(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010626837.2
(22)申请日 2020.07.01
(71)申请人 成都赛普克生物科技股份有限公司
地址 610000 四川省成都市蒲江县鹤山镇
飞虎路97号
(72)发明人 叶成栋 刘军 罗春勤
(74)专利代理机构 成都巾帼知识产权代理有限
公司 51260
代理人 邢伟
(51)Int.Cl.
G01N 33/558(2006.01)
G01N 33/531(2006.01)
G01N 33/53(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种胶体金免疫层析试纸金
标垫和样品垫的处理液及处理方法，所述处理液
包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、蔗糖、tween -20和
表面活性剂；处理方法包括材料选择、预处理、润
湿和烘干。经本发明处理液和方法处理的试纸条
加样本和/或缓冲液后，金颗粒迅速均匀释放，并
且释放完全，无任何残留；检测后本底干净、洁
白，有助于阴性和阳性的区别判定；提高了产品
的阳性检出率；金标结合物稳定性有极大提高，
组装的试纸条稳定性相应提高。权利要求书1页 说明书8页CN 111638327 A 2020.09.08
C N 111638327
A
1.一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，其特征在于，它包括以下原料：磷酸氢二钠：0.5～1.0 %，磷酸二氢钾：0.05～0.1 %，蔗糖：1～3 %，tween -20：0.5～1 mL/L，表面活性剂：1～2 mL/L，其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为S6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为S6和S9的混合溶液。
2.根据权利要求1所述的一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，其特征在于，它包括以下原料：
磷酸氢二钠：0.58 %，磷酸二氢钾：0.052 %，蔗糖：1.0 %，tween -20：0.5 mL/L，表面活性剂：1.0 mL/L，其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为S6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为S6和S9的混合溶液。
3.一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，其特征在于，它包括以下步骤：
S1. 材料选择：选择未经较多或特殊处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜；
S2. 预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡1.5～2.5h，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为110～130℃；
S3. 润湿：用移液器将权利要求1或2所述的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
S4. 烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在75～85℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
4.根据权利要求1所述的一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，其特征在于，步骤S1中所述聚酯膜在纯化水浸泡过程中换水两次。
5.一种胶体金试纸条，其特征在于，采用以下方法制备：
S1. 制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应蛋白，将标记好的蛋白封闭、离心和浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用胶体金喷金机将浓缩的胶体金溶液喷涂到权利要求3所述处理后的聚酯膜上，37～40℃鼓风烘干，即制备成金标结合垫；
S2. 组装：将上述制备的金标结合垫和权利要求3所述处理后的玻璃纤维素膜及其他必要组分组合成胶体金试纸条。
6.根据权利要求5所述的一种胶体金试纸条，其特征在于，步骤S1中所述标记的相应蛋白为金黄葡萄球菌蛋白A、检测人心肌钙蛋白小鼠单克隆抗体IgG、检测犬瘟热病毒的小鼠单克隆抗体IgG或大肠杆菌表达的抗原中的任意一种。
7.根据权利要求5所述的一种胶体金试纸条，其特征在于，步骤S1中所述离心的条件为：转速13000～17000rpm，离心时间15～30min。
8.根据权利要求5所述的一种胶体金试纸条，其特征在于，步骤S1中所述浓缩的胶体金溶液为原体积的1/10。
权 利 要 求 书1/1页CN 111638327 A
一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液及处理
方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液及处理方法，属于免疫层析检测技术领域。
背景技术
[0002]胶体金免疫层析法(ColloidalGoldImmunochromatographyAssay，GICA)是一种将抗原抗体特异性反应通过胶体金标记和免疫层析表现出来的一种快速检测方法，该方法与传统的血清学检测和PCR等分子生物学方法相比具有快速、简便、无需特殊实验设备、结果可靠等优势。
[0003]金标垫和样品垫是胶体金免疫层析试纸的重要组成部分，样品垫在使用前一般需要通过样品垫处理液进行处理，由于检测样本及项目的不同，不处理或使用常规的样品垫处理液应用于检测时，存在较大的问题，例如：出现假阳性和假阴性反应、阴阳性对比度不高、不能有效的促进金标结合垫中的金颗粒释放等。金标垫的主要作用是吸附标记有相应蛋白的胶体金颗粒，常用材料有聚酯膜。金标垫决定了标记有相应蛋白的胶体金颗粒的活性(包括灵敏度和特异性)、释放效果以及长期的稳定性，因此对胶体金免疫层析试纸的效果影响很大。目前金标结合垫的制备方法多为直接将标记好的浓缩的金颗粒喷涂或浸泡到聚酯膜上。或将聚酯膜通过常规的处理液浸泡处理后，再将标记好的浓缩的金颗粒喷涂或浸泡到聚酯膜上。但是使用过程中发现，该方法制备的金标结合垫在检测过程中释放慢且不完全，影响检测结果的准确性和灵敏度等。
发明内容
[0004]本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液；
[0005]本发明的另一目的提供一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法。[0006]本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，它包括以下原料：
[0007]磷酸氢二钠：0.5～1.0％，磷酸二氢钾：0.05～0.1％，蔗糖：1～3％，tween-20：0.5～1mL/L，表面活性剂：1～2mL/L。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为S6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为S6和S9的混合溶液。
[0008]作为优选方案，它包括以下原料：
[0009]磷酸氢二钠：0.58％，磷酸二氢钾：0.052％，蔗糖：1.0％，tween-20：0.5mL/L，表面活性剂：1.0mL/L。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为S6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为S6和S9的混合溶液。
[0010]一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，它包括以下步骤：[0011]S1.材料选择：选择未经较多或特殊处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜；
[0012]S2.预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡1.5～2.5h，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为110～130℃；
[0013]S3.润湿：用移液器将上述的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
[0014]S4.烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在75～85℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
[0015]进一步地，步骤S1中所述聚酯膜在纯化水的浸泡过程中换水两次。
[0016]一种胶体金试纸条，采用以下方法制备：
[0017]S1.制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应蛋白，将标记好的蛋白封闭、离心和浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用胶体金喷金机将浓缩的胶体金溶液喷涂到上述处理后的聚酯膜上，37～40℃鼓风烘干，即制备成金标结合垫；
[0018]S2.组装：将上述制备的金标结合垫和经上述方法处理后的玻璃纤维素膜组合成胶体金试纸条。
[0019]进一步地，步骤S1中所述的标记相应蛋白为金黄葡萄球菌蛋白A、检测人心肌钙蛋白小鼠单克隆抗体IgG、检测犬瘟热病毒的小鼠单克隆抗体IgG或大肠杆菌表达的抗原中的任意一种。
[0020]进一步地，步骤S1中所述离心的条件为：转速13000～17000rpm，离心时间15～30min。
[0021]进一步地，步骤S1中所述浓缩的胶体金溶液为原体积的1/10。
[0022]本发明具有以下优点：提供了一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，改处理液能有效改善样品垫和金标垫的一些物理或化学性质；本发明公开的处理方法与普通处理方式比较，胶体金免疫层析试纸在以下方面有明显的提高：
[0023] 1.加样本和/或缓冲液后，金颗粒迅速均匀释放，并且释放完全，无任何残留；[0024] 2.检测后本底干净、洁白，有助于阴性和阳性的区别判定；
[0025] 3.提高了产品的阳性检出率；
[0026] 4.金标结合物稳定性有极大提高，组装的试纸条稳定性相应提高。
[0027]即：通过本发明方法改进后的试纸条，提高了检测效果，增加了产品存放的稳定性。
具体实施方式
[0028]下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述：
[0029]实施例1：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，它包括以下原料：[0030]磷酸氢二钠：0.58％，磷酸二氢钾：0.052％，蔗糖：1.0％，tween-20：0.5mL/L，表面活性剂：1.0mL/L。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为S6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为S6和S9的混合溶液。
[0031]实施例2：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，它包括以下原料：[0032]磷酸氢二钠：0.8％，磷酸二氢钾：0.08％，蔗糖：2.0％，tween-20：0.8mL/L，表面活
性剂：1.5mL/L。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为S6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为S6和S9的混合溶液。
[0033]实施例3：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，它包括以下原料：[0034]磷酸氢二钠：1.0％，磷酸二氢钾：0.1％，蔗糖：3.0％，tween-20：1.0mL/L，表面活性剂：2.0mL/L。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为S6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为S6和S9的混合溶液。
[0035]实施例4：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，它包括以下步骤：
[0036]S1.材料选择：选择未经处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜；
[0037]S2.预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡1.5h，浸泡过程中换水两次，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为110℃；
[0038]S3.润湿：用移液器将实施例1的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
[0039]S4.烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在75℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
[0040]实施例5：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，它包括以下步骤：
[0041]S1.材料选择：选择未经特殊处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜；
[0042]S2.预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡2.5h，浸泡过程中换水两次，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为130℃；
[0043]S3.润湿：用移液器将实施例2的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
[0044]S4.烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在85℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
[0045]实施例6：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，它包括以下步骤：
[0046]S1.材料选择：选择未经处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜；
[0047]S2.预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡2h，浸泡过程中换水两次，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为120℃；
[0048]S3.润湿：用移液器将实施例3的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
[0049]S4.烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在80℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
[0050]实施例7：一种胶体金试纸条，采用以下方法制备：
[0051]S1.制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记金黄葡萄球菌蛋白A，将标记好的蛋白封闭、离心和浓缩后得到为原体积1/10的浓缩胶体金溶液，其中所述离心的条件
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