移
492?中华临床医学实践杂志2004年12月第3卷第6期ChinJCliMedPra.Dec2004,V o1.3.No.6
临床论着?
ME491/CD63蛋白表达与肝细胞癌侵袭转移
张卫国王一吴伟清冼志红关新元吴孟超
[摘要]目的探讨MFA-91/CD63蛋白表达与人肝细胞癌侵袭转移的关系.方法构建肝癌组
织芯片，肝细胞癌及癌旁肝组织156例，癌栓24例，肝内转移癌4例，肝外转移癌17例.正常对照肝组 织5例.应用免疫组织化学方法检测肝癌组织芯片中样本ME491/CD63蛋白的表达.结果56%(87/
156)原发癌表达ME491/CD63蛋白，而癌栓及肝外转移癌ME491/CD63蛋白表达率仅分别为29%(7/
24)和18%(3/17)；与原发癌比较，癌栓及肝外转移癌ME491/CD63蛋白表达率均较低，两者差异具有
显着意义(分别为P<0,05及P<0.O1).病理分级2级肝细胞癌ME491/CD63蛋白高表达率高于3～4
级肝细胞癌(分别为36%和18%,P<0.05).结论肝细胞癌ME491/CD63蛋白表达丧失可能与癌灶
侵袭转移有关.
[关键词]肝细胞癌组织芯片蛋白质ME491/CD63
[中图分类号]R735.7[文献标识]A[文章编号]1684—7458(2004)06—0492—03
ME491/CD63proteinexpressioninhumanhepatoceflularcarcinomaanditsrelationshipwit
hinvasion
andmetastases.Z/tangWeiguo,WangYi,We~ing,eta1.'DepartmentofGeneralSurgeo,107t hHos—
pitalofPL4,Yantai22,China.
[Abstract]0bjectiveToinvestigatetherelationshipbetweenME491/CD63proteinexpressi oninhuman
hepatoceHularcarcinoma(HCC)andinvasionandmetastases.MethodsAtissuemicroarray ofspecimens
from156primaryhepatocellularcarcinomaswithneighboringnoncancerouslivers,24tumo rousemboli,4intra—
hepatlcsatellitemetastases.17extrahepaticmetastases.and5normalliversWasconstructed andusedforim—
mun0histoehemicaldetectionofME491/CD63proteinexpression.ResultsImmunohistoeh emicalanalysisof
tissuemicroarraysdemonstratedME491/CD63proteinexpressionin56%(87/156)ofthepri maryHCCs,and
vetin29%(7/24)ofthetumorousemboli(P<0.05),in18%(3/17)oftheextrahepaticmetast ases(P<
0.01.TherewerealSOstatisticallysignificantdifferencesonME491/CD63proteinexpressi onratebetween
HCCswithdifferentdegreeofdifferentiation(P<0.05).ConclusionsLossofME491/CD6 3proteinexpres—
s/onmaybeassociatedwithinvasionandmetastasesofhepatocellularcarcinoma.『KeyWOrds1HepatocellularcarcinomaTissuemicroarraysProteinME491/C1)63 1988年Hotta等克隆得到长1.2kbMFA91cDNA片
段，编码产物为一237个氨基酸的蛋白质.因ME491基因
编码产物与CD63完全相同，故又称ME491/CD63基因.
ME491/CD63基因定位于人l2号染体(12q12—13).
ME491/CD63蛋白具有四个疏水结构区(跨膜区)，另有三个
潜在的N一糖基化位点，系Transmembrane4superfamily (TM4SF)成员之一.研究表明,ME491/CD63表达与黑素
瘤转移抑制相关.我们应用组织芯片(Tissuemicroarray)
技术研究了MFA91/CD63蛋白在癌旁肝，肝细胞癌及其转移癌中的表达规律.报道如下.
1材料与方法
1.1标本及临床病理资料全部标本均取自第二军医大学
东方肝胭外科医院1997～2000年手术切除标本.肝细胞癌及癌旁肝组织156例，癌栓24例(18例门静脉癌栓,3例胆
管癌栓,3例肝静脉癌栓).肝内癌灶4例，肝外癌转移灶17
例(腹腔6例，网膜4例，腹壁3例，淋巴结4例).肝海绵状
血管瘤旁正常肝5例.156例肝细胞癌中男性146例，女性10例，年龄l5～75岁，平均48岁.全部病例均按WHO病
理诊断标准及肝细胞癌EdmondsonSteiner分级经两名病理医师独立作出诊断.
1.2构建肝癌组织芯片参照Kononen等介绍的方法.
主要技术流程为：选择所需病例存档蜡块，所有蜡块制作新鲜HE切片，对切片进行仔细形态学观察，选择具有代表性
区域(避开出血坏死及纤维化区)，在相应蜡块上标记取材
部位.应用组织芯片构建仪器(美国制造)穿取直径
0.6ram，长约2～3mm组织准确放人4.5cm×2.5cm×1.5cm 空白蜡块中，间距0.3mm.制备5ixrn厚连续石蜡切片.HE
染，确定组织芯片中的组织样本及形态学表现.
1.3免疫组织化学染采用EnVision两步法常规脱蜡
水化，经含有0.1%(v/,r)TritonX一100t'BS处理15nlin,
0.6%H2O230min,10%正常山羊血清处理30nfin.第一抗体
应用鼠抗人MFA91/CD63单克隆抗体(36581A,PharMingen, 作者单位:200438上海第二军医大学东方肝胆外科医院E—mail:*******************
中华临床医学实践杂志2004年12月第3卷第6期ChinJCliMedPra.Dee2004,V o1.3.No.6?493?
1:40),4℃过夜.第二抗体应用EnVision+山羊抗鼠抗体
(K4001,DAKO),37℃孵育1h,DAB显，苏木素复染.以
抗体稀释液替代第一抗体作阴性对照.
1.4免疫组织化学染结果判断细胞胞质出现淡黄一
棕黄沉淀，即为阳性细胞.
强阳性(高表达)，细胞胞质出现棕黄沉淀，或阳性细
胞数≥50%；弱阳性(低表达)，细胞胞质出现淡黄沉淀,
或阳性细胞数5—50%；阴性，细胞胞质无阳性着，或阳性
细胞数<5%.
1.5统计学处理两个率的比较采用x检验(四格表资料
校正公式)，多个率的比较亦采用x检验(2×k表资料计算
公式).
2结果
2.1ME491/CD63表达情况正常肝细胞胞质内可见片状
粗大棕黄颗粒沉淀.肝窦内皮阳性表达.癌旁(距癌组
织3mm一10mm，镜下无癌)肝细胞胞质内可见淡黄细沙
样沉淀或棕黄粗大颗粒沉淀，后者常见于细胞交界处.癌
细胞胞质内可见散在或片状细沙样棕黄或淡黄沉淀
(图1—2).5例正常肝中2例强阳性,3例弱阳性.156例
癌旁肝中45例强阳性,78例弱阳性,33例阴性.156例原
发癌中35例强阳性,52例弱阳性,69例阴性.24例癌栓
中1例强阳性,6例弱阳性,17例阴性；其中原发癌及癌栓
均阴性9例，均阳性4例，仅原发癌阳性8例，仅癌栓阳性2
例.17例肝外转移癌中3例弱阳性,14例阴性；其中原发癌
及转移癌均阴性8例，均阳性3例，仅原发癌阳性6例.4例
肝内卫星转移癌中1例强阳性,3例弱阳性；其中原发癌强
阳性肝内卫星转移癌弱阳性2例，原发癌阴性肝内卫星转
移癌弱阳性1例，原发癌阴性肝内卫星转移癌强阳性1例. 癌旁肝中MFA91/CD63蛋白表达率显着高于原发癌，癌栓及肝外转移癌(分别为79%,56%,29%和18%;X分别为17.84,23.17和26.17,P<0.01).原发癌与癌栓及肝外转
移癌比较，其ME491/CD63蛋白表达率差别均具有显着意义(分别为56%,29%和18%;x分别为4.88,P<0.05，及
7.46,P<0.01).但癌栓与肝外转移癌(分别为29%和18%)相比，其ME491/CD63蛋白表达率差异无显着意义(P >0.05).
2.2MEA91/CD63蛋白表达与肝细胞癌临床病理特征的关系(表1—2)统计学分析表明,ME491/CD63蛋白高表达
与肝细胞癌病理分级显着相关，病理分级2级HCC中
ME491/CD63蛋白高表达率高于3—4级HCC(分别为36% 和18%,x=-4.83,P<0.05).但ME491/CD63蛋白表达与
肿瘤大小，分型，包膜状况，癌栓形成，肝内卫星灶形成，肝外
转移及血清AFP水平等未见显着相关性(P>0.05).
表1ME491/CD63蛋白高表达与肝细胞癌病理分级之间
的关系
表2156例HCC中ME491/CD63蛋白的表达及其与临
床病理特征的关系
注:2例包膜状况不详,1例AFP不详
3讨论
TM4SF是一个编码跨膜糖蛋白的特殊家族，该家族成
细胞芯片
员的共同点在于其编码产物均有4个高度保守的跨膜区及数目不等的糖基化位点.研究表明TM4SF的部分成员与癌细胞粘附，迁移及增生有关.目前,TM4SF与恶性肿瘤侵袭
转移的关系日益受到重视，研究热点主要集中在三个家族成员，即MRP1/CD9,ME491/CD63及KM1/CD82的表达与人前列腺癌，胰腺癌，肺癌，乳癌，结肠癌，胃癌，黑素瘤等侵
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