卡泼肉瘤病毒复制转录激活因子调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物...

·论著·2012年11月第9卷第31期

中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD 卡波肉瘤病毒（Kaposis's sarcoma-associated herpesvirus ，

KSHV ）复制转录激活因子（replication and transcription activator ，

RTA ）是ORF50编码的一种即刻早期蛋白，是促使病毒从潜伏

性感染向裂解性感染转变的关键调控因子。无论是外源性还

是内源性来源引起的RTA 表达增高，均可介导病毒裂解性基因

的级联表达[1]。RTA 主要通过两种方式激活下游靶基因：一是直接与高亲和性的RTA 反应元件（RTA responsive elements ，RREs ）结合[2]；二是间接地与细胞内的一些转录因子结合发挥调控作用，这些转录因子包括K-RBP [3]、CEBP-α[4]、Oct-1[5]和RBP-J К[6]等。RREs 主要有两类，一类富含AT 碱基，另一类含有CCN9GG 样序列，这里N 可以为任何碱基。例如，KSHV ORF57基因启动子含有这两类RREs [2]。Bcl-2蛋白是一种定位于线粒体上的膜蛋白，为Bcl-2原癌基因所编码，具有抑制细胞凋亡的功能[7-8]。本研究探讨KSHV RTA 调控Bcl-2的分子机制及其在宿主细胞增殖与凋亡、病毒子的产生等方面的生物学意义。卡泼肉瘤病毒复制转录激活因子调控宿主细胞

Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义

高建明1pgl3

Erle S.Robertson 2▲

1.三峡大学医学院病理生理学教研室，湖北宜昌443002；

2.美国宾夕法尼亚大学医学院微生物学教研室，

宾夕法尼亚费城19104[摘要]目的研究卡泼肉瘤病毒（Kaposis ′s sarcoma-associated herpesvirus ，KSHV ）编码的复制转录激活因子（replica tion and transcription activator ，RTA ）调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义。方法突变Bcl-2启动子第1个与第2个CCN9GG 样序列，构建了新的报告质粒（命名为pGL3-△RRE1,2），用荧光素酶试验和染质免疫共沉淀进一步验证CCN9GG 样RTA 反应元件的功能。构建RNA 干扰慢病毒载体，筛选稳定感染的BC3细胞，佛波酯诱导48h 后，分别用PCR 、PI （碘化吡啶）染流式细胞术检测病毒子DNA 和细胞凋亡率。结果突变第1个与第2个CCN9GG 序列导致启动子活性显著降低；染质免疫共沉淀试验证实RTA 蛋白与CCN9GG 序列存在直接相互作用。用RNA 干扰技术抑制Bcl-2基因后，佛波酯诱导的KSHV 阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加，病毒子产生减少。结论KSHV RTA 能够调控内源性细胞凋亡信号通路，延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡，并促进病毒子产生。

[关键词]复制转录激活因子；Bcl-2；表达上调；抗凋亡；溶解性感染

[中图分类号]R373[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）11（a ）-0012-04

Molecular mechanism and biological significance of upregulation of cellular Bcl-2by the KSHV encoded RTA

GAO Jianming 1Erle S.Robertson 2▲

1.Department of Pathophysiology,Three Gorges University School of Medicine,Hubei Province,Yichang 443002,China;

2.Department of Microbiology,University of Pennsylvania School of Medicine,Philadelphia,Pennsylvania 19104，United States of American

[Abstract]Objective To explore the molecular mechanism and biological significance of upregulation of cellular Bcl-2by the KSHV (Kaposis's sarcoma-associated herpesvirus)encoded RTA (replication and transcription activator).Methods A new reporter plasmid named pGL3-△RRE1,2was generated by deletion of the first and second CCN9GG-like sequences.Luciferase assay and chromatin immunoprecipitation (ChIP)analysis were carried out to further confirm the important role of CCN9GG RTA responsive elements (RREs).RNA interference lentiviral vector was constructed,and s

tablly infected BC3cells were screened.At 48h postinduction,cells were subjected to PCR,PI staining flow cytometry for virus progeny pro -duction and cellular apoptosis analysis.Results Mutation of the first and second CCN9GG RRE motifs I the Bcl-2promot -er dramatically diminished promoter activity.ChIP assay showed the direct interaction of RTA protein with CCN9GG RTA responsive elements.Furthermore,knockdown of cellular Bcl-2using specific short hairpin RNA (shRNA)indicated that RTA plays an essential role in Bcl -2-mediated anti -apoptosis of the cell,promoting the production of virus progeny.Conclusion These findings provide an insight into the mechanism by which KSHV utilizes the intrinsic apoptosis signaling pathways for promoting the survival of lytically infected host cells to allow maximum production of virus progeny.

[Key words]RTA;Bcl-2;Upregulation;Antiapoptosis;Lytic replication

[基金项目]National Cancer Institute 5R01CA091792-08，5R01CA108461-

05，1R01CA137894-01and 1R01CA138434-01A209;National Institute of

Allergy and Infectious Diseases 5R01AI067037-04and National Institute of

Dental and Craniofacial Research 5R01DE017338-03（to ESR ）.

▲通讯作者12

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