第一章 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳
1. 储存液
2 M Tris-HCl(pH 8.8), 100ml 24.2g Tris + 50ml 蒸馏水+浓盐酸至 pH 8.8 (4ml)，待室温+蒸馏水至100ml。
1 M Tris-HCl(pH 6.8), 100ml 12.1g Tris + 50ml 蒸馏水+浓盐酸至 pH 6.8 (8ml)，待室温+蒸馏水至100ml。
10% (w/v)SDS, 100ml, 室温保存 10g SDS+蒸馏水至100ml。
50% (v/v) 甘油，100ml 50ml 100%甘油+50ml蒸馏水
1% (v/v) 溴酚蓝，10ml 100mg 溴酚蓝+蒸馏水至10ml，搅拌至完全溶解，过滤除去聚合的染料。 2. 工作液
A液：丙烯酰胺储存液，100ml 30% (w/v)丙烯酰胺（Acrylamide）,0.8% (w/v)双丙烯酰胺(Bisacrylamide)
30g 丙烯酰胺+0.8g双丙烯酰胺+蒸馏水至100ml。 有毒，戴手套和口罩在通风橱中操作，石蜡封口，避光4℃保存。
B液：4×分离胶缓冲液，100ml 75ml 2M Tris-HCl(pH 8.8)(1.5M)+4ml 10% SDS(0.4%)+21ml蒸馏水sds聚丙烯酰胺凝胶电泳
4℃保存数月。 C液：4×堆积胶缓冲液，100ml 50ml 1M Tris-HCl(pH 8.8)(0.5M)+4ml 10% SDS(0.4%)+46ml蒸馏水 4℃保存数月。
10% AP(过硫酸铵)， 5ml 0.5g 过硫酸铵+5ml 蒸馏水 密封的管内，4℃保存数月。
5×样品工作液，10ml 0.6ml 1M Tris-HCl(pH 6.8)(60mM)+5ml 50% 甘油(25%)+2ml 10% SDS (2%)+0.5mlα-巯基乙醇（14.4mM）+1ml 1%溴酚蓝(0.1%)+0.9ml 蒸馏水 4℃保存数周，-20℃保存数月。
10×电泳缓冲液(1×=25mM Tris, 192mM glycine, 0.1% SDS, pH8.3) Tris30g；gly144g；SDS10g；加MilliQ水至1L；室温保存。
3. 自制胶
分离胶(10ml的x%分离胶计算：A液：x/3 ml；B液：2.5ml；蒸馏水：(7.5- x/3)ml；10% AP：50μl；TEMED：5μl(10μl，如果x%＜8%))
含量(10ml) | 6%胶 | 8%胶 | 10%胶(30ml) | 12%胶 | SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围 6%胶 50-150kD 8%胶 30-90kD 10%胶 20-80kD 12%胶 12-60kD 15%胶 10-40kD 15%胶 |
A液 | 2.0 | 2.7 | 3.3 (9.9) | 4.0 | 5.0 |
B液 | 2.5 | 2.5 | 2.5 (7.5) | 2.5 | 2.5 |
蒸馏水 | 5.5 | 4.8 | 4.2(12.6) | 3.5 | 2.5 |
10% AP | 0.05 | 0.05 | 0.05(0.15) | 0.05 | 0.05 |
TEMED | 0.01 | 0.01 | 0.005(0.015) | 0.005 | 0.005 |
| | | | | |
堆积胶(4ml 5% 堆积胶) A液：0.67ml；C液：1.0ml；蒸馏水：2.3ml；10% AP：30μl；TEMED：5μl。
12ml A液：2.01ml；C液：3.0ml；蒸馏水：6.9ml；10% AP：90μl；TEMED：15μl。
4.染和脱
考马斯亮蓝染液 1L：考马斯亮蓝R-250:1.0g；乙醇：450ml；蒸馏水：450ml；冰醋酸：100ml。
考马斯亮蓝脱液 1L：乙醇：100ml；蒸馏水：800ml；冰醋酸：100ml。
第二章 不连续非变性凝胶电泳
1. 工作液
A液：同SDS-PAGE中A液一致。
B液：4×分离胶缓冲液，100ml 1.5M Tris-HCl(pH 8.8) 18.2g Tris+40ml蒸馏水+HCl至pH8.8+蒸馏水至100ml。
C液：4×堆积胶缓冲液，100ml 0.5M Tris-HCl(pH6.8) 6.0g Tris+40ml蒸馏水+HCl至pH6.8+蒸馏水至100ml。10% AP(过硫酸铵)，1ml 0.1g 过硫酸铵+1ml 蒸馏水 密封的管内，4℃保存数月。
5×样品工作液，10ml 3.1ml 1M Tris-HCl(pH 6.8)(312.5mM)+5ml 50%甘油+0.5ml 1%溴酚蓝(0.05%)+1.4ml 蒸馏水
1×电泳缓冲液(25mM Tris, 192mM glycine, pH8.3) Tris 3.0g；甘氨酸14.4g；加MilliQ 水至 1L；室温保存。
2.自制胶 参照SDS-PAGE配比
第三章 双向电泳
1.工作液
水化上样缓冲液，10ml
4.805g尿素8M + 0.4g CHAPS 4% + 10μl 1% 溴酚蓝0.001% + MilliQ水定容至10ml；分10小管，每管1ml，-20℃保存。
使用时，每次取一小管，加0.01g DTT 65mM（现加）+ 5μl 40% Bio-Lyte 0.2%(w/v)（现加）
胶条平衡缓冲液母液，100ml
36g尿素6M+2g SDS 2%+25ml 1.5M pH8.8 Tris-HCl 0.375M pH8.8+20ml甘油20%+MilliQ水定容至100ml；分10管，每管10ml，-20℃保存。
胶条平衡缓冲液I： 胶条平衡缓冲液母液 10ml DTT 0.2g 充分混匀，用时现配。
胶条平衡缓冲液II：胶条平衡缓冲液母液 10ml 碘乙酰胺 0.25g 充分混匀，用时现配。
低熔点琼脂糖封胶液，100ml 0.5g低熔点琼脂糖0.5%+0.303g Tris 25mM+1.44g gly 192mM+1ml 10% SDS 0.1%+100μl 1%溴酚蓝0.001%+MilliQ水定容至100ml加热溶解至澄清，室温保存。
第二向工作液参照SDS-PAGE的工作液，一块17cm胶板需40ml分离胶。
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