[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101307338A [43]公开日2008年11月19日
[21]申请号200810063121.5[22]申请日2008.07.17
[21]申请号200810063121.5
[71]申请人任雷
地址312500浙江省新昌县城关镇南明花园9幢1
11室
共同申请人任乔
[72]发明人任雷 任乔 [74]专利代理机构杭州丰禾专利事务所有限公司代理人王鹏举
[51]Int.CI.C12P 7/26 (2006.01)C12R 1/01 (2006.01)C12R 1/645 (2006.01)
权利要求书 2 页 说明书 7 页 附图 1 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明涉及还原型辅酶Q10的制备方法，尤其
涉及使用酶转化法制备还原型辅酶Q10的方法。还
原型辅酶Q10的制备方法，该方法包括以下的步骤：
原酶还原磷酸化的氧化型辅酶Q10；③提取还原反
应物中的还原型辅酶Q10。本发明以天然生物酶转
化氧化型辅酶Q10来生产还原型辅酶Q10，不需要特
定保护环境下就可以大规模生产还原型辅酶Q10。
所生产的还原型辅酶Q10具有稳定，纯天然产品，
安全可靠、可用作于针剂的特点。
200810063121.5权 利 要 求 书第1/2页
1.还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：①氧化型辅酶Q10原料进行磷酸化；②通过生物还原酶还原磷酸化的氧化型辅酶Q10；
③提取还原反应物中的还原型辅酶Q10。
2.根据权利要求1所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于步骤②中的生物还原酶的制备方法如下：
(1)选择含有辅酶Q10的细菌、酵母菌或真菌进行培养；
(2)破碎细胞体，用30％～70％重量百分比浓度的硫酸胺沉淀；
(3)分离沉淀物、透析得到所述生物还原酶。
3.根据权利要求2所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于：步骤(1)选用光合菌或红极毛杆菌。
4.根据权利要求2所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于：步骤(2)破碎细胞体采用超声波细胞破碎机。
5.根据权利要求2或3或4所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于步
骤(3)的方法如下：沉淀后在35℃～45℃水浴1～2小时，用冷冻离心机在1℃～3℃，10000～15000转/分钟的条件下离心10～30分钟，弃上清，加入
磷酸缓冲液透析。
6.根据权利要求5所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于：透析后加入Sepharos 4B搅拌，用磷酸缓冲液分三次清洗，加氢氧化钠调PH8.5，解离；过滤后的液体用冷冻干燥机冻干，得所述的还原酶。
7.根据权利要求1或2所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于步骤①中氧化型辅酶Q10进行磷酸化的步骤是：在28℃～45℃的条件下，将氧化
型辅酶Q10溶解在磷酸缓冲液中，按照氧化型辅酶Q10重量的2～10％加入
磷酸脂或者任何一种磷酸脂盐类，搅拌10～120分钟。
200810063121.5权 利 要 求 书 第2/2页
8.根据权利要求7所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于：磷酸缓冲液的PH值为6.0～8.2。
9.根据权利要求1或2所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于步骤③的提取方法如下：膜压过滤反应物提取生成物，对生成物进行真空浓缩，浓
缩液中加入水，在2℃～10℃温度条件下结晶，冷冻干燥结晶物，即得到所
述的还原型辅酶Q10。
10.根据权利要求9所述的还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于：膜压过滤的膜压为0.1MP～0.8MP。
200810063121.5说 明 书第1/7页
还原型辅酶Q10的制备方法
技术领域
本发明涉及还原型辅酶Q10的制备方法，尤其涉及使用酶转化法制备还原型辅酶Q10的方法。
背景技术
辅酶Q10又名泛醌10，是一种脂溶性醌，在室温下是橙黄结晶物，熔点48℃，无臭无味，其结构类
似于维生素K，因其母核六位上的侧链(聚异戊二烯基的聚合度为10而得名)，是一种醌类化合物，结构式如下：
它的另一种形式为还原型辅酶Q10生理功能主要来源于醌基的氧化还原特性和类异戊二烯侧链的物理特性，其在人体主要有两个作用，一是有明显的抗脂质过氧化作用，二是营养物质在线粒体内转化为能量的过程中起重要的作用。其醌环在氧化呼吸链中起传递电子和质子的作用，这种作用不仅是所有生命形式必不可少的，而且还是形成ATP的关键。它是细胞自身的天然抗氧化剂和细胞代谢激活剂，具有保护和恢复生物膜结构的完整性，稳定膜电位作用，是肌体的非特异性免疫增强剂。目前临床应 用于心脏病，肝炎等疾病的辅助。 在肌体内起上述2个主要作用的是辅酶Q10的还原型，所以生产还原型辅酶Q10是直接的作用，特别是天然的还原型辅酶Q10。但是还原型辅酶Q10容易被分子氧氧化，在工业规模生产还不能达成。此外还原型辅酶Q10是氧化型辅酶Q10的二电子还原体，为白结晶。已知用还原剂将氧化型辅酶Q10还原
200810063121.5说 明 书 第2/7页方法生成还原型辅酶Q10的方法(如WO01/52822A1)。但是使用这种化学还原剂所生产的还原型辅酶Q10在用于保健食品，饮料，化妆品，药品等时存在着分子氧氧化的问题。至今还没有商业化还原型辅酶Q10。同时，怎么保护和稳定还原型辅酶Q10，还没有一个真正的解决办法。
另外，现有的生产还原型辅酶Q10的方法上存在着大量使用化学还原剂或者添加保护剂添加剂，有机溶剂等。用于药品食品化妆品等组合，无疑首先是对环境的污染，其次用于人体是否安全，可靠显然存在有大量问题。特别是这些还原剂，保护剂等的组合对人体的危害远大于辅酶Q10的正性作用。发明内容
为了解决上述的还原型辅酶Q10制备存在的技术问题，本发明的目的是提供一种使用酶转化法制备还原型辅酶Q10的方法，该方法制备得到的产品为纯天然品，安全可靠。
为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：
还原型辅酶Q10的制备方法，该方法包括以下的步骤：①氧化型辅酶Q10原料进行磷酸化；②通过生物还原酶还原磷酸化的氧化型辅酶Q10；③提取还原反应物中的还原型辅酶Q10。上述步骤的反应方程式如下：
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