sds聚丙烯酰胺凝胶电泳1.样品溶液中各种试剂的作用是什么? SDS：使蛋白质变性剂能与样品蛋白结合，使样品蛋白质都带负电荷显棒状，消除了电荷和分子形状对相对分子质量的测定的影响，从而可利用相对分子质量差来分离蛋白。 巯基乙醇：使蛋白质中的二硫键断裂，并保持不再被氧化，使聚合的蛋白分子分解成各亚基或单链，因此最后测出的结果只是各亚基或单链的相对分子质量，而不是整个蛋白分子的相对分子质量。
甘油：是加入的样品蛋白随甘油一起沉降到样品孔底部而不至于样品漂浮在缓冲液中。
盐酸：主要起缓冲作用，保持样品蛋白的电荷量即用来调节PH。
2.本实验是否需在低温下进行?
不需要在低温下进行。低温可能会使蛋白质变性。
3.简述聚丙烯酰胺凝胶电泳测定生物分子分子量的原理，如何调节凝胶的孔径？
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇，SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都不一样，约为18A，这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小，因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。
4.SDS-凝胶电泳中TEMD的作用是什么？在样品缓冲液中加入0.1%溴酚蓝有何作用？
促凝作用，加速聚丙烯酰胺的凝固
可以让蛋白下沉到点样孔底部，防止漂样，还有指示剂的作用。
5.本实验中溴酚蓝和考马氏亮蓝的作用分别是什么？
可以让蛋白下沉到点样孔底部，防止漂样，作为指示剂，因为溴酚蓝呈蓝，而蛋白质是白，在SDS-凝胶中不明显，且溴酚蓝的相对分子量比蛋白质(绝大部分)小，电泳时速度比蛋白质稍快，因此当溴酚蓝到达电泳槽底部(可看蓝调带)，则电泳结束。
使条带可以很快清晰地显现出来。
6.在灌胶时为什么要加水？
隔绝空气，使催化反应快速进行，进而形成凝胶，还可使分离胶上沿平直。并且加水后，保持分离胶表面的平整性，使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上。
7.电泳要求的基本条件有哪些？
电泳应尽可能在恒温条件下进行。选用一定pH 的缓冲液。同时，所选用的pH 以密扩大各种被分离物质所带电荷量的差异为好，以利于分离各种成分。有效迁移率还受电渗现象的影响，电泳时应避免用高电渗物质作支持介质。
8.丙烯酰胺凝胶电泳的制胶过程中，哪些因素影响胶的凝聚？
1、金属离子势
2、聚丙烯酰胺的浓度
3、交联剂对凝胶的影响
4、温度对凝胶的影响
5、复合交联剂
9.电泳系统的不连续性表现在哪几个方面？存在哪几种物理效应
表现在：凝胶孔径的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、pH的不连续性及电位梯度的不连续性。先使进入柱胶的样品在浓缩胶中逐渐浓缩、在上下胶层界面上最终被压缩成很薄的样品区带，进入分离胶后再进行组分的分离，形成最终的分离区带。根据分离胶缓冲液pH值高低，有3种操作系统，分别为碱性系统、酸性系统和中性系统。
10.为什么样品会在浓缩胶中被压缩成层？
由于浓缩胶的孔径比较大，分离胶的孔径较小所以蛋白质在浓缩胶中快速运动，到分离胶时速度变慢，就被压缩成层。
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