电感耦合等离子体质谱(ＩＣＰ－ＭＳ)法测定人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中的２１种元素 姜树银ꎬ张迅杰ꎬ张乃斌ꎬ李春焕ꎬ贺美莲ꎬ石峰ꎬ咸瑞卿
(山东省食品药品检验研究院ꎬ国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室ꎬ 山东省仿制药一致性评价工程技术研究中心ꎬ山东济南２５０１０１)
摘要：目的㊀建立电感耦合等离子体质谱(ＩＣＰ－ＭＳ)同时测定人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中硼(Ｂ)㊁镁(Ｍｇ)㊁铝(Ａｌ)㊁硅(Ｓｉ)㊁钒(Ｖ)㊁镉(Ｃｒ)㊁锰(Ｍｎ)㊁铁(Ｆｅ)㊁钴(Ｃｏ)㊁镍(Ｎｉ)㊁铜(Ｃｕ)㊁锌(Ｚｎ)㊁锶(Ｓｒ)㊁锆(Ｚｒ)㊁钼(Ｍｏ)㊁铑(Ｒｈ)㊁钯(Ｐｄ)㊁锡(Ｓｎ)㊁钡(Ｂａ)㊁铈(Ｃｅ)㊁铅(Ｐｂ)元素含量的方法ꎮ方法㊀样品经微波消解后ꎬ以钪(Ｓｃ)㊁锗(Ｇｅ)㊁铟(Ｉｎ)㊁铋(Ｂｉ)为内标ꎬ采用电感耦合等离子体质谱(ＩＣＰ－ＭＳ)法同时测定上述元素的含量ꎮＩＣＰ－ＭＳ功率为１５５０Ｗꎬ采样深度为１０.０ｍｍꎬ等离子气㊁雾化气㊁辅助气流量分别为１５.０㊁０.９９㊁０.９Ｌ ｍｉｎ－１ꎬ泵速为０.１０ｒ ｓ－１ꎬ雾化室温度为２ħꎬ硼(Ｂ)元素采用ＮｏＧａｓ调谐模式ꎬ其他元素采用Ｈｅ调谐模式ꎬ数据采集３次ꎮ结果㊀２１种元素在测定的浓度范围内ꎬ线性关系良好ꎬ相关系数ｒ>０.９９９０ꎻ检出限为０.００１~２.０４μｇ Ｌ－１ꎻ各元素回收率为８７.７８％~１０２.７２％ꎬＲＳＤ为１.３１％~７.９１％ꎮ结论㊀该方法快速简便㊁灵敏度高㊁准确性 好ꎬ可用于人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中金属元素的检测ꎮ
关键词：金属元素ꎻ微波消解ꎻ人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂ꎻ电感耦合等离子体质谱
中图分类号:Ｒ９２７.２㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２１)１０－０６４８－００４
ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２１.１０.００５
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ２１ｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎＨｕｍａｎＣｏａｇｕｌａｔｉｏｎＦａｃｔｏｒⅧ/ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ
ＦａｃｔｏｒＣｏｍｐｌｅｘＬｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄＩｎｊｅｃｔｉｏｎｂｙＩＣＰ－ＭＳ
ＪＩＡＮＧＳｈｕｙｉｎꎬＺＨＡＮＧＸｕｎｊｉｅꎬＺＨＡＮＧＮａｉｂｉｎꎬＬＩＣｈｕｎｈｕａｎꎬＨＥＭｅｉｌｉａｎꎬＳＨＩＦｅｎｇꎬＸＩＡＮＲｕｉｑｉｎｇ(ＳｈａｎｄｏｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＣｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＧｅｎｅｒｉｃＤｒｕｇｓꎬＮａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ<ＮＭＰＡ>ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＱｕａｌ
ｉｔｙＥｖａｌｕａｔｉｏｎ
ｏｆＧｅｌａｔｉｎＰｒｏｄｕｃｔｓꎬＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＪｉｎａｎ２５０１０１ꎬＣｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙｃｏｕｐｌｅｄｐｌａｓｍａｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ(ＩＣＰ－ＭＳ)ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｓｉｍｕｌ￣ｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｂｏｒｏｎ(Ｂ)ꎬｍａｇｎｅｓｉｕｍ(Ｍｇ)ꎬａｌｕｍｉｎｕｍ(Ａｌ)ꎬｓｉｌｉｃｏｎ(Ｓｉ)ꎬｖａｎａｄｉｕｍ(Ｖ)ꎬｃａｄｍｉｕｍ(Ｃｒ)ꎬｍａｎ￣ｇａｎｅｓｅ(Ｍｎ)ꎬｉｒｏｎ(Ｆｅ)ꎬｃｏｂａｌｔ(Ｃｏ)ꎬｎｉｃｋｅｌ(Ｎｉ)ꎬｃｏｐｐｅｒ(Ｃｕ)ꎬｚｉｎｃ(Ｚｎ)ꎬｓｔｒｏｎｔｉｕｍ(Ｓｒ)ꎬｚｉｒｃｏｎｉｕｍ(Ｚｒ)ꎬｍｏｌｙｂｄｅｎｕｍ(Ｍｏ)ꎬｒｈｏｄｉｕｍ(Ｒｈ)ꎬｐａｌｌａｄｉｕｍ(Ｐｄ)ꎬｔｉｎ(Ｓｎ)ꎬｂａｒｉｕｍ(Ｂａ)ꎬｃｅｒｉｕｍ(Ｃｅ)ａｎｄｌｅａｄ(Ｐｂ)ｉｎｈｕｍａｎｃｏａｇ￣ｕｌａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒⅧ/ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄｆａｃｔｏｒｃｏｍｐｌｅｘｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄｉｎｊｅｃｔｉｏｎ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ａｆｔｅｒｍｉｃｒｏｗａｖｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆｓａｍｐｌｅｓꎬｗｉｔｈｓｃａｎｄｉｕｍ(Ｓｃ)ꎬｇｅｒｍａｎｉｕｍ(Ｇｅ)ꎬｉｎｄｉｕｍ(Ｉｎ)ａｎｄｂｉｓｍｕｔｈ(Ｂｉ)ａｓｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄꎬｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｅａｂｏｖｅｅｌｅｍｅｎｔｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙｃｏｕｐｌｅ
ｄｐｌａｓｍａｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ(ＩＣＰ－ＭＳ)ｍｅｔｈｏｄａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｔｈｅＩＣＰ－ＭＳｐｏｗｅｒｗａｓ１５５０Ｗꎬｓａｍｐｌｉｎｇｄｅｐｔｈｗａｓ１０.０ｍｍꎬｐｌａｓｍａｇａｓꎬｃａｒｒｉｅｒｇａｓａｎｄａｕｘｉｌｉａｒｙｇａｓｆｌｏｗｗｅｒｅ１５.０ꎬ０.９９ꎬ０.９Ｌ ｍｉｎ－１ｒｅｓｐｅｃ￣ｔｉｖｅｌｙꎬｔｈｅｐｕｍｐｓｐｅｅｄｗａｓ０.１０ｒ ｓ－１ꎬｔｈｅａｔｏｍｉｚｉｎｇｃｈａｍｂｅｒｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ２ħꎬｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｄｅｗａｓＮｏＧａｓ(Ｂ)ａｎｄｈｅｌｉｕｍ(ｏｔｈｅｒｓ)ꎬｄａｔａｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｏｒｔｈｒｅｅｔｉｍｅｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅ２１ｅｌｅｍｅｎｔｓｈａｖｅａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｉｎｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｎｇｅꎬｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｒ>０.９９９ꎻｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｗａｓ０.００１~２.０４μｇ Ｌ－１ꎻｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒ￣ｉｅｓｏｆｅａｃｈｅｌｅｍｅｎｔｗｅｒｅ８７.７８％~１０２.７２％ꎬａｎｄｔｈｅＲＳＤｓｗｅｒｅ１.３１％~７.９１％.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｒａｐｉｄꎬｓｉｍ￣ｐｌｅꎬｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅꎬａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｅｔａｌｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓｏｆｈｕｍａｎｃｏａｇｕｌａ￣
㊀作者简介：姜树银ꎬ女ꎬ主任药师ꎬ研究方向：药品检验ꎬＥ－ｍａｉｌ:１２７２１３６３１３＠ｑｑ.ｃｏｍ
㊀通信作者：咸瑞卿ꎬ男ꎬ副主任药师ꎬ研究方向：药品质量研究ꎬＴｅｌ:０５３１－８１２１６５６１ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｘｉａｎｒｕｉｑｉｎｇ＠１２６.ｃｏｍ
ｔｉｏｎｆａｃｔｏｒⅧ/ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄｆａｃｔｏｒｃｏｍｐｌｅｘ.
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＭｅｔａｌｅｌｅｍｅｎｔｓꎻＭｉｃｒｏｗａｖｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎꎻＨｕｍａｎＣｏａｇｕｌａｔｉｏｎＦａｃｔｏｒⅧ/ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄＦａｃｔｏｒＣｏｍｐｌｅｘＬｙ￣ｏｐｈｉｌｉｚｅｄＩｎｊｅｃｔｉｏｎꎻＩｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙｃｏｕｐｌｅｄｐｌａｓｍａｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ
㊀㊀血管性血友病因子(ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄｆａｃｔｏｒꎬｖＷＦ)是由血管内皮细胞和骨髓巨核细胞合成的一种多结构域㊁多功能糖蛋白ꎬ在１期和２期止血中发挥重要作用[１－２]ꎮ人凝血因子Ⅷ(ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒⅧ)是一种血浆糖蛋白ꎬ是内源性凝血途径中一种重要的凝血因子[３－６]ꎮ这两种因子均为人体内重要的凝血成分ꎬ一旦缺乏会引起不同程度的血友病ꎬ严重时会危及生命ꎮ人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂是目前此类疾病的最有效的药物ꎮ该药物的生产工艺涉及沉淀㊁离心㊁吸附㊁层析㊁超滤㊁灭活等工序ꎬ所用仪器设备及物料均有可能引入重金属ꎬ监测该制剂中重金属元素的含量对于保证用药安全非常重要ꎮ目前ꎬ采用微波消解－电感耦合等离子体质谱(ＩＣＰ－ＭＳ)法测定药品中金属元素的方法较为成熟[７－９]ꎬ但尚无关于该产
品中重金属元素检测方法的研究报道ꎮ本研究建立了ＩＣＰ－ＭＳ测定人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中２１种常见金属元素含量的方法ꎬ为该制剂的质量控制提供了参考ꎮ
１㊀仪器与试剂
１.１㊀仪器㊀７８００型电感耦合等离子体质谱仪(Ａｇｉｌｅｎｔ公司)ꎻＭＡＲＳ６型微波消解仪(美国ＣＥＭＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ公司)ꎻＥＨＤ－４０赶酸炉(北京东航科技有限公司)ꎻＡ１０纯水机(美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ)ꎻＸＳＥ２０５型电子天平(瑞士梅特勒公司)ꎮ
１.２㊀主要试剂㊀单元素硼(Ｂ)㊁钪(Ｓｃ)㊁镁(Ｍｇ)㊁铝(Ａｌ)㊁硅(Ｓｉ)㊁钒(Ｖ)㊁锰(Ｍｎ)㊁铁(Ｆｅ)㊁钴(Ｃｏ)㊁镍(Ｎｉ)㊁铜(Ｃｕ)㊁锌(Ｚｎ)㊁锶(Ｓｒ)㊁锆(Ｚｒ)㊁钼(Ｍｏ)㊁铑(Ｒｈ)㊁钯(Ｐｄ)㊁锡(Ｓｎ)㊁钡(Ｂａ)㊁铈(Ｃｅ)㊁铅(Ｐｂ)标准溶液(１０００μｇ Ｌ－１ꎬＩｎｏｒｇａｎｉｃ)ꎻ镉(Ｃｒꎬ１０００μｇ Ｌ－１ꎬ国家有金属及电子材料分析测试中心)ꎻ硝酸(６５％ꎬＵＰ级ꎬ苏州晶瑞化学股份有限公司)ꎻ超纯水(纯化水经Ａ１０纯水机过滤ꎬ电阻率<１８ＭΩ ｃｍꎮ １.３㊀样品㊀样品由山东泰邦生物制品有限公司提供ꎬ批号:２０２０１２Ｓ０８㊁２０２０１２Ｓ０９㊁２０２０１２Ｓ１０ꎮ
２㊀方法与结果
２.１㊀仪器工作参数
２.１.１㊀ＩＣＰ－ＭＳ条件㊀等离子体选择常规模式ꎻ功率为１５５０Ｗꎬ采样深度为１０.０ｍｍꎬ等离子气㊁雾化气㊁辅助气流量分别为１５.０㊁０.９９㊁０.９Ｌ ｍｉｎ－１ꎬＨｅ气流量为３.７Ｌ ｍｉｎ－１ꎬ泵速为０.１０ｒ ｓ－１ꎬ雾化室温度为２ħꎬ积分时间为０.１ｓꎬ数据采集重复读取３次ꎬ扫描/重复次数为１００ꎬ峰型为３ꎬ稳定时间为４０ｓꎻ硼(Ｂ)元素采用ＮｏＧａｓ调谐模式ꎬ其他元素采用Ｈｅ调谐模式ꎬ有效消除来自质谱的干扰ꎮ２.１.２㊀微波消解程序㊀依据消解罐的数量ꎬ选择合适的功率ꎮ８~１２罐:８００Ｗꎬ１３~２４罐:１２００Ｗꎬ２５~４０罐:１６００Ｗꎮ本研究选择１２００Ｗꎬ升温程序:１０ｍｉｎ内升温至１２０ħꎬ保持２ｍｉｎꎻ５ｍｉｎ内升温至１５０ħꎬ保持５ｍｉｎꎬ５ｍｉｎ内升温至１９０ħꎬ保持２０ｍｉｎꎮ
２.２㊀溶液制备
２.２.１㊀内标溶液㊀选择Ｓｃ(４５)作为Ｂ(１１)㊁Ｍｇ(２４)㊁Ａｌ(２７)㊁Ｓｉ(２８)㊁Ｖ(５１)㊁Ｍｎ(５５)㊁Ｆｅ(５６)㊁Ｃｏ(５９)元素的内标ꎻＧｅ(７２)作为Ｎｉ(６０)㊁Ｃｕ(６３)㊁Ｚｎ(６６)㊁Ｓｒ(８８)㊁Ｚｒ(９０)㊁Ｍｏ(９５)元素的内标ꎻＩｎ(１１５)作为Ｒｈ(１０３)㊁Ｐｄ(１０５)㊁Ｓｎ(１１８)㊁Ｂａ(１３７)元素的内标ꎻＢｉ(２０９)作为Ｐｂ(２０８)元素的内标ꎮ精密量取内标单元素标准溶液(１０００μｇ Ｌ－１)适量ꎬ用２％硝酸稀释至２００ｍＬꎬ使Ｓｃ(４５)㊁Ｇｅ(７２)㊁
Ｉｎ(１１５)元素浓度为３００μｇ Ｌ－１㊁Ｂｉ(２０９)元素浓度为１００μｇ Ｌ－１ꎮ使用蠕动泵和Ｔ型混合三通在线添加ꎬ对分析信号进行校正ꎬ有效地克服信号漂移㊁消除一定的基体干扰ꎮ
２.２.２㊀混合标准元素线性溶液㊀精密量取２１种单元素标准溶液(１０００μｇ ｍＬ－１)适量(见 １.２ 项下主要试剂)ꎬ用２％硝酸溶液稀释至５０ｍＬꎬ作为混合标准元素线性溶液(１)~(７)ꎬ其浓度范围见表１ꎮ２.２.３㊀供试品溶液和空白溶液㊀精密称取本品约０.５ｇꎬ置微波消化罐中ꎬ加入２ｍＬ水ꎬ使润湿ꎬ加入８ｍＬ硝酸ꎬ密封ꎬ浸泡过夜ꎮ置微波消解仪中ꎬ按 ２.１.２ 项下微波消解程序消解ꎮ冷却后取出ꎬ置赶酸炉中ꎬ１３０ħ下赶酸至红棕蒸汽挥尽后ꎬ继续浓缩至剩余溶液约为０.５ｍＬꎬ放冷ꎬ用水转移并定容至２５ｍＬ离心管中ꎬ摇匀ꎬ即得ꎮ不加样品ꎬ同法制备空白溶液ꎮ
２.３㊀测定法
２.３.１㊀线性关系和线性范围㊀取 ２.２.２ 项下混合标准元素线性溶液ꎬ按 ２.１.１ 项下ＩＣＰ－ＭＳ条件进
样测定ꎬ记录仪器相应值ꎮ以待测元素浓度为横坐标ꎬ待测元素响应值(ＣＰＳ值)与内标元素响应值(ＣＰＳ值)的比率为纵坐标ꎬ进行线性回归(仪器自动计算)ꎮ结果见表１ꎮ
表１㊀混合标准元素线性溶液浓度㊁范围㊁回归方程(μｇ Ｌ－１)
元素内标
元素溶液浓度
浓度范围
线性方程
相关系数ｒ
Ｂ
Ｓｃ０㊁１０㊁２０㊁３０㊁４０㊁５０
０~５０Ｙ＝９.６０８ˑ１０－３
Ｘ＋４.９８８ˑ１０
－２
１.００００ＭｇＳｃ０㊁２０㊁４０㊁６０㊁８０㊁１００
０~１００
Ｙ＝１.３９８ˑ１０－３Ｘ＋２.５４３ˑ１０－２０.９９９７ＡｌＳｃ０㊁１０㊁２０㊁３０㊁４０㊁５０㊁１０００~１００
Ｙ＝７.０５１ˑ１０－３Ｘ＋７.７８６ˑ１０－３０.９９９５ＳｉＳｃ０㊁１００㊁２００㊁３００㊁４００㊁５０００~５００Ｙ＝４.１４５ˑ１０－３Ｘ＋１.０４５ˑ１０－１０.９９９８ＶＳｃ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５㊁１００~１０Ｙ＝７.１９２ˑ１０－３Ｘ＋２.１１６ˑ１０－４１.００００Ｃｒ
Ｓｃ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５㊁１００~１０Ｙ＝８.５３５ˑ１０－２Ｘ＋２.２８５ˑ１０－３０.９９９７ＭｎＳｃ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５㊁１０
０~１０Ｙ＝６.３４４ˑ１０－２Ｘ＋５.０３５ˑ１０－３０.９９９７Ｆｅ
Ｓｃ０㊁１０㊁２０㊁３０㊁４０㊁５００~５０Ｙ＝８.０６７ˑ１０－２Ｘ＋９.６６３ˑ１０－２０.９９９８ＣｏＳｃ
０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５０~５Ｙ＝１.２０６ˑ１０－１
Ｘ＋２.２８５ˑ１０
－３
０.９９９９ＮｉＧｅ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５０~５
Ｙ＝７.２７２ˑ１０－２Ｘ＋２.９３４ˑ１０－２０.９９９６ＣｕＧｅ０㊁１０㊁２０㊁３０㊁４０㊁５０
０~５０
Ｙ＝１.６９４ˑ１０－１Ｘ＋２.３７６ˑ１０－２１.００００ＺｎＧｅ０㊁２０㊁４０㊁６０㊁８０㊁１０００~１００Ｙ＝３.６８９ˑ１０－２Ｘ＋６.００２ˑ１０－２０.９９９９ＳｒＧｅ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５㊁１００~１０Ｙ＝１.７１３ˑ１０－１Ｘ＋１.２６０ˑ１０－２０.９９９６ＺｒＧｅ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５０~５Ｙ＝２.０８０ˑ１０－１Ｘ＋１.３５０ˑ１０－３０.９９９９ＭｏＧｅ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５０~５Ｙ＝８.１５９ˑ１０－２Ｘ＋７.１９９ˑ１０－４０.９９９８ＲｈＩｎ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５０~５Ｙ＝５.８８８ˑ１０－２Ｘ＋４.５７８ˑ１０－５０.９９９９ＰｄＩｎ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５
０~５
Ｙ＝１.２１４ˑ１０－２Ｘ＋１.２８２ˑ１０－４０.９９９８Ｓｎ
Ｉｎ０㊁５㊁１０㊁１５㊁２０㊁２５０~２５Ｙ＝５.０５９ˑ１０－２Ｘ＋８.１２４ˑ１０
－４０.９９９９ＢａＩｎ０㊁５㊁１０㊁１５㊁２０㊁２５㊁５００~５０Ｙ＝５.２３９ˑ１０－３
Ｘ＋３.６６２ˑ１０－４
０.９９９８ＣｅＩｎ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５０~５Ｙ＝６.００５ˑ１０－２Ｘ＋１.２８２ˑ１０－４
１.００００ＰｂＢｉ０㊁１㊁２㊁３㊁４㊁５０~５Ｙ＝１.４８４ˑ１０－１
Ｘ＋９.８４４ˑ１０
－３
０.９９９７
２.３.２㊀检出限(ＬＯＤ)与定量限(ＬＯＱ)㊀取２％硝酸溶液ꎬ连续进样１１次ꎬ计算待测元素ＣＰＳ值与内标ＣＰＳ值比率的标准偏差ＳＤꎬ以３倍的标准偏差与线性方程中斜率的比值为检出限ꎬ以１０倍的标准偏差与线性方程中斜率的比值为定量限ꎬ结果见表２ꎮ
表２㊀检出限与定量限结果(μｇ Ｌ－１)
元素检出限定量限元素检出限定量限Ｂ
０.１７０.５６Ｚｎ０.２００.６８Ｍｇ０.２５０.８３Ｓｒ
０.０２
０.０５Ａｌ０.２３０.７８Ｚｒ０.００５０.０２Ｓｉ２.０４
６.８０Ｍｏ０.０１０.０３
Ｖ０.００５０.０２Ｒｈ０.００１０.００２Ｃｒ
０.０１０.０４Ｐｄ０.０１０.０２Ｍｎ０.０２０.０７Ｓｎ
０.０１０.０２Ｆｅ
０.０７０.２５Ｂａ０.０４０.１４Ｃｏ０.０１０.０３Ｃｅ０.００３０.０１Ｎｉ０.２３０.７６Ｐｂ０.０２０.０７Ｃｕ０.０５０.１６
２.３.３㊀精密度㊀取混合标准元素线性溶液(４)ꎬ重复进样６次ꎬ计算检测值的ＲＳＤ(％)ꎬ结果见表３ꎮ
２.３.４㊀回收率㊀照第 ２.２.３ 项下供试品溶液的制备方法ꎬ同时加入适量浓度的单元素标准溶液ꎬ平行制备６份ꎬ进样检测ꎬ计算回收率(％)和ＲＳＤ(％)ꎬ结果见表４ꎮ
表３㊀精密度结果(μｇ Ｌ－１)
元素平均检测值ＲＳＤ(％)元素平均检测值ＲＳＤ(％)Ｂ
２９.９３０.０１Ｚｎ５９.４３０.０２Ｍｇ５９.４９０.０１Ｓｒ
３.０００.０２Ａｌ２９.７８
０.０２Ｚｒ２.９２０.０２Ｓｉ３０１.２００.０１Ｍｏ２.９６０.０２Ｖ３.０４０.０１Ｒｈ２.９９０.００Ｃｒ
２.９８０.０１Ｐｄ２.９７
０.０２Ｍｎ２.９２０.０３Ｓｎ１４.６９０.０１Ｆｅ
２９.７８０.０１Ｂａ１４.９００.０１Ｃｏ３.０５０.０１Ｃｅ２.９８０.０１Ｎｉ３.４２０.０３Ｐｂ２.９８０.０２
Ｃｕ３０.０８０.０１
表４㊀回收率结果(％)
元素平均回收率ＲＳＤ元素平均回收率ＲＳＤＢ
９６.４９１.４１Ｚｎ９６.９５
２.３３Ｍｇ９６.３０
１.５２Ｓｒ
１０２.１１３.３１Ａｌ１００.６５４.２３Ｚｒ９８.００２.４０Ｓｉ１０１.１２２.２３Ｍｏ１００.２２３.１４Ｖ９８.９４１.８３Ｒｈ９３.６１１.５２Ｃｒ
９２.６１３.６３Ｐｄ８７.７８２.１８Ｍｎ９４.０６７.９１Ｓｎ９４.３４１.４４Ｆｅ
９８.３３２.３８Ｂａ１００.５１.６７Ｃｏ９１.２７１.８１Ｃｅ９８.６１１.３１Ｎｉ９３.０６２.９５Ｐｂ１０２.７２
２.６７
Ｃｕ９１.１４１.３１
２.３.５㊀重复性㊀照第 ２.３.４ 项下回收率中供试品溶液的制备方法ꎬ平行制备６份ꎬ计算回收率(％)和ＲＳＤ(％)ꎬ结果见表５ꎮ
表５㊀重复性结果(％)
元素平均回收率ＲＳＤ元素平均回收率ＲＳＤＢ
９６.２３１.１６Ｚｎ９５.７５１.５５Ｍｇ９４.１９
１.０３Ｓｒ
９８.７２１.３４Ａｌ１０２.６５０.９８Ｚｒ９７.８３２.３０Ｓｉ１０１.１５１.１２Ｍｏ９８.２８１.３８Ｖ９９.１７０.８
Ｒｈ９４.１７０.６７Ｃｒ
９０.６１１.２９Ｐｄ８６.１７１.６９Ｍｎ８８.９４０.８１Ｓｎ９２.９９０.７７Ｆｅ
９６.２４０.７７Ｂａ９７.８３１.２９Ｃｏ９１.２２１.１８Ｃｅ９７.３３
０.７１Ｎｉ９１.１７４.３３Ｐｂ１０２.００１.１９
Ｃｕ９０.０８０.９８２.３.６㊀样品检测结果㊀取本品ꎬ按 ２.２.３ 项下方法制备供试品溶液ꎬ进样检测ꎬ计算样品中各元素的含量ꎮ结果见表６ꎮ表６中Ｓ０８－３㊁Ｓ０９－３㊁Ｓ１０－３和Ｓ０８－６㊁Ｓ０９－６㊁Ｓ１０－６为本品２０２０１２Ｓ０８㊁２０２０１２Ｓ０９㊁２０２０１２Ｓ１０按加速试验条件[(４０ʃ
微波消解２)ħꎬ７５％ʃ５％]存放３个月和６个月的检测结果ꎮ
表６㊀样品中各元素含量检测结果(μｇ Ｌ－１)
元素Ｓ０８－３Ｓ０９－３Ｓ１０－３Ｓ０８－６Ｓ０９－６Ｓ１０－６Ｂ０.０９０.０８０.０８ＮＤＮＤＮＤＭｇ１.２８１.２５１.２５１.３５１.３４１.３７Ａｌ１.３８１.３６１.３６０.０４０.０６０.０５Ｓｉ１.０４１.０３１.１１ＮＤＮＤＮＤＶＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＣｒ０.０７０.０７０.０７０.０８０.０７０.０７Ｍｎ０.３１０.３１０.３１０.３２０.３１０.３２Ｆｅ０.０２０.０２０.０２０.３７０.４７０.３４ＣｏＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＮｉＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＣｕ０.０２０.０２０.０２ＮＤＮＤＮＤＺｎ０.４７０.４７０.４７０.０１０.０１０.０１Ｓｒ０.１７０.１７０.１７０.１７０.１８０.１８ＺｒＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＭｏＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＲｈＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＰｄＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＮＤＳｎ０.０１０.０１０.０１ＮＤＮＤ０.０１
Ｂａ０.２８０.２８０.２７０.２９０.２９０.２８Ｃｅ０.０１０.０１０.０１０.０１０.０１０.０１Ｐｂ０.０１０.０１０.０１ＮＤＮＤＮＤ㊀注:ＮＤ为未检出
３ 讨论
«中国药典»２０２０年版人血白蛋白铝残留量测定法第二法收载了ＩＣＰ－ＭＳ法ꎮ参照此法ꎬ采用５％硝酸沉淀蛋白４ｈ后ꎬ离心滤过ꎬ上样测定ꎬ结果显示基质干扰大ꎬ结果重现性差ꎮ研究发现ꎬ该方法蛋白沉淀不完全ꎬ易带来较大仪器污染导致测定结果出现较大波动ꎮ本研究采用微波消解法ꎬ通过优化样品取样量㊁消解液用量㊁消解时间㊁消解温度等参数ꎬ建立了适用的样品前处理方法ꎬ采用该方法样品消解完全ꎬ溶液澄清ꎬ降低了酸对采样锥的损坏ꎬ并消除其他试剂引入带来的基体干扰ꎬ测定结果重现性良好ꎮ该方法快速简便㊁灵敏度高㊁准确性好ꎬ不仅适用于人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中金属元素的检测ꎬ而且可为其他血液制品中金属元素含量的测定提供参考ꎮ
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