•综述・
循环血清miR-34a在非酒精性单纯性脂肪肝诊断中 价值的研究进展
梁新妹，梁晨，李丹，李博，程茜茜
［关键词］miR-34a；非酒精性单纯性脂肪肝；诊断
［中图分类号］R575.5［文献标识码］A
非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)指除外酒精和其他明确的损肝因素导致的以肝细胞 脂肪变性为主的临床病理综合征，依据病变程度可将NAFLD
分为非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver, NAFL)%非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)及其相关肝硬化，其中，NASH是NAFLD进展的重要
中间阶段［D-2'(随着生活习惯与饮食结构的改变，肥胖及其相
关代谢综合征全球化的流行趋势,NAFLD已成为导致肝癌％
糖尿病以及动脉硬化性心脑血管疾病的重要因素⑶)在我国
成人NAFLD的患病率可达15%，而在西方国家高达30%左右，已成为全球性的公共健康问题⑷)研究显示，在NAFLD
的病变过程中,NAFL是一个良性且可逆性病变，早期诊断与
及时干预可以逆转NAFLD⑸)目前,NAFLD诊断的金标
准是有创的肝组织活检，以及无创的诊断方法包括超声、核
磁共振和血清标志物检测等，但均存在一定局限性［6')因此，
寻新的NAFLD诊断指标至关重要)随着基因组学的深入,
研究发现，微小RNA(miRNA,miR)-34a与肝脏疾病密切相关,miR-34a在肥胖小鼠与脂肪肝患者体内高于正常水平
表达［7］；miR-34a在大鼠NAFLD发病过程机制中，参与脂质 代谢过程⑻)但是关于miR-34a在NAFLD临床早期诊断的
价值尚不清楚)本文主要对miR-34a在NAFLD发生与发展
中的作用机制进行综述，以探讨miR-34a在NAFLD早期即NAFL诊断中的价值)
1miR-34(
miR-34在脊椎动物中具有高度进化保守性，主要由miR-34a、miR-34b和miR-34c构成。miR-34家族只有两
个不同的基因编码:mir-34a序列位于染体1p36.23上, mir-34b和mir-34c序列共同位于染体11q23.1的原始转
录簇⑼)有研究采用TargetScan Release5.1和RNA22软件
对人miR-34a可能的靶基因进行了预测，并应用Gominer软
件对靶基因功能进行了的分析，结果显示miR-34a有大约3000个下游靶基因，其功能涵盖了生物过程%细胞组分、分
子功能3大类［10')miR-34a在胰腺、肝脏以及心脏等组织和
器官中均有表达，研究显示,miR-34a在内脏脂肪组织的成
熟脂肪细胞中高度表达［11')
D01：10.3969/j.issn.1674-3245.2020.06.035
2miR-34a与NAFLD的发生
研究显示,NAFLD的发生机制可能与脂质代谢、氧化应激以及炎症反应等相关［12')
2.1miR-34a与脂质代谢
肝脏是脂质代谢的主要场所，脂质的分解%合成以及运输等过程均在肝脏内完成)脂质合成增多或分解减少时，沉积于肝细胞，导致NAFLD的发生)有学者指出，通过诱导脂肪细胞与构建NAFL小鼠模型，采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(real-time quantitative pcr detecting system,QPCR)测定脂肪细胞和NAFL小鼠肝脏中miR-34a的表达情况，发现脂肪细胞和NAFL小鼠肝组织中miR-34a的表达水平显著上调［13')有研究证实，通过抑制miR-34a表达，肝细胞胞浆内的脂滴沉积可明显减少，三酰甘油(triglyceride,TG)与天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平显著下降，在动物模 型中，小鼠肝重与体重的比值也出现显著下降［14］0这些研究均证实,miR-34a表达上调与脂肪肝形成有关)进一步研究，通过在线数据库进行miR-34a靶基因预测，同时利用荧光素酶报告系统对该基因的作用靶序列进行鉴定，发现过氧化物酶体增殖物激活受体！(Peroxisome proliferator activated receptor alpha,PPAR a)是miR-34a的直接作用靶点，并且PPAR a下游脂代谢相关基因的表达会随着PPAR a表达的改变而改变［15')
2.2miR-34a与氧化应激现在普遍认为氧化应激在NAFLD“二次打击”中发挥着至关重要的作用，在氧化应激过程中，线粒体产生的活性氧簇(reactive oxygen species, R0S)对肝细胞及组织造成损伤［16］0血清氧化应激指标包括高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein,HMGB1)+丙二醛(malondialdehyde,MDA)以及脂联素(adiponectin, ADPN)等)有研究指出，血清HMGB1、MDA水平升高与ADPN水平降低，会增加人的NAFLD发病率［17］0有学者指出，采用活性氧荧光(2",7"-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针法检测细胞内活性氧积聚程度，发现在高表达miR-34a组中DCFH探针荧光显著高于低表达miR-34a组，提示miR-34a过表达可导致自由基产生，使细胞内R0S蓄积诱发氧化应激反应［⑻)
基金项目：天津市滨海新区卫生计划委科技项目(2017BWKY013)
作者单位#300451天津市滨海新区中医医院检验科(梁新妹，李丹，李
通信作者：梁新妹,E-mail：***************
博，程茜茜)，放射科(梁晨)
2.3miR-34a与炎症反应NAFLD患者血清中增高的游离脂肪酸能通过Toll样受体4(Toll-li@e receptor4,TLR4)激活巨噬细胞等多种炎症细胞，从而分泌大量的细胞因子和趋化因子，如肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor alpha,TNF a) %白细胞介素6(interleukin,IL6)及单核细胞趋化蛋白1 (monocyte chemoattractant protein1,MCP-1)等，这些因子可进一步募集多种炎症细胞，参与NAFLD的发生和发展熊海容等&20]应用miRNA微阵列方法分析miRNA在蛋氨酸和胆碱缺乏饮食诱导的NASH小鼠肝组织与正常小鼠肝组织中的表达情况，结果显示，与正常饮食组小鼠相比,NASH小鼠肝组织miR-34a的表达明显上调且血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)%AST%T NF a与MCP-1水平明显升高，肝脂质沉积加重*有研究证实,miR-34a可通过肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor6, TRAF6)激活TLR4通路，起到促进炎症反应和NAFLD发生的作用加*
3miR-34)与NAFLD的发展
3.1miR-34a与肝细胞脂肪化肝脏细胞高表达的miR-34a可抑制Sirtl/PPAR a信号通路[叫Sirtl/PPAR a信号通路是肝脏TG代谢的重要调控通路，该信号通路的抑制会导致肝脏脂质代谢异常*肉碱棕榈酰转移酶2(carnitine palmitoyltransferase2,CPT2)与乙酰辅酶A结构域蛋白3 (acyl-CoA binding domain contai
ning protein3,ACBD3)均是PPAR a下游脂代谢相关基因,CPT2与ACBD3的表达与PPAR a表达的呈正相关*miR-34a抑制PPAR a表达水平，使CPT2和ACBD3等PPAR a下游脂代谢相关靶基因的表达水平下降，导致细胞内脂质储积刘*郭行雅等加采用油红0染及TG检测，判断肝细胞的脂肪变性情况，利用Real-time PCR法定量检测miR-34a表达水平，结果显示,miR-34a水平在脂肪变性肝细胞中表达显著上调，且miR-34a水平与肝细胞脂肪化程度呈正相关*
3.2miR-34a与肝细胞凋亡研究表明，肝脏脂肪变会导致肝细胞凋亡，且肝细胞凋亡程度与脂肪肝严重程度呈正相关〔⑸*miRNA能够通过调控多种与细胞凋亡相关基因的表达，参与NAFLD肝细胞的凋亡过程洌*组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)对染体结构修饰与基因表达调控有着重要作用，在癌细胞中,HDAC的过度表达导致去乙酰化作用增强，不利于肿瘤抑制基因的表达，其抑制剂能够提高染质特定区域组蛋白乙酰化，从而诱导细胞凋亡
&27]*研究显示，在肝癌组织中miR-34a的表达显著低于正常组织，而组蛋白去乙酰化酶l(histone deacetylase l,HDACl)的表达显著高于正常组，双荧光素酶报告基因实验与挽救实验显示miR-34a可作用于HDAC1的3PTR以抑制其表达，从而抑制肝癌细胞的增殖，并诱导癌细胞凋亡泗*另有研究表明,miR-34a的表达在NAFLD患者肝组织中显著上调, miR-34a可通过Sirt1/p66shc和Sirt1/p53两条路径来调控NAFLD肝细胞凋亡[⑼*
以上调查研究均显示miR-34a与NAFLD的严重程度相
关*田慧等&30'采用实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,qRT-PCR)法检测不同严重程度的NAFLD患者血清中miR-34a的表达水平，发现随着NAFLD的严重程度上升miR-34a的表达有升高趋势*
4结语与展望
NAFLD是一种常见的慢性肝脏疾病，其发病率逐年增加，已成为除病毒性乙肝外又一严重影响肝功能的重大疾病
&31'*NAFL与NASH是NAFLD发生与发展的两个阶段*由于NAFLD没有明显的临床特征，导致早期NAFL不能被及时发
现并采取有效措施，进而发展为NASH、肝硬化，甚至肝
癌&32'*肝穿刺活检是国际公认的诊断NAFLD的“金标准”，但其为有创性检查，且无法动态评估疗效，其肝组织标本取样误差以及标本较小容易导致误诊和漏诊，因而应用受到限制
&33'*抽血检查血清ALT%AST与TG等指标，也是检测NAFLD 的一种方法，但其敏感度和特异性较低，且易受到肝功能异
常的影响〔叫彩超和电子计算机断层扫描(computed tomography,CT)是既往诊断NAFLD常用的方法，
然而两者仅在肝纤维化发展为肝硬化时才能作出诊断，对脂肪肝只能判断“轻、中、重度”，且彩超只有在肝脂肪变大于30%时，才能检查出脂肪肝&35'*
本文对miR-34a在NAFLD发生与发展中的作用机制进
行了综述,miR-34a可通过调控脂质代谢％氧化应激以及炎症反应等，影响NAFLD的发生*miR-34a表达水平的升高可加重肝细胞脂肪化以及肝细胞凋亡，从而影响NAFLD的发展*miR-34a将有望成为NAFLD早期即NAFL诊断的一个新指标*
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(收稿日期：2020-05-22；修回日期：2020-07-11)
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