植物提取物分离流程

植物提取物分离流程
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一、浸膏:
1.植物样品粉碎, 留样200-500g,将样品直接用氯仿浸提3次,每次7天,抽滤后将溶剂减压回收,得到氯仿部分浸膏;
2.氯仿浸提后的残渣用甲醇浸泡3次,每次7天,然后抽滤回收溶剂得到甲醇部分浸膏;
3.在浸提中,浸提次数至少3次,根据滤液的颜判断是否需要增加浸提次数,最多浸提4次。
二、粗分离:
1.氯仿部分的分离:氯仿部分视全部浸膏数量决定留取多少,一般留样5g左右,以备活性筛选,如果浸膏大于100g,留样10g左右。
2.留样后,将浸膏用丙酮溶解,以硅胶60-100目拌样,样品与硅胶的比例一般为1:1,但也不绝对,要以样品完全被硅胶吸附,但又不浪费为原则;
3.第一次柱层析使用200-300目的硅胶,硅胶用量与样品比例为30:1,如果样品量很大,则选择10:1左右,采用干法装填柱子
4.装填好硅胶柱后,采用石油醚洗脱,一般洗脱3-5个柱体积(100g硅胶就洗脱300-500ml),但有时因为样品超载也需要经验判断是否加极性。
5.当需要增加极性时,首先选用100:1的石油醚丙酮,依照4中的操作进行,依次改变极性为80:1;60:1;40:1;20:1:10:1;8:2:7:3当溶剂比例达到8:2的时候,就需要TLC检测判断是否再进行7:3的比例了。一般到达10:1的时候,氯仿部分基本上就可以结束洗脱;
6.甲醇部分也同氯仿部分,需要在拌样前留取样品,然后拌样上200-300目的硅胶柱(干法装填)作同氯仿部分,当完成3-5个柱子体积的洗脱后,根据回收溶剂后回收瓶中提取物的多少判断改变极性,以100:1氯仿甲醇开始,逐步过度到80:1;60:1;40:1;20:1;10:1;8:2;7:3;当达到7:3时,需要TLC检测是否还有样品点;
三、精分离
1.氯仿部分各个回收段用TLC检测判断是否合并,并将合并部分用不同系统的溶剂进行TLC检测选择柱子洗脱所需要的比例,一般是石油醚+乙酸乙酯系统;石油醚+丙酮系统;系统选择好以后,用60-100目硅胶拌样(比例依旧是1:1,尽可能少用拌样硅胶),将拌样样品用湿法上硅胶H常压柱子,装填时,硅胶H溶解在石油醚中,并至少静置12小时。
2.用选择的系统洗脱,每次收集一个柱体积馏分,回收后转移至试管中,经验上,一般洗脱5个柱体积后就需要改变溶剂的极性,极性的改变也是逐步加大。探空气球
3.2中柱子洗脱结束后,将回收在试管中的各个样品TLC检测,以荧光、碘显、硫酸显判断是否合并为同一馏分,一般荧光和碘显是辅助检测,以硫酸显为根本判断。
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4.合并后的馏分TLC检测选择继续分离。此次分离需要用减压柱子,填料依旧是硅胶H,填料与样品比例一般是50:1,样品在TLC中以展开3-4次,rf大小在0.2-0.3之间最合适,一般只需要洗脱30柱子体积就可以结束分离。
接地线夹5.减压柱层析中已经接近为单体化合物,有时也可以得到纯品。将减压的各个馏分TLC检测是否可以进行合并,并将合并的部分上Saphdex-LH20,一般用乙酸乙酯、丙酮进行装填凝胶柱,并以装填溶剂进行洗脱,凝胶柱都是以湿法上样。
6.此时,已经在得到纯品化合物。
7.甲醇部分操作基本与氯仿部分相同,只是洗脱系统的选择是氯仿+丙酮;氯仿+甲醇;或者氯仿+甲醇+水;凝胶的装填与洗脱也以甲醇或者氯仿+甲醇为主。
四、其他分离方法:
溶剂回收
1.制备薄层
2.RP-18柱子
3.MCI
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本文发布于:2024-09-22 23:20:30,感谢您对本站的认可!

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