(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910292940.5
(22)申请日 2019.04.12
(71)申请人 上海交通大学
地址 200240 上海市闵行区东川路800号
(72)发明人 吴金鸿 吴乔羽 杨丹璐 于颖
顾欣哲 龚盛祥 汪少芸 王正武
(74)专利代理机构 上海旭诚知识产权代理有限
公司 31220
代理人 郑立
(51)Int.Cl.
C12N 15/12(2006.01)
C07K 14/435(2006.01)
C12N 15/70(2006.01)
A23L 3/3526(2006.01)
C12N 1/04(2006.01)
A01N 1/02(2006.01) (54)发明名称
一种雪蚤抗冻蛋白SF-P的制备方法及其应
用
(57)摘要
本发明公开了一种雪蚤抗冻蛋白SF -P的制
备方法及应用。所述抗冻肽是通过合成雪蚤抗冻
首先将人工合成的SF -P编码基因插入到PET28a -
sumo载体中，构建所述抗冻肽的表达质粒；将重
组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞，进行蛋白表
达，用亲和层析法对蛋白进行纯化后进行酶切，
获得SF -P抗冻肽。大肠杆菌具有遗传稳定性，可
可以高量、稳定地分泌表达雪蚤抗冻肽SF -P，在
抗冻蛋白领域发挥了重要的作用。
权利要求书1页 说明书4页序列表1页 附图1页CN 110055257 A 2019.07.26
C N 110055257
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110055257 A
1.一种重组雪蚤抗冻肽SF-P的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤一：将人工合成的抗冻肽编码基因构建于克隆载体上；
步骤二：将含有所述抗冻肽表达序列的重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞中，进行蛋白表达；
步骤三：用亲和层析法对表达蛋白进行纯化；
步骤四：使用蛋白酶切开纯化蛋白标签，获得所述抗冻肽。
2.如权利要求1所述的重组雪蚤抗冻肽SF-P的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，合成的的抗冻肽基因长度为252bp，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。
3.如权利要求1所述的重组雪蚤抗冻肽SF-P的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述克隆载体包括标签序列，所述标签序列如SEQ ID NO.2所示。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述克隆载体为PET28a-sumo载体。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，所述大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，所述亲和层析法中所用层析柱为镍柱。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，所述蛋白酶为sumo蛋白酶，所切标签为His-sumo标签。
8.一种如权利要求1所述重组雪蚤抗冻肽SF-P的制备方法制备的重组雪蚤抗冻肽在生物和食品抗冻保存中的应用。
9.如权利要求8所述的重组雪蚤抗冻肽在抗冻中的应用，其特征在于，所述抗冻中的应用具体为菌体冻存中的保证菌体的活力。
10.如权利要求9所述的重组雪蚤抗冻肽在抗冻中的应用，其特征在于，所述菌体为嗜热链球菌。
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