专利名称：Cas9过表达载体及其构建方法和应用专利类型：发明专利 发明人：牛冬，汪滔，王德华，王磊，程锐，曾为俊，马翔申请号：CN201910823019.9
申请日：20190902
塑料制品加工设备载体构建公开号：CN112442513A
公开日：
20210305
专利内容由知识产权出版社提供
太阳能沼气摘要：本发明公开一种Cas9过表达载体及其构建方法和应用，Cas9过表达载体由原始载体
pX330‑U6‑Chimeric_BB‑CBh‑hSpCas9改造而成，原始载体具有gRNA骨架序列、CMV增强子和Cas9基因，所述CMV增强子的下游插入EF1a启动子以替换原始载体的chickenβ‑actin启动子；所述Cas9基因的N端及C端各插入一个核定位编码序列NLS。本发明的表达载体采用CMV增强子‑EF1a启动子杂合启动子元件，增加Cas9基因的蛋白表达能力，进一步地，同时在Cas9基因N端及C端各增加一个核定位信号编码序列(NLS)，增加Cas9的核定位能力。同时，本发明在载体中加入了荧光标记及抗性标记，使其更方便运用于载体阳性转化细胞的筛选及富集。另外，去除了原载体gRNA骨架中多余无效的序列，缩小了载体。 申请人：南京启真基因工程有限公司
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