(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510145855.8(22)申请日 2015.04.21
C12N 5/04(2006.01)C12Q 1/02(2006.01)
(71)申请人河北双星种业有限公司
地址050060 河北省石家庄市新华区中华北
大街298号颐宏大厦A 座2106室(72)发明人范冬冬 党继革 代云志 李涛
吴涛 赵翠媛 高雪萍 张慧(74)专利代理机构北京中企鸿阳知识产权代理
事务所(普通合伙) 11487
代理人
刘葛 郭鸿雁(54)发明名称
本发明一种向日葵花粉离体萌发的培养基及测定向日葵花粉活力的方法，涉及一种花粉萌发能力的测定方法，特别是涉及一种用于向日葵的花粉萌发能力测定的方法。其目的是为了提供一种向日葵最适的花粉离体萌发培养基和高效、快速、简便测定向日葵花粉活力的方法。本发明的向日葵花粉离体萌发的培养基包括蔗糖、硼酸、CaCl 2·2H 2O、PEG4000、MgSO 4·7H 2O、KNO 3、KH 2PO 4、KCl、Na 2EDTA、FeSO 4·7H 2O、Na 2MoO 4·2H 2O、
CuSO 4·5H 2O、
CoCl 2·6H 2O、VB1和VB6。本发明的测定向日葵花粉活力的方法包括：制备培养基；采集花粉；培养花粉；镜检。本发明的培养基配制简单，成本低；本发明测定向日葵花粉活力的方法简便、易于操作。本发明用于向日葵花粉萌发能力的测定领域。
(51)Int.Cl.
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
权利要求书1页 说明书5页 附图5页
(10)申请公布号CN 104726391 A (43)申请公布日2015.06.24
C N 104726391
A
1.一种向日葵花粉离体萌发的培养基，其特征在于包括：蔗糖100-150g/L、硼酸100-200mg/L、CaCl 2·2H 2O 0.8-1.2g/L、PEG4000 200-300g/L、MgSO 4·7H 2O 300-400mg/L、KNO 3900-1000mg/L、KH 2PO 480-100mg/L、KCl 150-200mg/L、Na 2EDTA 7-8mg/L、FeSO 4·7H 2O0.02-0.03mg/L、Na 2MoO 4·2H 2O 0.2-0.3mg/L、CuSO 4·5H 2O 0.02-0.03mg/L、CoCl 2·6H 2O0.02-0.03mg/L、VB1 0.8-1.2mg/L 和VB6 0.8-1.2mg/L。
2.根据权利要求1所述的向日葵花粉离体萌发的培养基，其特征在于包括：蔗糖110-140g/L、硼酸120-180mg/L、CaCl 2·2H 2O 0.9-1.1g/L、PEG4000 225-275g/L、MgSO 4·7H 2O 325-375mg/L、KNO 3925-975mg/L、KH 2PO 485-95mg/L、KCl 165-185mg/L、Na 2EDTA 7.2-7.8mg/L、FeSO 4·7H 2O 0.022-0.028mg/L、Na 2MoO 4·2H 2O 0.22-0.28mg/L、CuSO 4·5H 2O 0.022-0.028mg/L、CoCl 2·6H 2O 0.022-0.028mg/L、VB1 0.9-1.1mg/L 和VB6 0.9-1.1mg/L。
3.根据权利要求2所述的向日葵花粉离体萌发的培养基，其特征在于包括：蔗糖120g/L、硼酸150mg/L
、CaCl 2·2H 2O 1.0g/L、PEG4000 250g/L、MgSO 4·7H 2O 350mg/L、KNO 3950mg/L、KH 2PO 490mg/L、KCl 175mg/L、Na 2EDTA 7.5mg/L、FeSO 4·7H 2O 0.025mg/L、Na 2MoO 4·2H 2O 0.25mg/L、CuSO 4·5H 2O 0.025mg/L、CoCl 2·6H 2O 0.025mg/L、VB1 1.0mg/L 和VB6 1.0mg/L。
4.一种测定向日葵花粉活力的方法，其特征在于：包括以下步骤：一、制备培养基：按照上述配方制备培养基；二、采集花粉：于上午9-11点采集花盘上的花粉，将所述花粉装入离心管中，避光保存；
三、培养花粉：将所述花粉均匀撒在培养基上，在15-25℃，培养1-2h ；四、镜检，计算萌发率。
一种向日葵花粉离体萌发的培养基及测定向日葵花粉活力
的方法
技术领域
[0001]
本发明涉及一种花粉萌发能力的测定方法，特别是涉及一种用于向日葵的花粉萌
发能力测定的方法。
背景技术
[0002]
向日葵起源于北美洲，是菊科、向日葵属的植物，向日葵的种子具有很高的经济价
值，不但可作成受人喜爱的葵瓜子，更可榨出低胆固醇的高级食用葵花油。向日葵在我国已有几十年的栽培历史.遍布20多个省、市、自治区，是重要的经济作物之一。[0003] 向日葵具有明显的优势，生产中使用的向日葵种子绝大多数为一代。向日葵花粉活力易受内部和外界多种因素的影响。如何鉴定、收集高纯度和高生活力的花粉对保证杂交种子的产量和质量具有至关重要的作用。[0004] 植物花粉活力的检测方法主要有形态检验法、染法、离体萌发测定法等。形态学观察法简单省工，但有些花粉形态正常，但是已经失去活力；染法在染时也会有误差，在显微镜下不易分辨；花粉离体萌发测定法是最有效、最接近实际结果的测定方法。但不同植物使用离体萌发法测定花粉活力需要特定的培养基和培养条件。[0005] 目前，关于向日葵花粉离体萌发的培养基和培养条件还未见报道，且使用目前通用花粉离体萌发培养基无法成功使向日葵花粉萌发。
发明内容
[0006]
本发明要解决的技术问题是提供一种向日葵最适的花粉离体萌发培养体系和高
效、快速、简便测定向日葵花粉活力的方法。
[0007] 本发明的一种向日葵花粉离体萌发的培养基，包括蔗糖100-150g/L、硼酸100-200mg/L、CaCl 2·2H 2O 0.8-1.2g/L、PEG4000200-300g/L、MgSO 4·7H 2O 300-400mg/L、KNO 3900-1000mg/L、KH 2PO 480-100mg/L、KCl 150-200mg/L、Na 2EDTA 7-8mg/L、FeSO 4·7H 2O 0.02-0.03mg/L、Na 2MoO 4·2H 2O 0.2-0.3mg/L、CuSO 4·5H 2O 0.02-0.03mg/L、CoCl 2·6H 2O 0.02-0.03mg/L、VB10.8-1.2mg/L 和VB60.8-1.2mg/L。[0008] 进一步，本发明的一种向日葵花粉离体萌发的培养基，包括蔗糖110-140g/L、硼酸120-180mg/L、CaCl 2·2H 2O 0.9-1.1g/L、PEG4000225-275g/L、MgSO 4·7H 2O 325-375mg/L、KNO 3925-975mg/L、KH 2PO 485-95mg/L、KCl 165-185mg/L、Na 2EDTA 7.2-7.8mg/L、FeSO 4·7H 2O0.022-0.028mg/L、Na 2MoO 4·2H 2O 0.22-0.28mg/L、CuSO 4·5H 2O 0.022-0.028mg/L、CoCl 2·6H 2O 0.022-0.028mg/L、VB10.9-1.1mg/L 和VB60.9-1.1mg/L。[0009] 更进一步，本发明的一种向日葵花粉离体萌发的培养基，包括蔗糖120g/L、硼酸150mg/L、CaCl 2·2H 2O 1.0g/L、PEG4000250g/L、MgSO 4·7H 2O 350mg/L、
KNO 3950mg/L、KH 2PO 490mg/L、KCl 175mg/L、Na 2EDTA 7.5mg/L、FeSO 4·7H 2O 0.025mg/L、Na 2MoO 4·2H 2O0.25mg/L、CuSO 4·5H 2O 0.025mg/L、CoCl 2·6H 2O 0.025mg/L、VB11.0mg/L 和
VB61.0mg/L。
[0010] 本发明一种测定向日葵花粉活力的方法，包括以下步骤：
[0011] 一、制备培养基：按照上述配方制备培养基；
[0012] 二、采集花粉：于上午9-11点采集花盘上的花粉，将所述花粉装入离心管中，避光保存；
[0013] 三、培养花粉：将所述花粉均匀撒在培养基上，在15-25℃，培养1-2h；[0014] 四、镜检，计算萌发率。
[0015] 花粉萌发率是衡量花粉活力状况的主要标志，同时花粉管生长速度亦在一定程度上反映花粉的生活力状况。在授粉前鉴定花粉活性能够减少不必要的损失。因此本发明采用花粉离体萌发测定法检测花粉活性。
[0016] 本发明一种向日葵花粉离体萌发的培养基及测定向日葵花粉活力的方法与现有技术不同之处在于：
[0017] 1、本发明向日葵花粉离体萌发的培养基配制简单，成本低。
[0018] 2、本发明的测定向日葵花粉活力的方法易操作，通过提前、实时观察，避免直接人工授粉后由于花粉活性的缺失而造成的制种经济损失。
[0019] 下面结合附图和实施例对本发明的一种向日葵花粉离体萌发的培养基及测定向日葵花粉活力的方法作进一步说明。
附图说明
[0020] 图1为培养基A培养向日葵花粉萌发镜检图；
[0021] 图2为培养基B培养向日葵花粉萌发镜检图；
[0022] 图3为培养基C培养向日葵花粉萌发镜检图；
[0023] 图4为培养基D培养向日葵花粉萌发镜检图；
[0024] 图5为培养30min的向日葵花粉萌发镜检图；
[0025] 图6为培养1h的向日葵花粉萌发镜检图；
[0026] 图7为培养2h的向日葵花粉萌发镜检图；
[0027] 图8为培养温度为0℃时向日葵花粉萌发镜检图；
[0028] 图9为培养温度为20℃时向日葵花粉萌发镜检图；
[0029] 图10为培养温度为40℃时向日葵花粉萌发镜检图；
[0030] 图11为黑暗条件下向日葵花粉萌发镜检图；
[0031] 图12为室内自然光条件下向日葵花粉萌发镜检图；
[0032] 图13为太阳光直射条件下向日葵花粉萌发镜检图。
具体实施方式
[0033] 实施例
[0034] 本实施例中培养基按表1中配方制备。
[0035] 表1 实施例1-5中的原料配比
[0036]
原料实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5蔗糖(g/L)120150*********
硼酸(mg/L)100200180150120
CaCl
2·2H
2
O(g/L)0.9 1.0 1.1 1.20.8
PEG4000(g/L)250275200225300
MgSO
4·7H
2
O(mg/L)400350325300375
KNO
3
(mg/L)9759501000925900
KH
2PO
4
(mg/L)80851009590
KCl(mg/L)175185150165200
Na
2
EDTA(mg/L)7.88.07.57.27.0
FeSO
4·7H
2
O(mg/L)0.0200.0220.0250.0300.028
Na
2MoO
4
·2H
2
O(mg/L)0.280.250.220.200.30
CuSO
4·5H
2
O(mg/L)0.0280.0220.0200.0250.030
CoCl
2·6H
2
O(mg/L)0.0300.0250.0220.0200.028
VB1(mg/L) 1.1 1.00.90.8 1.2
VB6(mg/L)0.80.9 1.1 1.2 1.0
[0037] 实施例1
[0038] 本实施例一种测定向日葵花粉活力的方法，包括以下步骤：
[0039] 一、制备培养基：按照表1中配方准确称取上述原料溶于水中，即制成上述培养基；
[0040] 二、采集花粉：上午9点于河北试验田采集花盘上的花粉，将所述花粉装入离心管中，避光保存；
[0041] 三、培养花粉：将所述花粉均匀撒在培养基上，在15℃，培养2h；
[0042] 四、镜检，计算萌发率为72％。
[0043] 实施例2
[0044] 本实施例一种测定向日葵花粉活力的方法，包括以下步骤：
[0045] 一、制备培养基：按照表1中配方准确称取上述原料溶于水中，即制成上述培养基；
[0046] 二、采集花粉：上午10点于山东试验田采集花盘上的花粉，将所述花粉装入离心
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