病毒学实验

实验病毒细胞的感染
目的:病毒对细胞的感染具有高度的特异性,通过该实验掌握病毒感染细胞的实验操作,并进一步理解病毒对宿主细胞的选择性。
材料:杆状病毒Sf9细胞
器材:25或50mL细胞培养瓶,28℃恒温培养箱,培养基,无菌移液管,电动移液器
步骤:
1、感染前12h传代接种Sf9细胞,28℃培养至汇聚度约70%;
元数据管理平台2、弃细胞培养液,并以1×PBS洗涤2-3次,吸干残夜;
3、加入适量病毒悬液,并补充适量无血清培养基,28℃孵育2h,更换适量新鲜培养基;同时设立空白对照;
4、28℃培养24-48h,对照观察细胞病变。
实验二病毒的扩增与收集
目的:病毒属于严格细胞内寄生生物,故只能在其敏感宿主细胞内进行有效增殖。通过该实验掌握病毒的扩增及收集、储存方法。材料:杆状病毒Sf9细胞
器材:25或50mL细胞培养瓶,28℃恒温培养箱,培养基,无菌移液管,电动移液器、低温高速离心机、离心管,滤器
步骤:
1、感染前12h传代接种Sf9细胞,28℃培养至汇聚度约70%;
2、弃细胞培养液,并以1×PBS洗涤2-3次,吸干残夜;
3、加入适量病毒悬液,并补充适量无血清培养基,28℃孵育2h,更换适量新鲜培养基;
4、28℃培养24-36h,观察细胞裂解情况;
5、吹吸细胞,并转移细胞裂解物至无菌冰预冷离心管;
6、4℃,12000rpm,10min,取上清;
7、滤器过滤上清,取滤液,分装于无菌冻存管,避光保存于4℃或-20℃或-80℃.
实验三病毒的敏感性测定
目的:不同类型的病毒对不同理化因子的敏感性存在着显著差异。本实验拟检测杆状病毒对高温及有机溶剂的敏感性,以加深对病毒理化因子敏感性差异的理解。
sis压片
材料:杆状病毒Sf9细胞乙醚氯仿
器材:25或50mL细胞培养瓶,28℃恒温培养箱,培养基,无菌移液管,电动移液器,水浴锅
步骤:
1、氯仿预处理:于一定量病毒悬液中加入终浓度为5%的氯仿,混匀,4℃静置1h,2000rpm,10min,取上清备用;同样,取等量病毒不加氯仿于4℃同样处理备用(空白对照);
2、乙醚预处理:于一定量病毒悬液中加入终浓度为20%的乙醚,
萎凋机
混匀,4℃静置1h,2000rpm,10min,取下层备用;同样,取等量病毒不加乙醚于4℃同样处理备用(空白对照);微型核电池
3、高温预处理:取一定量病毒悬液于55℃处理30min后备用;同样,取等量病毒于4℃处理30min备用(空白对照);
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4、分别取适量经氯仿、乙醚、高温处理及未处理的病毒悬液感染Sf9细胞;
5、28℃培养24-48h,对照观察细胞感染效率。
实验四病毒的效价测定--血凝实验
目的:某些病毒如流感病毒可以结合红血细胞而使得红血细胞凝集,因此而判断病毒的有无和进行粗略定量。通过该实验以掌握血凝实验的操作技术,并理解及应用原理。
材料:仙台病毒公鸡红血细胞(新鲜)生理盐水
器材:96孔板培养箱微量取样器
步骤:
1、于96孔板中选择一排孔,自第1孔至第12孔各加25uL生理盐水;
2、在第1孔中再加入25uL仙台病毒原液,混匀,然后吸25uL 至第2孔,混匀,然后吸25uL至第3孔,混匀;依次倍比稀释,至第11孔,吸弃25uL;于是得到病毒的稀释比例依次为1:2,1:4,1:8……。最后的第12孔为对照。
3、于第1至第12孔中依次再补加25uL生理盐水,混匀;
4、于第1至第12孔中依次加入25uL1%鸡红血细胞悬液,充分混匀;
5、25-37℃静置30-60min,观察红血细胞的凝集情况;
铁氟龙押出机6、结果判定:以100%凝集的病毒最高稀释度为该病毒的血凝价,即一个血凝单位。不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。

本文发布于:2024-09-21 12:33:41,感谢您对本站的认可!

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