一种肌酸激酶检测试剂盒的制作方法

1.本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种肌酸激酶试剂盒。

背景技术：

2.肌酸激酶(ck)又称肌酸磷酸激酶，在骨骼肌、心肌中含量最多，其次是脑组织，肠道、肾和肺含量较少。ck主要存在于细胞质和线粒体中，能可逆的催化肌酸和三磷酸腺苷生成磷酸肌酸和二磷酸腺苷，在ph中性条件下，以atp生成为主，以保证组织细胞的功能，正向反应利于线粒体内氧化生成的atp，以磷酸肌酸的形式进入细胞液，满足细胞生理活动之需要。
3.ck在临床上主要用于诊断心机梗塞，急性心肌梗死时，ck在发病2-4h开始升高，12-48h达到峰值，其升高程度较乳酸脱氢酶(ldh)大，且出现早，与心肌损伤的程度基本一致，且心电图不易诊断的心内膜下心肌梗死和复发性心肌梗死时ck活性亦升高，动态监测有助于心肌梗死的病情观察和预后估计。ck对其他疾病也具有一定诊断意义，严重肌肉损伤时ck活性明显增高，脑血管意外、脑膜炎、剧烈运动等ck活性升高，甲状腺功能亢进、慢性关节炎、化疗等可使ck活性降低。
4.目前临床实验室检测ck活性多为ifcc推荐法，此法是三步法反应，ck催化肌酸磷酸和adp反应生成atp和肌酸，atp和葡萄糖在己糖激酶(hk)的催化下生成葡萄糖-6-磷酸和adp，葡萄糖-6-磷酸和氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nadp+)在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(g6pdh)的催化作用下生成6-磷酸葡萄糖酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nadph)，在340nm处检测nadph的反应吸光度，其变化率与ck活性成正相关，反应方程式如下：
[0005][0006]
ifcc推荐法的ck测定试剂盒存在以下缺陷：当测试肝素抗凝血浆样本时，血浆测值普遍比血清测值偏低，肝素血浆样本反应曲线异常。因此，提供一种抗肝素性能好的ck试剂盒是目前亟需解决的问题。

技术实现要素：

[0007]
有鉴于此，本发明提供了一种肌酸激酶试剂盒。该试剂盒能够有效地消除肝素血浆样本中肝素的干扰，使肝素抗凝血浆样本反应曲线不再异常，肝素抗凝样本与血清样本测值偏差变小，检测结果更加准确、稳定。
[0008]
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0009]
一种肌酸激酶检测试剂盒，由试剂r1和试剂r2组成；
[0010]
所述试剂r1包括以下浓度的组分：
[0011]
缓冲液90-120mmol/l，葡萄糖4-6mmol/l，乙酸镁15-17mmol/l，n-乙酰半胱氨酸
29-32mmol/l，adp2-3mmol/l，amp4.5-6.5mmol/l，g6pdh≥3ku/l，nadp
+
2-4mmol/l，hk≥5ku/l，亚硫酸钠1.5-2.5mmol/l，dtpa1.5-2.5mmol/l，防腐剂0.5-2g/l，无机盐6-12g/l；
[0012]
所述试剂r2包括以下浓度的组分：
[0013]
缓冲液15-30mmol/l，葡萄糖45-60mmol/l，肌酸磷酸220-245mmol/l，防腐剂1-3g/l。
[0014]
与现有技术相比，本发明通过在r1中添加6-12g/l的氯化钠，同时使用dtpa替代edta，有效地消除了肝素血浆样本中肝素的干扰，使肝素抗凝血浆样本反应曲线不再异常，肝素抗凝样本与血清样本测值偏差变小，明显提高了检测的准确性和稳定性。
[0015]
本发明中，所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、氯化锌中的至少一种。
[0016]
本发明中，所述r1试剂中，所述r1试剂中，缓冲液为咪唑缓冲液、mes缓冲液、bis-tris缓冲液中的至少一种。一些具体实施方案中，缓冲液为咪唑缓冲液，ph为6.5。
[0017]
本发明中，所述r2试剂中，缓冲液为capso、tris缓冲液、甘氨酸缓冲液中的至少一种。一些具体实施方案中，缓冲液为capso，ph为9.0。
[0018]
本发明中，所述r1和r2中防腐剂的种类没有特殊限制，包括但不仅限于为叠氮钠、proclin300中的至少一种。
[0019]
本发明的一些具体实施例中，所述肌酸激酶的检测试剂盒中，所述r1包括以下浓度的组分：
[0020]
ph6.5的咪唑缓冲液115.7mmol/l，葡萄糖5mmol/l，乙酸镁16.2mmol/l，n-乙酰半胱氨酸30.6mmol/l，adp2.5mmol/l，amp5.2mmol/l，g6pdh5ku/l，nadp
+
3.3mmol/l，hk10ku/l，亚硫酸钠2mmol/l，dtpa2mmol/l，防腐剂1g/l，氯化钠6g/l～12g/l。
[0021]
所述r2包括以下浓度的组分：
[0022]
ph＝9.0的capso缓冲液20mmol/l，葡萄糖50.5mmol/l，肌酸磷酸236.8mmol/l，叠氮钠2g/l。
[0023]
本发明还提供一种检测肌酸激酶的方法，利用本发明所述的肌酸激酶检测试剂盒检测待测血清样本或待测肝素抗凝血浆样本。
[0024]
本发明提供的肌酸激酶检测试剂盒中，在r1中添加6-12g/l的氯化钠，同时使用dtpa替代edta，实验表明，该试剂盒能够有效地消除肝素血浆样本中肝素的干扰，使肝素抗凝血浆样本反应曲线不再异常，肝素抗凝样本与血清样本测值偏差变小，检测结果更加准确、稳定。
附图说明
[0025]
图1示肝素血浆样本1的反应曲线；
[0026]
图2示肝素血浆样本2的反应曲线。
具体实施方式
[0027]
本发明提供了一种肌酸激酶检测试剂盒。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进
行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0028]
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0029]
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0030]
实施例1
[0031]
本实施例中，r1中含氯化钠(6g/l)，r1中螯合剂是dtpa，试剂组成成分如下：
[0032]
试剂1(r1)组成成分：
[0033][0034]
试剂2(r2)组成成分：
[0035][0036]
实施例2
[0037]
本实施例中r1中含氯化钠(12g/l)，r1中螯合剂是dtpa，试剂组成成分如下：
[0038]
试剂1(r1)组成成分：
[0039][0040][0041]
试剂2(r2)组成成分：
[0042][0043]
对比例1
[0044]
本实施例是r1中不含氯化钠，r1中螯合剂是edta，试剂组成成分如下：
[0045]
试剂1(r1)组成成分：
[0046][0047]
试剂2(r2)组成成分：
[0048][0049]
对比例2
[0050]
本实施例中r1中不含氯化钠，r1中螯合剂是dtpa，试剂组成成分如下：
[0051]
试剂1(r1)组成成分：
[0052][0053][0054]
试剂2(r2)组成成分：
[0055][0056]
对比例3
[0057]
本实施例中r1中含氯化钠(6g/l)，r1中螯合剂是edta，试剂组成成分如下：
[0058]
试剂1(r1)组成成分：
[0059][0060]
试剂2(r2)组成成分：
[0061][0062]
测试例
[0063]
1.具体操作方法
[0064]
1.1按照实施例1～2和对比例1～3的配方配制五种试剂；
[0065]
1.2抽取41例健康人的空腹血清和肝素抗凝血浆进行检测；
[0066]
1.3检测仪器：全自动生化分析仪佳能tba-120
[0067]
1.4检测参数：
[0068]
表1
[0069][0070]
1.5ck活性(u/l)＝(δa
t
/δas)*校准品活性；
[0071]
1.6分析五种试剂血浆与血清管测值偏差及反应曲线。
[0072]
血浆与血清管测值偏差＝(血浆值-血清值)/血清值
×
100％
[0073]
2结果
[0074]
2.1肝素血浆样本的反应曲线
[0075]
结果如图1和2。
[0076]
r1段只有样本和r1，不应有反应，反应曲线应为平直线。由反应曲线可知，对比例1的r1段反应曲线呈上升趋势，肝素干扰发生了非特异性反应。把r1中的edta换成dtpa，对比例2的r1段反应曲线稍有改善。r1中添加氯化钠，对比例3的r1段反应曲线改善更明显。r1中添加6g/l氯化钠，同时把edta换成dtpa，实施例1的r1段反应曲线不再异常。实施例2跟实施例1现象一致，说明r1中添加6g/l氯化钠和12g/l氯化钠都可以。对比反应曲线可知，r1中添加氯化钠或把edta替换成dtpa都可以改善r1段反应曲线异常的现象，氯化钠效果好于dtpa。r1中添加氯化钠并且把edta替换成dtpa可使r1段反应曲线不再异常。本实施例中只列举了两例肝素血浆样本反应曲线，经研究，其他肝素血浆样本与其检测结果一致，r1段反应曲线不再异常。
[0077]
2.2血清与血浆测值如下表2和表3:
[0078]
表2对比例1、2和3的血清与血浆测值
[0079]
[0080][0081][0082]
表3实施例1～2的血清与血浆测值
[0083]
[0084][0085]
注：相同序号血清样本和肝素血浆样本为同一人样本。
[0086]
由表2和表3的血浆与血清测值平均偏差可以看出，对比例2相比对比例1，平均偏差变小，说明把r1中edta换成dtpa能改善肝素干扰。对比例3相比对比例1，平均偏差变小，说明r1中添加氯化钠也可改善肝素干扰。实施例1相比对比例1，血浆与血清测值平均偏差明显变小，说明r1中添加氯化钠并且把edta替换成dtpa能有效改善肝素干扰。实施例1和实施例2结果差别不大，说明r1中氯化钠浓度6g/l和12g/l都能明显改善肝素干扰。
[0087]
2.3本发明通过在r1中添加(6-12)g/l氯化钠且把r1中edta替换成dtpa可有效改善肝素干扰，使r1段反应曲线不再异常，肝素血浆与血清测值偏差变小。
[0088]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：

1.一种肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，由试剂r1和试剂r2组成；所述试剂r1包括以下浓度的组分：缓冲液90-120mmol/l，葡萄糖4-6mmol/l，乙酸镁15-17mmol/l，n-乙酰半胱氨酸29-32mmol/l，adp 2-3mmol/l，amp4.5-6.5mmol/l，g6pdh≥3ku/l，nadp
+
2-4mmol/l，hk≥5ku/l，亚硫酸钠1.5-2.5mmol/l，dtpa1.5-2.5mmol/l，防腐剂0.5-2g/l，无机盐6-12g/l；所述试剂r2包括以下浓度的组分：缓冲液15-30mmol/l，葡萄糖45-60mmol/l，肌酸磷酸220-245mmol/l，防腐剂1-3g/l。2.根据权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、氯化锌中的至少一种。3.根据权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述r1试剂中，缓冲液为咪唑缓冲液、mes缓冲液、bis-tris缓冲液中的至少一种。4.根据权利要求3所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述r1试剂中，缓冲液为咪唑缓冲液，ph为6.5。5.根据权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述r2试剂中，缓冲液为capso、tris缓冲液、甘氨酸缓冲液中的至少一种。6.根据权利要求5所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述r2试剂中，缓冲液为capso，ph为9.0。7.根据权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述r1和r2中防腐剂为叠氮钠、proclin300中的至少一种。8.根据权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述r1包括以下浓度的组分：ph6.5的咪唑缓冲液115.7mmol/l，葡萄糖5mmol/l，乙酸镁16.2mmol/l，n-乙酰半胱氨酸30.6mmol/l，adp 2.5mmol/l，amp 5.2mmol/l，g6pdh 5ku/l，nadp
+
3.3mmol/l，hk 10ku/l，亚硫酸钠2mmol/l，dtpa2mmol/l，防腐剂1g/l，氯化钠6～12g/l。9.根据权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述r2包括以下浓度的组分：ph＝9.0的capso缓冲液20mmol/l，葡萄糖50.5mmol/l，肌酸磷酸236.8mmol/l，叠氮钠2g/l。

技术总结

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种肌酸激酶检测试剂盒。本发明试剂盒在R1中添加6-12g/L的氯化钠，同时使用DTPA替代EDTA，实验表明，该试剂盒能够有效地消除肝素血浆样本中肝素的干扰，使肝素抗凝血浆样本反应曲线不再异常，肝素抗凝样本与血清样本测值偏差变小，检测结果更加准确。检测结果更加准确。