血红蛋白的测定
——沙利氏比法
测定血红蛋白的方法很多,常见的有直接比法,光电比法,沙利氏(Sahli) 目视比法(间接比法)。Sahli氏目视比法虽然精确度较差,但方法简便快速。
【目的】了解Hb测定方法,练习测定Hb含量的沙利氏比法,理解Hb测定原理。g蛋
【原理】 血液与盐酸作用后,释放出血红蛋白,Hb被酸化后变为褐的盐酸高铁血红蛋白,与标准柱相比,便可测出其含量。 【器材与试剂】
(1)沙利氏血红蛋白计一套
吸管为一厚壁毛细玻璃管,其上有10微升和20微升两个刻度,上端接一橡皮吸管。比架内有标准柱。测定管上有两种刻
度,从下往上,一侧有2—24的刻度,表示100m1血液中所含血红蛋白克数,以g/dl表示;另一侧有20—160的刻度,表示100ml血液中血红蛋白的百分数。国产的血红蛋白计是以每100ml血液含14.5g血红蛋白为100%而设制。
(2)0.1M盐酸
(3)75%酒精棉球、干棉球、采血针、蒸馏水
【步骤】
(1)将测定管和吸管依次用自来水、95%酒精洗净,干燥备用。
(2)向测定管内加入0.1M盐酸5-6滴,约加到管下端刻度“2”为止。
(3)采血、比:先消毒无名指尖,再用采血针在无名指尖处采血,用干棉球擦去第一滴
血,待第二滴血自然流出一大滴时,用吸管取血液20ul。擦去吸管外血液后,轻轻加入测定管底部,并回吸数次以洗出吸管中的血液。轻轻振动比管,使血液与盐酸充分混合。
(4)静置10min,待血液变成褐后,缓缓滴加蒸馏水,每加1滴,用细玻璃棒搅动一次,直到颜与标准柱完全相同为止。液柱凹面所指的刻度数,即为每百毫升血液中血红蛋白的克数,用g/dl或g%表示。