T辅助细胞的激活全文

摘要：T辅助细胞在特异性抗原免疫应答的进攻与调节中起着重要的作用。在猪体内，CD4—T辅助细胞的2个亚被确定在非胸腺区域，并且二者在不同抗原的表面抗原表达中是不同的。其他物种中，CD4+CD8-是T辅助细胞的表现型，而猪的CD4+的存在表明了CD8a和MHCII分子的表达。在SEB模拟实验中，体外免疫反应的最突出的特点是CD4+CD8-亚的出现，它们是天然T辅助细胞的一大部分。在免疫反应中，CD8a和MHCIII在活化的T辅助细胞表面表达，这种体外成熟机制与CD45RC的减少有关系，因此，活化的T辅助细胞是和猪的II类T辅助细胞亚具有高度相似性的一种细胞表现型，CD4+CD8a+大部分都是MHCII+和CD45RC-.在抵抗古典猪瘟病毒的体外免疫反应中，只有CD4+,CD8+起作用。所以，T记忆细胞可以归类与T淋巴细胞亚。

前言：

以前的研究表明，猪T淋巴细胞表现型与其他物种有显著地不同。分化抗原CD4和CD8的表达可属于外周血中休眠状T淋巴细胞的4个亚，而且拥有CD4-CD8+表现型的T淋巴细胞是溶解性T淋巴细胞的大部分。表达T淋巴细胞受体ra的CD4-和CD8-亚。T辅助细胞存在两

种亚，一种是有经典表现型的T辅助细胞CD4+CD8-,一种是T淋巴细胞CD4+CD8+。猪是我们所知的唯一一个在血液和非胸腺淋巴系统中有T淋巴细胞CD4+CD8-的物种。通过检测动物的各个年龄段和免疫历史中血液里CD4+CD8+的表达量，可知它们的含量变化的很大。

这些现象表明，在组成四个CD4/CD8定义的T淋巴细胞亚的变化的现象，与猪T淋巴细胞的额外的成熟的胸腺和T辅助细胞从幼稚到记忆细胞的分化相结合。

2.结果

2.1猪辅助性T细胞的表型

多流式细胞分析（FCM）外周血T淋巴细胞显示以下的CD4阳性T辅助细胞的表型。所有的CD4阳性细胞共同表达CD5和，相比其他T细胞亚，CD4阳性T细胞亚代表最高CD5抗原密度的CD5小分子团（图1a）（塞缪尔等，1994）CD25 IL - 2受体阳性T辅助细胞在外周血的频率普遍偏低（图1b）。（贝利等人，1992年）在猪CD4T辅助细胞上的CD45RC（朱克曼等，1998）的表达是异构的和高含量的小分子团，存在中级和低CD45R

C的表达。在CD45阴性和CD45RC阳性的辅助性T细胞之间从来没有一个明确的分离（图1c）。

正如已经提到的，辅助性T细胞的一个相当大的比例显示了CD8 +的表达。通过CD8α链的表达表现CD8 的表达特点。针对CD8β链的单克隆抗体与各自的辅助性T细胞没有反应。很明显，没有CD4+T辅助细胞表达的CD8αβ异二聚体和一半左右的杀伤T淋巴细胞亚对CD8β以及CD8α的染。 CD8+细胞呈现高CD8 +表达代表MHC限制的杀伤T淋巴细胞。（Pauly等，1996）。低CD8的表达的CD8+细胞对CD8β-是阴性（SaalmuÈller，未发表的数据）。该小分子团包含了猪的NK细胞的种。这些细胞表达的只有CD8α链可与CD8阳性T辅助细胞相比较（比较（D）和（e）图1）。有趣的是发现休息猪辅助性T细胞的一个相当大的比例在主要组织相容性复合体MHCII也表达分子编码（图1F）。

Fig1图1。休息猪辅助性T细胞的表型。对（一）CD5，（二）CD25（C）CD45RC，（四）CD8α，（E）CD8β或（f）MHCII一个代表动物的淋巴细胞与CD4（X轴）与单克隆抗体结合的单克隆抗体对染（Y轴）。在每个象限的等高线图显示的数字代表在各自的象限的细胞百分比。

2.2 区分CD4 +CD8-和CD4+CD8 +T淋巴细胞亚

两个CD8α定义的辅助性T细胞亚的表型分析发现在其他表面分子表达期间的显著差异。

2个亚都是阴性CD1证明T淋巴细胞CD4+CD8+不能代表一个胸腺，它可能没有先前的成熟作用就移出免疫系统。因此，T辅助细胞的2个CD8a亚被认为是发育成熟的T淋巴细胞，活化的T淋巴细胞的特征是CD25的表达。在T辅助细胞亚CD4+CD8+中的CD25阳性细胞被浓缩，大部分的CD25表面抗原密度很低，相反，T辅助细胞CD4+CD8-包含很少的CD25-细胞。考虑到上面表述的CD45RC和它的不同基因型表达模式，CD4+CD8+中的CD45RC细胞的浓缩，被比喻为CD4+CD8-成分也是可被探测的。只有T淋巴细胞CD4+CD8+中的休眠的T辅助细胞上的MHCII分子的表达是显著的，而T辅助细胞CD4+CD8-不表现任何MHCII抗原的表达。

总的来说，猪的非胸腺T淋巴细胞包含T辅助细胞的2个亚，即其他物种中得具有CD4+CD8-表现型的CD4阳性T淋巴细胞和在CD8a的共同表达中很独特的CD4阳性T淋巴细胞亚，在这个亚中得MHCII+,CD25+和CD25RC-都被浓缩了。

2.3 活化的T 辅助细胞的表现型

众所周知，淋巴细胞经促细胞分裂剂或抗原的激活作用后，可改变他们的表现型，导致猪体内白细胞分化抗原的上升或下降。为了检测猪体外免疫应答中激活的T辅助细胞的表现型，

T淋巴细胞先用特殊的抗白细胞表面抗原的单克隆抗体染后，再用超抗原SEB刺激6天。SEB刺激可导致T辅助细胞的选择性活化。所有体外活化的T辅助细胞将发展为一种CD25+细胞分子团，并且表明了CD45RC表面抗原表达的下降，指示了活化的T辅助细胞的同源基

因。活化的T胚细胞上的CD8a分子的表达是显著地，导致了有CD4+CD8+表现型的单一T辅助细胞。像休眠的CD4+CD8+T辅助细胞这样的细胞只表达CD8a而不能表达CD8b链。CD8a表达量的上升和活化的T淋巴细胞表面的记忆辅助MHCII分子的表达的辅助有关。

猪原始的体外免疫反应中活化的T辅助细胞可导致CD25表达量的上升和CD45RC的下降，猪体内高浓度活化的T辅助细胞表明了CD8a和MHCII的表达。

Fig2图2。CD4阳性T淋巴细胞亚的表型特征。PBMC的染对CD4和CD8（a）与单克隆抗体结合，对CD1，CD25，CD45RC或MHCII。的CD8定义了两个辅助性T细胞组分的选择性分析，通过设置在CD4‡CD8‡辅助性T细胞（B，D± G）和CD4 +CD8辅助性T细胞（C，H K）的电子窗口来实现。直方图显示在各自的辅助性T细胞组分上CD2，CD25，CD45RC和MHCII的表达。