发酵液中溶磷检测规程
1. 规程内容
1.1 原理磷酸或磷酸盐的酸性溶液中与钼酸铵作用生成黄磷钼酸铵，再用适当的还原剂还 原成钼兰进行比。
1.2 试剂与仪器
容量瓶:1000ml 100ml 干手器
移液管:5ml 1ml
吸量管:25ml 5ml
风光光度计
钼酸铵溶液配制:称钼酸铵6g溶于60ml水中(若混过滤)倒入90mlCP浓硫酸与
60ml水，冷却摇匀后，贮存于棕试剂瓶中备用。
米土尔(硫酸对甲氨基酚)试剂:称取米土尔0.2g与无水亚硫酸钠1g溶于200ml
蒸馏水，待完全溶解后，再加入焦性亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)40g(或酸性亚硫酸钠 43.8g)待完全溶解后过滤，滤液贮存于棕试剂瓶中避光冷藏(有效期一个月左右)。
10%三氯醋酸:取50g三氯醋酸倒入500ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。 1.3 磷标准曲线绘制: 计量罐精确称取于105?干燥至恒重的磷酸二氢钾 0.4394g，用少量水溶解于1000ml容量
瓶中，加入0.05mol/L硫酸20ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀则每毫升含磷100r(此为二钼酸铵
储备液)，再精确吸取5ml100r/ml溶液于100ml容量瓶中，加0.05mol/L硫酸20ml，用
蒸馏水稀释至刻度摇匀，则此溶液中每毫升含磷5r，用刻度吸管分别吸取5r/ml的溶液
1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5ml于25ml刻度试管中加入钼酸铵溶液及米土尔溶液各1ml，
新型高效台车式退火炉加蒸馏水至10ml，摇匀后再沸水中煮沸30min，取出冷却至室温，准确以蒸馏水补足至
座便器结构10ml摇匀，在650nm波长处比，另用试剂作空白对照，以浓度为纵坐标，光密度为
横坐标做一曲线，列表备用。
1.4 测定方法:
吸取发酵滤液2.5ml于50ml容量瓶中，加入10%三氯醋酸溶液5ml，放置片刻，
在沸水中加热10min左右，使蛋白凝固，冷却后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀后过滤，
吸取滤液1ml于25ml刻度管中，加入钼酸铵溶液及米土尔溶液各1ml加水至10ml摇
匀后，在沸水浴中煮沸30min，取出冷却至室温，准确以蒸馏水补足至10ml摇匀，在
650nm波长处比，用试剂为空白，查表乘以稀释倍数(20倍)。
空白:8ml水加1ml钼酸铵和1ml米土尔。
1.5 计算:
吸样1ml，即为r/ml*20(稀释倍数)
1.6 注意事项
1.6.1 样品中的磷必须是磷酸形式存在，不能使其它价态，也不能是聚合 状态，因此配制标
准溶液时可加入0.05mol/L硫酸。
3-1.6.2 要使一定量的PO转变为12钼磷酸，必须有过量的钼酸铵存在(应为在理论量的3.543-倍)，如钼酸铵不足，过量的PO会和已生成的12钼磷酸反应，生成无的过滤性杂4
质络合物。
1.6.3 12钼磷酸的生成与加入到溶液中酸量有关，酸不足不能定量生成，如加入酸量过多，
12钼磷酸又分解，因此显与ph值关系极大，所以加入试剂量要严格控制。 1.6.4 磷试剂更换，要做曲线对照，所有仪器均要清洗干净。
1.6.5 三氯醋酸沉淀蛋白质溶液要清。 1.6.6 米土尔为硫酸对甲氨基酚。
过店客流统计分析
1.6.7 加热过程中，水浴温度均应,98?。 1.6.8 所用比器皿预先应用蒸馏水校正。 1.7 测定允许误差:
,2%
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