷霉素已经在中国、欧洲和日本等国家和地区广泛应用，其应用于临床的品种主要有3个，分别是磷霉素钠、磷霉素钙和磷霉素氨丁三醇，其中，中国应用较广泛的品种为磷霉素钠。磷霉素钠抗菌谱广、不良反应小，易进入感染组织内，是轻、中度感染的一线用药之一，是重度感染、耐药菌感染联合使用的理想药物。安全、低毒、无需试敏的特点给临床应用带来便利，与其他抗生素相比有独特的优点。但是，目前磷霉素钠的法定检测方法中均未收载其有关物质的检测方法，为保证药品的质量及其安全性，亟需建立检测方法对其进行控制。因此，研制开发一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法一直是亟待解决的新课题。
发明内容
[0003] 本发明的目的在于提供一种重现性好、灵敏度高、检测精确、专属性强、操作方法简便、检测设备和仪器应用广泛的采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法。[0004] 本发明的目的是这样实现的：一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法，所述方法包括如下步骤：
[0005] （1）谱条件
[0006] 谱柱为氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱，检测器为示差折光检测器，流动相为正磷酸盐水溶液；
[0007] （2）对照品溶液的制备
[0008] 取磷霉素钠标准品用流动相配制成磷霉素钠的对照品溶液；
[0009] （3）参照溶液一的制备
[0010] （a）用水湿润的磷霉素钠原料，在烘箱中进行加热，得到磷霉素钠残渣，残渣中含杂质A，用适量流动相溶解所述残渣，得到残渣溶液；
（b）取磷霉素钠原料溶于适量所述残渣溶液中得到参照溶液一；
[0011] （4）供试品溶液的制备
[0012] 取磷霉素钠原料用流动相配制成供试品溶液；
[0013] （5）参照溶液二的制备
[0014] 将供试品溶液用流动相进行稀释，得到参照溶液二；
[0015] （6）测定方法
[0016] 取参照溶液一注入高效液相谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰与杂质A峰的分离
度应大于或等于1.5；取对照品溶液，平行进样，注入高效液相谱仪，记录谱图，计算磷霉素峰面积的相对标准偏差应小于或等于0.85%；取供试品溶液、参照溶液二分别注入高效液相谱仪，记录谱图，计算供试品溶液中杂质的峰面积；
[0017] 在步骤（1）中，所述的氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱为Zorbax-NH2柱；所述检测器的温度为30-40℃，优选温度为35℃；所述正磷酸盐选自磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾中的一种或几种，优选磷酸二氢钾；所述正磷酸盐水溶液的浓度为0.05-0.12mol/l，优选0.08mol/l；在步骤（2）中，所述对照品溶液中磷霉素钠的浓度为0.06-0.24g/ml，优选0.12g/ml；在步骤（3）中的步骤（
a）中，所述烘箱加热的温度为50-70℃，优选温度60℃；所述加热的时间为16-30小时，优选时间为24小时；所述残渣溶液为每100ml含有将1-2g所述磷霉素钠原料加热所得残渣的残渣溶液，优选每100ml含有将1.5g所述磷霉素钠原料加热所得残渣的残渣溶液；在步骤（3）中的步骤（b）中，所述参照溶液一为每10ml含有溶于所述残渣溶液中的磷霉素钠原料0.6-2.4g，优选每10ml含有溶于所述残渣溶液中的磷霉素钠原料1.2g；在步骤（4）中，所述供试品溶液中磷霉素钠的浓度为0.06-0.24g/ml，优选磷霉素钠的浓度为0.12g/ml；在步骤（5）中，每200ml所述参照溶液二含有0.5-1.5ml所述供试品溶液，优选每200ml所述参照溶液二含有1ml所述供试品溶液；在步骤（6）中，所述参照溶液一、对照品溶液、供试品溶液、参照溶液二的进样体积为3-20μl，优选进样体积为10μl；所述杂质为杂质A、非特定杂质及总杂质；所述的正磷酸盐水溶液的配制方法为将适量所述正磷酸盐置于水中溶解，过滤，超声；所述的杂质A 为（1,2-二羟基丙基）膦酸。
[0018] 本发明的要点在于采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法。其原理是：利用磷霉素钠与杂质结构特点的不同，通过高效液相谱法，采用氨基-丙基硅烷键合的硅胶柱作为谱柱，正磷酸盐水溶液作为流动相，使得磷霉素钠和杂质得到良好的分离，再通过示差折光检测器进行检测，并进行计算从而得到磷霉素钠原料中有关物质的含量。[0019] 一种采用高效液相谱检测磷霉素钠中有关物质的方法与现有技术相比，具有对于磷霉素钠中有关物质检测的重现性好、灵敏度高、专属性强、检测精确、操作简便、检测条件温和、检测设备和仪器应用广泛、流动相正磷酸盐水溶液原料来源广、配制简单等优点，将广泛地应用于化合物物质检测领域中。
[0020] 下面结合实施例对本发明进行详细说明。
[0021] 图1是实施例一中参照溶液一HPLC图谱的示意图。
[0022] 图2是实施例一中对照品溶液HPLC图谱的示意图。
[0023] 图3是实施例一中供试品溶液HPLC图谱的示意图。
[0024] 图4是实施例一中参照溶液二HPLC图谱的示意图。
[0025] 图5是本发明中杂质A的结构式图。
具体实施方式
[0026] 以下实施例将有助于对本发明的了解，但这些实施例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。
[0027] 以下实施例中“供试品”和“磷霉素钠标准品”的含义如下：
[0028] 供试品：为待测定有关物质的磷霉素钠原料。
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