瘤坏死因子拮抗剂皮下注射２５ｍｇ，２次／周，甲氨蝶呤１０ｍｇ口服，每周１次［１２］。眼科以局部用药为主。其疗效显著，能缩短葡萄膜炎病程，耐受性和安全性良好。不同的方法有各自的优缺点，可以根据患者的病情及经济基础，选择适合患者的方案。４ 小 结 ＨＬＡ‐Ｂ２７阳性的患者中，以强直性脊柱炎为最常见的脊
柱关节病。作为强直性脊柱炎在关节外症状的一种表现，葡萄膜炎的出现不能忽视。由于有４１％的患者以葡萄膜炎为首发症状就诊眼科，为了避免漏诊，眼科医生除了询问患者的骶髂关节病史外，ＨＬＡ‐Ｂ２７应作为一项重要的实验室检查，帮助医生更加准确地辨别患者的眼部病变是否为强直性脊柱炎伴发的一种症状，到疾病的根源所在，才能够更好地减轻患者的痛苦。参考文献
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（收稿日期：２０１５‐１１‐１２）
作者简介：赵海歌，女，在读研究生，主要从事免疫学与分子生物学研究。 △
通讯作者，Ｅ‐ｍａｉｌ：159****9171＠１６３．ｃｏｍ。
·综 述·
ＰＣＲ技术在类风湿性关节炎中的应用及其研究进展
赵海歌１
，丑广程２
，陈占良２
，王建国２
，段 琳２
综述，王淑仙２△
审校
（１．河北大学临床医学院研究生院，河北保定０７１０００；２．河北大学附属医院检验科，河北保定０７１０００）
关键词：类风湿性关节炎； 聚合酶链式反应； 综述ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３‐４１３０．２０１６．０５．０２７
文献标识码：Ａ
文章编号：１６７３‐４１３０（２０１６）０５‐０６４３‐０４
类风湿性关节炎（ＲＡ）是一种常见的自身免疫性疾病，据不完全统计，我国有３００万人以上患有ＲＡ，其发病率为０．３％～０．６％。ＲＡ发病原因尚不清楚，现认为其发病原因有感染因素、遗传因素和免疫因素，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现。ＲＡ诊断主要依靠临床表现、Ｘ射线检查及类风湿因子（ＲＦ）检测。随着免疫技术的不断发展，许多自身抗体广泛应用于ＲＡ的诊断，主要应用酶联免疫法检测抗核周因子（ＡＰＦ）、抗角蛋白抗体（ＡＫＰ）、抗环瓜氨酸抗体（抗ＣＣＰ抗体），以及其ＲＦ分型（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ）。这些检查可以提供早期诊断依据，提高患者疾病的治愈率。近年来随着分子生物学技术的发展，可以直接从基因水平检测疾病，提供更可靠的特异性的临床诊断依据。 聚合酶链式反应（ＰＣＲ）是体外扩增ＤＮＡ的技术，它的研究已经有很长的发展历史，１９８５年美国科学家申请了有关ＰＣＲ的第一个专利，在ｓｃｉｅｎｃｅ杂志上发表了第一篇ＰＣＲ的学术论文，从此ＰＣＲ技术得到了生命科学界的普遍认同。但是最初使用的ＤＮＡ聚合酶是大肠杆菌的ＤＮＡ聚合酶Ⅰ的Ｋｌｅ‐
ｎｏｗ片段，但是Ｋｌｅｎｏｗ酶不耐热，在ＤＮＡ模板进行热变形时会导致此酶钝化，每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期，这使操作程序更加复杂化。１９８８年初，有研究者改用Ｔ４ＤＮＡ聚合酶进行扩增，其扩增的产物具有均一性，但是每循环一次也需要重新加入酶。１９８８年有研究者提取出了ＴａｑＤＮＡ酶，此酶耐高温在热变性时不会被钝化，不必在每次扩增反应后再加入新酶，
从而极大地提高了ＰＣＲ扩增效率。在此之后，ＰＣＲ方法不断被改进，很多新技术不断发展，比如具有３′→５′修复活性的热稳定ＤＮＡ聚合酶代替之前不具有３′→５′修复活性的ＤＮＡ聚合酶。此外，在基础原理上发展了新的技术，比如后来的反转录ＰＣＲ、定量ＰＣＲ及芯片ＰＣＲ等新技术。本文就ＰＣＲ技术在ＲＡ中的应用与发展做一简单综述。
１ ＰＣＲ‐ＳＳＯ反向杂交法和ＰＣＲ‐ＳＳＰ法在ＲＡ中的应用 ＰＣＲ‐ＳＳＯ即ＰＣＲ序列特异性寡核苷酸扩增分析，其基本检测原理是顺序特异性寡核苷酸作为探针，用同位素或者是非放射性核素标记，然后与ＰＣＲ扩增的目标产物片段杂交，根据阳性斑点判断基因型。此种方法如果在基因型较多时需要数
量较多的探针对每个ＤＮＡ进行多次杂交，操作繁琐，所以后来在此基础上形成了ＰＣＲ‐ＳＳＯ反向杂交技术，即将各种不同的探针固定于同一张陌上，再将ＰＣＲ产物标记，以ＰＣＲ产物（待测基因ＤＮＡ）反过来与探针杂交。这样一次即可完成多个等位基因分析，此种方法灵敏度高、特异度强、需要样本量少。
ＰＣＲ‐ＳＳＰ即ＰＣＲ序列特异性引物，其基本检测原理是设计出特异性引物，借助ＰＣＲ获得的特异性产物，可通过电泳分析带型决定基因的型别，这极大地简化了实验操作步骤，简单易行。ＰＣＲ‐ＳＳＯ和ＰＣＲ‐ＳＳＰ主要用于基因分型的研究，下面介绍这两种方法在ＲＡ患者中的应用。
人类白细胞分化抗原（ＨＬＡ）‐ＤＲ４为ＲＡ的易感因素［１］，ＨＬＡ‐ＤＲ４携带者在一些细小病毒等病原体感染时，可在短期内发展成ＲＡ，这较ＨＬＡ‐ＤＲ阴性者时间短，朱乃硕等［２］用ＰＣＲ‐ＳＳＯ法研究发现ＲＡ患者ＨＬＡ‐ＤＲ４表达率要高于健康对照组。后来研究发现ＣＤ２５和ＣＤ２８等共刺激分子也可能与ＲＡ的发生、发展相关［３‐４］。顾国浩等［５］用ＰＣＲ‐ＳＳＰ研究发现ＨＬＡ‐ＤＲ４阳性的活动性ＲＡ患者的活动度明显高于ＨＬＡ‐ＤＲ４阴性者，表现为Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）显著增高者高达７８．６％，另外ＨＬＡ‐ＤＲ４阳性ＲＡ患者以ＩｇＧ、ＩｇＡ增高为主，而ＨＬＡ‐ＤＲ４阴性者则以ＩｇＭ增高为主，提示ＨＬＡ‐ＤＲ４基因与ＲＡ发生、发展密切相关，这与朱乃硕等［２］的研究结果相似。活性Ｔ细胞，尤其是细胞毒性Ｔ细胞在ＲＡ的病理损伤中起重要作用，而共刺激分子ＣＤ２８在Ｔ细胞特异性激活中是不可缺少的［６‐７］，ＣＤ２５是白细胞介素２受体α（ＩＬ‐２Ｒα）分子，主要分布于活化Ｔ细胞、Ｂ细胞和巨噬细胞上，白细胞介素‐２（ＩＬ‐２）与之结合后发挥生物学活性。顾国浩等［５］研究发现活动性ＲＡ患者ＣＤ２８＋细胞百分比明显低于健康对照组，提示ＣＤ２８分子在ＲＡ的免疫失调和关节炎症中起重要作用，活动性ＲＡ患者ＣＤ２５＋淋巴细胞明显增高，表明患者淋巴细胞处于高度活化状态［３］，活动性ＲＡ患者ＣＤ２５表达上升而ＣＤ２８表达下降［４］。 通过以上几种指标可以看出用这两种方法可以从基因水平检测与ＲＡ相关的因素但是这两种方法各有优缺点。ＰＣＲ‐ＳＳＰ和ＰＣＲ‐ＳＳＯ在操作时标本需要量不多，但是需要大量的试剂，ＰＣＲ‐Ｓ
ＳＯ在分析时检测成本高，ＰＣＲ‐ＳＳＰ在检测时不易自动化，重复实验需要重提ＤＮＡ且必须使用紫外凝胶成像仪保留原始资料极大地增加了实验成本。并且两者在ＨＬＡ基因分型时不能识别非经典的ＨＬＡ，所以这些基因是否与ＲＡ有关需要进一步研究。
２ 差异显示ＰＣＲ在ＲＡ患者中的应用
高等动物在生命活动过程中，由于基因的选择性表达、各种物理化学因素导致的突变及生理因素等会导致基因表达图谱的差异。分析比较不同条件下基因表达差异能够帮助了解组织分化发育及疾病的发生机制。
差异显示ＰＣＲ技术是将随机引物和锚定ｃＤＮＡ的引物结合使用，利用一系列的ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）引物，逆转录真核生物细胞中全部表达的ｍＲＮＡ，通过ＰＣＲ扩增的方法，转换成ｃＤＮＡ双链，再利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，将有差异的片段分开，筛选出目的基因．
基因在不同组织细胞中的表达有差异，在细胞的不同阶段和状态中的表达也有差异，研究基因表达谱的变化有助于理解细胞分化、增生、细胞周期的调节和细胞衰老凋亡的过程。差异显示ＰＣＲ（ＤＤ‐ＰＣＲ）是一种以反转录ＰＣＲ为基础的研究基因表达差异的技术，可用于肿瘤和多种疾病的分子遗传学研究，是筛选差异表达基因的有效方法。ＤＤ‐ＰＣＲ基本原理是取两种从不同组织或细胞中分离出来的细胞质ＲＮＡ或ｍＲＮＡ做为模板，利用可能的１２种不同序列的寡核苷酸作为引物ｏｌ‐
ｉｇｏ（ｄＴ）进行逆转录，逆转录合成的１２种互补ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）几乎代表真核生物某一特定细胞中所有ｍＲＮＡ，通过ＰＣＲ扩增的方法，转换成ｃＤＮＡ双链，再利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，将有差异的片段分开，筛选出目的基因。ＤＤ‐ＰＣＲ是筛选差异表达基因比较有效的方法之一。有研究者设计的第三代ＤＤ‐ＰＣＲ引物中，５′端引物为８种，３′引物仍为３种，它们的组合（共２４组）将覆盖所有的ｍＲＮＡ序列［８‐９］，利用ＤＤ‐ＰＣＲ对ＲＡ患者滑膜细胞基因进行分析。
王吉村等［１０］用差示ＰＣＲ技术检测ＲＡ患者滑膜细胞中高表达基因发现，ＲＡ患者滑膜细胞高表达ＨＳＰ７０，并且这与Ｓｃｈｅｔｔ等［１１］用免疫组化研究的结果一致，他们认为，这是由于在炎性因子或切力作用下，滑膜细胞细胞内热休克蛋白因子‐１的转录活性增高所致。王夏［１２］用实时荧光定量ＰＣＲ在研究内质网基因表达时发现非结构蛋白（ＵＰＲ）通路基因ＡＴＦ６，ＩＲＥ１表达水平与病程呈正相关。之前也有研究表明蛋白热休克蛋白（ＨＳＰｓ）和ＥＲ伴侣分子如免疫球蛋白重链结合蛋白（ＢＩＰ）被证明能激发Ｂ和Ｔ细胞免疫活性。在ＲＡ患者，滑膜组织内过度表达的ＢＩＰ对滑膜Ｔ细胞有高度的选择性［１３‐１４］。同时研究者还用差示ＰＣＲ技术检测了ＲＡ患者体内的蛋白酶Ｂ基因，发现ＲＡ患者滑膜细胞高表达组织蛋白酶Ｂ的基因［１０］。这些研究结果都表明ＤＤ‐ＰＣＲ是筛选差异表达基因比较有效的方法之一。
３ 反转录ＰＣＲ在ＲＡ患者中的应用
反转录ＰＣＲ（ＲＴ‐ＰＣＲ）是一种以细胞内总ＲＮＡ或者ｍＲ‐ＮＡ为材料进行体外扩增的技术。由于ＰＣＲ中的耐热的ＤＮＡ酶（Ｔａｑ酶）不能以ＲＮＡ或ｍＲＮＡ为模板，所以首先要对ＲＮＡ或ｍＲＮＡ进行反转录生成与之互补的ｃＤＮＡ，然后以ｃＤＮＡ为模板进行扩增。ＲＮＡ、ＤＮＡ印迹杂交技术、原位杂交组化的进行，提取ＲＮＡ需标本剂量大、细胞数多，一般外周血需５０ｍＬ分离淋巴细胞方可提取ＲＮＡ，进行ＲＮＡ电泳后转膜杂交。有研究者应用经典的ＲＮＡ印迹杂交和ＲＴ‐ＰＣＲ两种技术进行实验，表明ＲＴ‐ＰＣＲ与ＲＮＡ印迹方法完全具有可比性、相似性，认为ＲＴ‐ＰＣＲ是研究基因表达高效、敏感的方法，且所需ＲＮＡ量极少。
林琳［１５］用ＲＴ‐ＰＣＲ检测ＲＡ患者外周血单个核细胞（ＰＢ‐ＭＣ）中白细胞介素‐１７Ａ（ＩＬ‐１７Ａ）ｍＲＮＡ的表达水平发现在ＲＡ患者ＰＢＭＣ中ＩＬ‐１７ＡｍＲＮＡ的表达水平明显增高并与疾病活动程度呈正相关。有研究者在实验中发现ＲＡ患者关节滑液中白细胞介素‐１７（ＩＬ‐１７）水平明显高于骨性关节炎患者滑液中水平［１６］。通过一系列细胞因子的作用，ＩＬ‐１７上调了Ｃｙｒ６１表达，参与慢性炎性反应［１７‐１８］，增强了ＲＡ关节的胶原破坏和重新合成、骨质的破坏及关节软骨的破坏［１９］。孟明等［２０］研究表明ＲＡ患者外周血中ｉＮＫＴ细胞频率与干扰素‐γ（ＩＦＮ‐γ）／白细胞介素‐４（ＩＬ‐４）比值呈负相关。裴明等［２１］用ＲＴ‐ＰＣＲ研究发现ＲＡ患者的滑膜中高度表达白细胞介素１受体拮抗剂（ＩＬ‐１Ｒａ）。这表明细胞因子在ＲＡ患者发病中起着重要作用，可以用ＲＴ‐ＰＣＲ准确高效地检测出过度表达的异常相关基因，可分析ｍＲＮＡ是否异常及是否由其导致基因表达异常，可直接从基因水平显示与ＲＡ的相关因素。
基于ＲＴ‐ＰＣＲ技术的原理，Ｙａｍａｍｏｔｏ等［２２］建立了一种分析Ｔ细胞克隆型的方法，即ＲＴ‐ＰＣＲ／单链构象多态性分析
（ＳＳＣＰ）。ＳＳＣＰ可以检测ＤＮＡ序列之间的不同，进行ＤＮＡ序列差异分析，在非变性条件下，单链ＤＮＡ可自身折叠呈现一种由内部分子相互作用形成的三维构象，这种构象由单链
ＤＮＡ分子内的碱基顺序决定，它影响了ＤＮＡ在非变性凝胶中的迁移率。相同长度但不同核苷酸序列的ＤＮＡ由于在凝胶中的不同迁移率而被分离。迁移率不同的条带可被银染或者荧光标记引物检测，然后用ＤＮＡ自动测序进行分析。ＲＴ‐ＰＣＲ／ＳＳＣＰ法是根据不同Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）β链Ｖ区中ＣＤＲ３碱基序列的不同，来分析Ｔ细胞克隆型。其不同于常用的在体外建立抗原特异性Ｔ细胞克隆后，再分析Ｔ细胞克隆型方法的优点是，即使在特异性抗原不明的情况下，也能直接分析体内聚集的Ｔ细胞克隆型。赵文明等［２３］采用ＲＴ‐ＰＣＲ／ＳＳＣＰ法，比较分析一种自发性ＲＡ小鼠模型‐ＳＫＧ小鼠（发病初期与后期关节内聚集的Ｔ细胞克隆型的变化，结果显示ＳＫＧ小鼠自发性关节炎动物模型与ＴＣＲＶβ２和Ｖβ８．２的Ｔ细胞克隆型关系密切。此前有研究报道人的ＲＡ与ＴＣＲＶβ３、Ｖβ４、Ｖβ１７，Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠ＲＡ模型与ＴＣＲＶβ８．２、Ｖβ４、Ｖβ１７，Ⅱ型胶原蛋白诱导的小鼠ＲＡ模型与ＴＣＲＶβ２、Ｖβ５、Ｖβ８Ｔ细胞克隆型关系密切［２４‐２５］。这些研究结果均显示某些ＴＣＲＶβ型的Ｔ细胞与ＲＡ的发展密切相关。ＲＡ的自身抗原不明确，而ＲＴ‐ＰＣＲ／ＳＳＣＰ的主要优点就是在特异性抗原不明的情况下，也能直接分析体内聚
集的Ｔ细胞克隆型，所以ＲＴ‐ＰＣＲ／ＳＳＣＰ很适合用于对ＲＡ患者的Ｔ细胞克隆分型分析。
４ 定量ＰＣＲ在ＲＡ中的检测应用
近年来定量ＰＣＲ广泛用于检测ＲＡ患者中基因水平的异常。定量ＰＣＲ有荧光定量ＰＣＲ（ＦＱ‐ＰＣＲ）又称为实时ＰＣＲ，还包括水解探针（ＴａｑＭａｎｐｒｏｂｅ）技术、杂交探针技术、分子信标技术。
ＦＱ‐ＰＣＲ的基本原理是指在ＰＣＲ反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个ＰＣＲ进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法，在ＰＣＲ反应体系中加入ＳＹＢＲＧｒｅｅｎⅠ染料，该染料能选择性地掺入直双连ＤＮＡ分子中，并且产生强烈的荧光，荧光信号的检测在每一个循环的延伸期完成后进行，其结合的荧光信号与ＤＮＡ水平成正比。
焦志军等［２６］用定量ＰＣＲ检测ＲＡ患者外周血中单个核细胞Ｎｏｔｃｈ基因表达，结果显示ＲＡ患者外周血中存在一高表达Ｎｏｔｃｈ３的活化Ｔ细胞。之后焦志军等［２７］用流式细胞术和定量ＰＣＲ技术，分别在蛋白质水平和ｍＲＮＡ表达水平检测ＦｏｘＰ３表达，其研究结果显示ＲＡ活动期时ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋调节性Ｔ细胞明显减少，这调节性Ｔ细胞可能参与了ＲＡ病理进程。曹新国等［２８］用套式实时定量ＰＣＲ技术检测外周血单核细胞中ＦＯＸＰ３＋ｍＲＮＡ基因表达，发现ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ细胞数量与ＦＯＸＰ３＋ｍＲＮＡ基因表达水平呈正相关。
与此类似，Ｚａｐｐｉａ等［２９］在研究幼年型特发性关节炎（ＪＩＡ）时也发现，患者外周血中ＣＤ４＋ＣＤ２５＋数量少于健康人，而病情较轻或有自限倾向的患者外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋调节性Ｔ细胞数相对较高且表达较多的ＦｏｘＰ３基因，这些结果表明Ｔ细胞在ＲＡ发病过程中具有重要病理作用，研究其具体作用机制对ＲＡ的病因研究和具有重要作用。荀春华等［３０］用实时荧光定量ＰＣＲ技术检测ｍｉＲＮＡ‐１４６ａ在ＲＡ患者外周血单个核细胞表达水平，并且同时用免疫法检测血清ＣＲＰ、ＲＦ、ＩＬ‐１７、肿瘤坏死因子‐α（ＴＮＦ‐α）水平，分析ＲＡ患者外周血单个核细胞ｍｉＲＮＡ‐１４６ａ表达水平与血清ＣＲＰ、ＲＦ、ＩＬ‐１７、ＴＮＦ‐α水平的相关性，结果显示ＲＡ患者外周血单个核细胞的ｍｉＲ‐
ＮＡ‐１４６ａ高表达，且与血清ＣＲＰ、ＩＬ‐１７、ＴＮＦ‐α水平呈明显正相关。Ｋｏｎｇ等［３１］的研究发现Ｓｉｒｔ１可以抑制核因子κＢ（ＮＦ‐κＢ）的转录活性，从而抑制炎性细胞因子的产生，如ＴＮＦ‐α，白细胞介素‐１β（ＩＬ‐１β）和白细胞介素‐６（ＩＬ‐６）等，丁永利等［３２］用ＦＱ‐ＰＣＲ检测Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎（ＣＩＡ）小鼠去乙酰化酶１（Ｓｉｒｔ１）、ＭＭＰ‐１３、基质金属蛋白酶组织抑制物１（ＴＩＭＰ‐１）ｍＲＮＡ的表达，同时用ＥＬＩＳＡ检测小鼠血清中ＩＬ‐１β、ＴＮＦ‐α、ＩＬ‐１７、ＩＬ‐４和白细胞介素‐１０（ＩＬ‐１０）的水平，结果发现在ＣＩＡ小鼠中Ｓｉｒｔ１过表达，并且过表达Ｓｉｒｔ１的小鼠中血清细胞因子ＩＬ‐１β、ＴＮＦ‐α、ＩＬ‐１７水平比对照组明显降低，而ＩＬ‐４水平升高，这与之前的研究相似，因此Ｓｉｒｔ１可作为
新的点，不过这有待于更多的研究。Ｌｉｎ等［３３］也用ＦＱ‐ＰＣＲ检测ＲＡ患者外周血中单个核细胞诱骗受体３（ＤｃＲ３）ｍＲＮＡ的水平发现ＲＡ患者中ＤｃＲ３ｍＲＮＡ的表达明显高于健康者，ＤｃＲ３是一种可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员，可与肿瘤坏死因子配体ＬＩＧＨＴ、ＦａｓＬ和ＴＬＩＡ竞争结合其相应的受体如ＨＶＥＭ、Ｆａｓ和ＤｃＲ３。不过由于ＤｃＲ３缺乏胞内区，不会传导凋亡信号［３４］。ＤｃＲ３主要表现为抑制细胞凋亡，调节细胞生长、分化及免疫等作用，与多种疾病的发生和发展密切相关［３５］，结合研究结果表明ＤｃＲ３在ＲＡ发生、发展中具有重要作用，可能通过抑制凋亡途径进行，这有待于进一步研究。ＦＱ‐ＰＣＲ技术是近年来新发明的定量ＰＣＲ技术，定量更准确并且具有更高的灵敏度和特异性，除此之外还有其他的优点：（１）通过显示系统实时监测ＰＣＲ的扩增过程；（２）反应完成后可直接得到实验结果，无需打开反应管对产物进行电泳检测，从而避免了开盖检测环节形成的气溶胶对实验室造成的污染。
５ 错配ＰＣＲ技术在ＲＡ患者中的应用
许多的研究表明ＩＬ‐１７Ａ在ＲＡ的发病中具有重要作用，ＩＬ‐１７上调了Ｃｙｒ６１的表达，参与慢性炎性反应［１５‐１８］。田辉等［３６］通过错配ＰＣＲ技术提高人源化抗ｈＩＬ１７Ａ单链抗体（ｓｃＦｖ）的亲和力，为进一步开发ＲＡ的人源化抗体药物奠定基础。错配ＰＣＲ技术是抗体体外亲和力提高的一种可行性方法，在保证与抗原结合能力的基础上提高了其亲和力和中和活性。
细菌感染引起ＲＡ的原因一直备受关注，近年来检测ＲＡ患者体内细菌内毒素的研究也越来越多，有研究发现ＲＡ患者体内存在葡萄球菌肠毒素ｅ的基因，检出率为１３．２５％［３７］。
上述是ＰＣＲ技术在ＲＡ中的应用，随着ＰＣＲ技术的不断发展，精密度、特异度、灵敏度不断提高，尤其是近年来广泛应用的实时荧光定量ＰＣＲ技术，可对异常表达基因实时定量检测。通过ＰＣＲ对ＲＡ患者基因表达的分析可以为ＲＡ的诊断和提供更可靠的依据，减轻ＲＡ患者的痛苦，达到早期诊断早期的目的。但是，上述研究只是针对ＲＡ患者基因方面的检测，至于其具体临床应用及其针对异常基因的药物的研制还应继续研究，并且其疗效的好坏需要更多的临床试验证明。ＰＣＲ技术不断发展，每种技术具有各自的优缺点，在具体应用时应结合实际应用条件和目的选择合适的方法。通过更多的研究进一步探讨ＲＡ的发病机制和早期诊断方法，为ＲＡ的诊断、、预后提供更多、更可靠的依据。
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ｌｏｃｏｃｃａｌｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎｅｉｎｔｈｅｂｌｏｏｄｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．ＪｕｎｄｉｓｈａｐｕｒＪＭｉ‐ｃｒｏｂｉｏｌ，２０１５，８（２）：１６６２１．
（收稿日期：２０１５‐１０‐１８）
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