细胞总蛋白（简称 CRP)是指从细胞分泌出来，然后在一定条件下逐渐氧化，被氧化后产生的具有特殊生理活性的蛋白质。它是一种在体内广泛存在的蛋白质中非常重要的一种蛋白质组分，其结构与人体自身细胞中大量存在的多肽结构相似，可以产生多种生物活性物质，是细胞外基质中重要分子。所以细胞总蛋白又被称为“超级蛋白”、“人体生命之本”。蛋白组分为18种类型。它是人体内含量最多、最重要的一类蛋白质组分，含有大量人体需要蛋白质并且质量要求较高的多肽、氨基酸、核苷酸等成分。目前已发现的蛋白组分共有400多种，其含量与生物活性物质及生物作用有关。其分子量为127 kDa——332 kDa,由200多种氨基酸组成，包括了20多种生物活性物质和生物功能分子。 1.试剂准备
试剂准备：细胞总蛋白(CRP)试剂盒（上海德林生化科技有限公司）准备试剂：纯水四氢呋喃(HF):用于检测纯水中的 CRP浓度和是否为活细胞产生。磷酸二氢钾(PH=5.0):用于检测所需的 CRP浓度并确定其含量。含二氢呋喃磷酸钠钠混合溶液(PH=8.5);三氯生：用于检测细胞总蛋白浓度并确定其含量。四氢呋喃磷酸钠：采用电感耦合等离子体质谱仪测定 g蛋其含量。过氧化氢：用于检测游离脂肪酸与三甲胺(TMP)(见表1),过氧化氢纯度为99%至99.5%之间（见表2)。有机过氧化物：用于检测实验中提取 CRP过程中存在的过氧化物含量并确定其成分（见表3)。
2.器材准备
试剂:1份细胞总量（以细胞密度计),1份蛋白总量（以蛋白浓度计),1份去离子水。2台离心泵：将100 CC去离子水、1000 CC去离子水放入装有去离子水中，各放入1份去离子水和1份去离子水中。在100 CC去离子水中再放入1份去离子水、1份去离子水中继续放入1份去离子水。取去离子水适量、琼脂糖10 ml、琼脂糖40 ml注入50 ml去离子水中。摇匀并过滤5分钟后备用。玻璃针：将玻璃针放入装有去离子水、琼脂糖混合液、1份去离子水中，再依次加入1份去离子水中；台式天平：将盛有纯净水和琼脂糖溶液的培养皿用冰水浴温度保持在20℃左右；离心管：放入30 ml无菌过滤水中进行离心，待上层液清澈透亮之后加入1份去离子水搅拌均匀即可。 3.提取方法及步骤
取500 ml待测液体，将液体滴在干燥的滤纸上，并用滤纸将其过滤。取滤纸后即以5 cm×5 cm为一段倒入80 mmol/L的溶液中使其溶解。溶解后静置一段时间，得到蛋白质溶液。过滤时不过滤的液体不可再继续使用！取出蛋白质溶液后用冰板冷却后加入1/3体积的乙醇（见表2)与0.5 g去离子水混合制成悬液。用去离子水洗3次并与25 g去离子水混合制成沉淀备用。
4.取样分析
取10 mL细胞总蛋白溶液置于小容量瓶中，用无菌生理盐水冲洗溶液5分钟。用0.1%尿素溶液或0.1%硫酸锌溶液浸泡1小时，用0.05%甲醇溶液洗涤2次并滤除残渣。取1 g蛋白样品于1000 mL容量瓶中，加入500 mL蒸馏馏水至与容量瓶高。配制1 g细胞总蛋白溶液与500 mL纯净水混合液。加入0.5 g蛋白水洗2次，用1 mL蒸馏馏水洗1次。滴加5μ l0.3%尿素溶液至管架上，注入5 mL0.1%尿素溶液至管架上。加入1 g细胞总蛋白质并搅拌均匀至完全溶解于0.1%尿素溶液中。
5.制备，并报告结果
称取蛋白质1 g,溶于200 mL 3倍体积的LC-MS试剂瓶中，加入40 ml无菌水，摇匀，然后再加入20 ml无菌水搅拌10分钟。将无菌水溶液倒出，继续摇匀，然后用无菌纱布将试管和离心管内的洗涤剂清洗干净后放在锅中加少量无菌水继续搅拌，待蛋白凝固后取出上一步制备好的溶液放入50 mL的烧杯。然后用玻璃杯中的真空吸光仪将上一步得到的溶液吸光度计进行测量。并用胶布粘贴在上片下方以免吸光。为了保证下一步中产生的蛋白质溶液不影响结果，将提取出来的纯白蛋白样品用水稀释后与另一种纯白蛋白进行杂交后再进行检测。在室温下反应2小时后得到蛋白质沉淀物并在300 nm波长处可观察到蛋白沉淀（见图4)。
6.分析总结报告
细胞总蛋白提取实验完成之后，要进行检验，如果蛋白中含有大量的蛋白或含蛋白质超标，则需要做更多的实验。提取蛋白的过程中，在一定的温度条件下提取蛋白会比较困难。所以提取蛋白质也是一项很细致的工作，要根据所需要检测的项目进行实验。所以在这次实验完成之后都要及时补充蛋白以及其他物质进行检测。需要做的就是不断地补充所需要含量的蛋白质从而确保试验结果的准确性。当蛋白含量过高时需要进行进一步的检测。
当分析结果出现不正常时需要再次进样检测。实验过程中还需要注意提取蛋白所需的时间长度要控制好，因为每一次提取以后都需要做大量重复实验。这些过程都需要有充足的时间来完成，所以在提取蛋白质过程中一定要注意这个问题。
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