(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911254151.9
(22)申请日 2019.12.10
(66)本国优先权数据
201910706415.3 2019.08.01 CN
(71)申请人 山东第一医科大学(山东省医学科
学院)
地址 271016 山东省泰安市长城路619号山
东第一医科大学药理教研室
(72)发明人 侯雪芹 张萌 张汉霆
(74)专利代理机构 济南誉丰专利代理事务所
(普通合伙企业) 37240
代理人 吴乃美
(51)Int.Cl.
A61K 9/127(2006.01)
A61K 31/4045(2006.01)
A61P 17/18(2006.01)A61P 17/16(2006.01)A61P 17/00(2006.01)A61K 8/49(2006.01)A61K 8/14(2006.01)A61Q 19/08(2006.01)A61Q 17/04(2006.01) (54)发明名称
用
(57)摘要
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种褪
黑素柔性脂质体及其制备方法和应用。
该褪黑素柔性脂质体由如下重量份的原料制成：10-30份、
卵磷脂70.00-90.00份、胆固醇10-30份、脱氧胆
酸钠10-30份。褪黑素柔性脂质体经皮渗透效果
更好。大鼠药动学实验结果显示柔性脂质体的
AUC比普通脂质体提高了1.82倍，表明柔性脂质
体可以提高褪黑素经皮吸收的生物利用度。小鼠
药效学实验结果表明，外用柔性脂质体具有抗光
了角质层脂质和角蛋白的结构，能够对抗紫外线
晒伤造成的皮肤损伤。权利要求书1页 说明书18页 附图13页CN 111329837 A 2020.06.26
C N 111329837
A
1.一种褪黑素柔性脂质体，由如下重量份的原料制成：
10.00-30.00份、卵磷脂70.00-90.00份、胆固醇10.00-30.00份、脱氧胆酸钠10.00-30.00份。
2.根据权利要求1所述的褪黑素柔性脂质体，其特征在于，由如下重量份的原料制成：15.00-25.00份、卵磷脂75.00-85.00份、胆固醇15.00-25.00份、脱氧胆酸钠15.00-25.00份。
3.根据权利要求2所述的褪黑素柔性脂质体，其特征在于，由如下重量份的原料制成：18.90份、卵磷脂80.00份、胆固醇20.00份、脱氧胆酸钠18.91份。
4.权利要求1或2或3所述的褪黑素柔性脂质体的制备方法，包括如下步骤：
精密称取处方量的褪黑素、卵磷脂、胆固醇和脱氧胆酸钠置于反应器中，加入氯仿和无水乙醇水浴超声溶解，置于转蒸发仪上在40℃条件下减压旋转蒸发至有机溶剂挥干在反应器壁形成一层薄膜，然后加入蒸馏水继续减压旋转蒸发1h使其充分水化，最后用超声波细胞粉碎机超声15min，即得褪黑素柔性脂质体。
5.根据权利要求4所述的褪黑素柔性脂质体的制备方法，其特征在于，所述氯仿用量与与卵磷脂和胆固醇总用量比为1:10，单位为ml：mg。
6.根据权利要求4所述的褪黑素柔性脂质体的制备方法，其特征在于，所述无水乙醇的用量与卵磷脂和胆固醇总用量比为1:10，单位为ml：mg。
7.根据权利要求4所述的褪黑素柔性脂质体的制备方法，其特征在于，所述蒸馏水的用量与与卵磷脂和胆固醇总用量比为1:10，单位为ml：mg。
8.权利要求1或2或3所述的褪黑素柔性脂质体在制备抗皮肤光老化药物或护肤品中的应用。
9.权利要求1或2或3所述的褪黑素柔性脂质体在制备对抗紫外线晒伤造成的皮肤病变的药物中的应用。
10.权利要求1或2或3所述的褪黑素柔性脂质体在制备对抗紫外线晒伤造成的皮肤病变的护肤品中的应用。
权 利 要 求 书1/1页CN 111329837 A
一种褪黑素柔性脂质体及其制备方法和应用
技术领域
[0001]本发明属于医药技术领域，具体涉及一种褪黑素柔性脂质体及其制备方法和应用。
背景技术
[0002]褪黑素(Melatonin,MT)又名松果腺素，俗称人体“脑白金”，其化学结构式为N-乙酰基-5-甲氧基胺，分子式为C13N2H16O2，是动植物体内都可分泌的一种具有抗氧化活性的激素。在人体中，褪黑素是人脑中松果腺分泌的一种化合物，能够抗氧化，调整睡眠与清醒节律，有助于改善睡眠，增强人体免疫力，保持机体内环境的平衡及提高机体防御能力；并能够作用于分泌系统而延缓衰老，维持血液中的锌含量，抵抗肿瘤疾病及心脑血管疾病。但是其在体内含量极少，往往需要通过补充外源性褪黑素来维持机体正常的生理功能。[0003]通常使用口服给药的途径来补充褪黑素，但是由于肝脏首过效应，大部分药物被肝脏所降解，能被人体利用的甚少。而且褪黑素在体内的半衰期短，溶解度较低且不稳定，限制了其在体内的吸收，影响了褪黑素普通制剂的疗效。另外，长期口服褪黑素会引发心情焦虑，不安，烦躁，多疑的情况发生。因此，开发一种新的褪黑素剂型改变口服给药的方式，从而解决褪黑素口服肝脏首过效应强，吸收利用度低，副作用大的问题，是目前需要解决的问题。
发明内容
[0004]本发明的目的是提供一种褪黑素柔性脂质体。
[0005]本发明的另一目的在于提供一种褪黑素柔性脂质体的制备方法。
[0006]本发明的又一目的在于提供褪黑素柔性脂质体在制备抗皮肤光老化药物或护肤品中的应用。
[0007]本发明的还一目的在于提供制备对抗紫外线晒伤造成的皮肤病变的药物中的应用和/或褪黑素柔性脂质体在制备对抗紫外线晒伤造成的皮肤病变的护肤品中的应用。
[0008]本发明通过下述的技术方案来解决以上的技术问题的：
[0009]一种褪黑素柔性脂质体，由如下重量份的原料制成：10.00-30.00份、卵磷脂70.00-90.00份、胆固醇10.00-30.00份、脱氧胆酸钠10.00-30.00份。
[0010]优选的，上述的褪黑素柔性脂质体，由如下重量份的原料制成：15.00-25.00份、卵磷脂75.00-85.00份、胆固醇15.00-25.00份、脱氧胆酸钠15.00-25.00份。
[0011]更优选的，上述的褪黑素柔性脂质体，由如下重量份的原料制成：
[0012]18.90份、卵磷脂80.00份、胆固醇20.00份、脱氧胆酸钠18.91份。
[0013]上述的褪黑素柔性脂质体的制备方法，包括如下步骤：
[0014]精密称取处方量的褪黑素、卵磷脂、胆固醇和脱氧胆酸钠置于反应器中，加入氯仿和无水乙醇水浴超声溶解，置于转蒸发仪上在40℃条件下减压旋转蒸发至有机溶剂挥干在
反应器壁形成一层薄膜，然后加入蒸馏水继续减压旋转蒸发1h使其充分水化，最后用超声波细胞粉碎机超声15min，即得褪黑素柔性脂质体。
[0015]所述氯仿用量与卵磷脂和胆固醇总用量比为1:10，单位为ml：mg。所述卵磷脂和胆固醇总用量为卵磷脂和胆固醇的用量之和。
[0016]所述无水乙醇的用量与胆与卵磷脂和胆固醇总用量比为1:10，单位为ml：mg。[0017]所述蒸馏水的用量与卵磷脂和胆固醇总用量比为1:10，单位为ml：mg。
[0018]所述的褪黑素柔性脂质体在制备抗皮肤光老化药物或护肤品中的应用。[0019]所述的褪黑素柔性脂质体在制备对抗紫外线晒伤造成的皮肤病变的药物中的应用。
[0020]所述的褪黑素柔性脂质体在制备对抗紫外线晒伤造成的皮肤病变的护肤品中的应用。
[0021]所述的褪黑素柔性脂质体在制备对抗紫外线对皮肤弹性纤维的损伤的护肤品中的应用。
[0022]所述的褪黑素柔性脂质体在制备对抗光老化造成的皮肤组织中胶原含量降低的护肤品中的应用。
[0023]所述的褪黑素柔性脂质体在制备对抗光老化造成的皮肤松弛、皱褶的护肤品中的应用。
[0024]本发明的有益效果：
[0025](1)通过Design-Expert软件优化后的最佳处方为：褪黑素18.90mg、卵磷脂80.00mg、胆固醇20.00mg和脱氧胆酸钠18.91mg，此处方制备的柔性脂质体的粒径为49.47nm、包封率为73.91％、载药量为9.92％。对其进行的FTIR、DSC和XRD分析结果证明将褪黑素制备成柔性脂质体后化学结构未发生变化，并且药物成功包裹在了柔性脂质体膜材料中。小鼠离体皮肤渗透实验结果显示柔性脂质体单位面积累积渗透量比普通脂质体高1.5倍，表明柔性脂质体更容易渗透进入体内。大鼠药动学实验结果显示柔性脂质体的AUC 比普通脂质体提高了1.82倍，表明柔性脂质体可以提高褪黑素经皮吸收的生物利用度。小鼠药效学实验结果表明，外用褪黑素制剂具有抗光老化的作用。褪黑素经皮渗透机制的实验结果显示，柔性脂质体经过皮肤进入体内改变了角质层脂质和角蛋白的结构，且给药时间不同被朗格汉斯细胞吞噬的数量也不同。
[0026](2)通过薄膜分散法制备的褪黑素柔性脂质体具有较小的粒径和PDI，较高的包封率和载药量，且对其进行的理化性质表征良好。体外经皮渗透实验结果提示，褪黑素柔性脂质体经皮渗透效果更好。通过透皮机制的研究证实，柔性脂质体经皮渗透可以改变皮肤角质层脂质和角蛋白的结构，且能够被朗格汉斯细胞吞噬呈递进入体内发挥作用。通过药动学和药效学实验证明，与普通脂质体相比，褪黑素柔性脂质体更容易经过皮肤渗透进入体内发挥药效，生物利用度得以改善，且具有抗皮肤光老化的效果，生物相容性良好，为褪黑素对抗紫外线晒伤造成的皮肤病变的预防和提供了一些理论依据。
[0027](3)褪黑素口服常用剂量为1～3mg，采用褪黑素柔性脂质体给药，可以通过皮肤外用，大大降低了褪黑素的使用剂量，从而也就减小了褪黑素的副作用。
[0028](4)利用纳米递送系统改变药物的剂型及给药方式，将药物包裹在柔性脂质体内用于经皮给药，不仅可以减小药物的粒径，增加药物的溶解度，避免首过效应，而且由于磷
脂双分子层及膜软化剂的存在，还能够将更多的药物包封在柔性脂质体内，通过自身的变形能力，挤压进入皮肤的更深层，改善褪黑素的吸收状况和提高生物利用度。柔性脂质体作为一种新型的皮肤给药系统，除具有普通脂质体作为皮肤给药的优点外，还具有高度的柔软性及渗透性，能携载更多的药物通过皮肤角质层屏障作用渗透进入皮下组织，而且本身还能恢复形变防止药物泄露。
[0029](5)通过改良的Franz扩散池考察了褪黑素柔性脂质体在小鼠离体皮肤中的渗透效率，结果表明，与普通脂质体相比，将药物制备成柔性脂质体可以进一步提高药物的透皮吸收效果，而且可以不经过肝肠循环，减少不良反应。本次实验制备的褪黑素柔性脂质体的平均透皮速率为0.0176mg·cm-2·h-1，比普通脂质体高2倍；累积渗透量为0.2514mg·cm-2，比普通脂质体高1.5倍，说明褪黑素柔性脂质体具有良好的透皮效果，是应用于临床的理想给药剂型。
[0030](6)通过经皮给药的方式测定了褪黑素脂质体在大鼠体内的药代动力学特征，从实验结果可以看
出，褪黑素柔性脂质体的药时曲线下面积及血药浓度均比普通脂质体大，表明柔性脂质体中褪黑素经过皮肤进入体内的含量较多，生物利用度从而得到改善。但是清除率与普通脂质体相比有所降低，反映出药物在体内的滞留时间延长，使药物吸收增加，同时效果也得到增强。
[0031](7)外用褪黑素制剂经紫外线辐射引起的皮肤光老化的作用实验结果表明，与只在紫外灯下照射的小鼠相比，施用褪黑素脂质体的小鼠皮肤在经紫外线照射后弹性及含水量均有所升高，胶原纤维束排列整齐且增多，皮肤结构较完整，提示该制剂不会影响正常的皮肤结构，生物相容性好，这为褪黑素化妆品的开发提供了参考和依据。
[0032](8)通过SEM、DSC和FTIR分析考察了柔性脂质体增强皮肤渗透的机制。结果表明，柔性脂质体可以改变角质层脂质和角蛋白的结构，从而克服了角质层的屏障作用以更有效的渗透进入皮肤。最后还从免疫学角度初步研究了脂质体是如何经过皮肤渗透进入体内发挥作用的，结果显示，将脂质体涂抹于皮肤上作为一种抗原可以被皮肤表皮的LC摄取、处理，最后呈递给T细胞发挥作用，且随着时间的变化LC摄取量也随之发生变化，这为后期LC 在皮肤免疫学作用中的深入研究产生了积极的影响。
[0033](9)褪黑素对皮肤弹性纤维的影响实验结果表明，发现褪黑素柔性脂质体对抗UV 对皮肤弹性纤维的损伤，其效果接近其正常形态及生理结构。褪黑素柔性脂质体对光老化小鼠皮肤组织中胶原含量的影响实验结果表明，MC组与SC组比较，皮肤胶原含量极显著降低(P<0.05)，提示小鼠皮肤光老化模
型造模成功。与MC组相比较，VC组小鼠皮肤胶原含量无显著差异(P>0.05)，与VC组相较，给予小鼠皮肤褪黑素脂质体尤其是柔性脂质体后，小鼠皮肤的胶原含量均极显著增加(P<0.05)，且接近正常水平。褪黑素脂质体对光老化小鼠皮肤组织中MMPs水平的影响实验结果表明，老鼠皮肤松弛、皱褶，其皮肤组织中MMP-1、MMP-3表达异常升高，给予褪黑素脂质体小鼠皮肤组织中MMP-1、MMP-3含量明显降低；其中褪黑素柔性脂质体能明显抑制UV引起的小鼠皮肤内MMP-1、MMP-3分泌的增加，其效果优于普通褪黑素脂质体。
附图说明
[0034]图1为本发明的褪黑素柔性脂质体处方优化实验不同因素与响应值关系三维效应
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