1.1材料:(1)混合固定液,甲醛 冰醋酸(甲醛60ml 冰醋酸25ml 水415ml)。
(2)苏木素染:苏木素2.5g,硫酸铝钾25g,蒸馏水350ml,碘酸钠0.5g 冰醋酸10ml甘油150ml。 (3)伊红染液:伊红1.25g 95%无水乙醇500ml 配好后加入适量冰醋酸。
1.2方法:与HE制片过程中,只是组织将固定用甲醛冰醋酸液,而染片时也加入冰醋酸。
2 观测
120张病理切片结果:60张病理切片用甲醛固定;60张用甲醛冰醋酸液固定.用甲醛冰醋酸固定及用伊红加冰醋酸染液结果:细胞核 细胞质结构比对清晰,染鲜艳,均匀。染时间缩短。 3 讨论
冰醋酸(CH2COOH)为带有刺激味的无酸性液体,分子量60.05;小于15度时易结合成冰。17度时融化。它可以与各种比例的水和无水乙醇混合。
标本固定时,用4%中性甲醛液,该液渗透率力强,固定均匀,用时对组织收缩较少。但经乙醇收缩脱水后收缩较大。而且不能沉淀白蛋白 核蛋白 等,不能完整地保存染体结构。如果而选用甲醛冰醋酸液理由:甲醛可以和蛋白质结合。对脂肪 神经 固定也较好。冰醋酸可以沉淀核蛋白,也能很好保存染体,对其组织有膨胀作用。解决了甲醛固定乙醇脱水后组织收缩问题。两者互补,使固定达到良好效果。
苏木素染时细胞核内的染质主要是脱氧核糖核酸,它的双螺旋结构中两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素碱性溶液以离子键或氢键结合而着,细胞质内主要成分是蛋白质,为两性化合物。细胞质的染与ph值有密切关系。当ph值调到蛋白质等电点4.7-5.0时,胞质外不显电性,此时酸或碱性染料不易染[1]。当ph调到6.7-6.8时,大于蛋白质等电点,表现为酸性电荷,带电荷的阳离子,可被带正电荷的染料染。细胞核?和?细胞质难以区分。因此必须把ph值调到细胞胞质等电点以下。在染液中加入冰醋酸使细胞质带正电荷(阳离子)就可被带负电荷(阴离子)的染料染。
伊红染液是酸性染液,在水中离解成带负电荷的阳离子与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞质染。加入冰醋酸后,起到促染作用[2]。只能增强染料的染能力,不参与染反应。
据上述原理,甲醛冰醋酸固定通常浓度为5%,同时组织脱水前一定要充分水洗,苏木素染时。冰醋酸的加入量可直接影响苏木素精的着能力和清晰度,加入会形成核浆共染背景不清晰,加多了抑制了苏木素和铝离子的结合。淀形成减少。着能力下降。如果染液使用时间过长,可以再加入冰醋酸,但伊红染液中冰醋酸应小于1%,否则染液有效成分降低,染效果降低。
参考文献
[1]章载良,顾元析,郑晓瑾等,冰醋酸在常规HE染中应用.
中华病理杂志2009,10,389.
[2]傅从燕,肖德胜,钟于霞等,冰醋酸在调解HE染中作用,临床与实践病理学杂志,2011,06,369-370.