步骤如下：
（一）固定与修块
艾叶油胶丸
取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面
刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。
1．75%乙醇 50分钟
2．85%乙醇 50分钟
3．95%乙醇 （I） 30分钟
4．95%乙醇 （II） 30分钟
5．100%乙醇（I） 30分钟
6．100%乙醇（II） 30分钟
7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积） 20分钟
8．二甲苯（I） 20分钟
9．二甲苯（II） 10分钟（可依据透明效果而定）
若脱水不好，二甲苯溶液颜会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织
块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组
织块干燥。全过程约需要5h。
（三）浸蜡、包埋与修蜡块
1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。
2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺
序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和
染条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板电火花打点计时器
上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部
要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。
3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘
之间的距离不得小于2mm。
（四）切片
在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 简易淋浴器
匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度
以带黄颜的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，
放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，
进行下面的实验。
（五）脱蜡、染与脱水
倾斜玻片架， 将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干， 减轻对其他试剂浓
度的影响。全过程约需要60分钟。
1．脱蜡
（1）二甲苯（I） 15分钟
（2）二甲苯（II） 15分钟
（3）100%乙醇 2分钟
首饰焊接（4）95%乙醇（I） 1分钟
（5）95%乙醇（II） 1分钟
（6）蒸馏水浸洗 1分钟
2．染
（7）苏木精 30秒钟
（8）自来水冲洗60秒。（显微镜下观察效果）
（9）伊红（着即可） 10秒钟
（10）蒸馏水浸洗 1分钟
3．脱水
（10）95%乙醇（I） 1分钟
（11）95%乙醇（II） 1分钟
（12）100%乙醇 2分钟
（13）二甲苯（I） 2分钟
（14）二甲苯（II） 3-5分钟
（六）封片
将载玻片取下，滴加1~2滴中性树胶，用镊子夹住盖玻片的一角，盖上盖玻盖形螺母
片，之后倾斜载玻片，多余的中性树胶用筒纸吸干，室温下保存。
2．简要版：肝组织HE染切片制作过程
(1)取材与固定：取大鼠肝右叶固定部位组织块，立即投入10％甲醛中，固
定48h。
(2)脱水透明：组织修片，梯度酒精脱水，后二甲苯中透明。动物组织切
成0．2-0．5cm的薄片，依次经过70％酒精2h--*80％酒精2h一95％酒精(I、II各2h)
和无水酒精(I、II各1h)脱水，二甲苯透明(I、II各lh)，以置换组织内的酒
精溶液。
(3)浸蜡包埋：将脱水透明好的组织块置入融化的石蜡内，使石蜡浸入组
织并置换出其中的二甲苯。将浸蜡的组织置于包埋器内，并滴入液化蜡进行组织
包埋，后置于冰面上待其凝固。
(4)切片与贴片：将蜡块固定于切片机上，切成5 u m厚的切片，在45"C
铸造脱模剂
的水面上展平后铺在涂有防脱剂的载玻片上，置于65℃烤箱烤3h。
(5)脱蜡：切片置入二甲苯I、Ⅱ各15分钟，不同浓度酒精(100％5min
一95％5s一80％5s一70％5s)置换出其中的二甲苯，最后用PBS液洗净。
(6)HE染：将石蜡切片放入苏木精中染5min一蒸馏水洗净一1％稀盐酸
分化一流水中充分冲洗返蓝，约20min；伊红染5min，流水冲洗干净。
(7)脱水、透明：染好的切片经梯度酒精脱水(70％、80％、95％、100％各5min)，
二甲苯透明(I、II各5min)。
(8)封固：在载玻片上加一滴中性树胶，然后覆盖一片清洁的盖玻片封片。
光学显微镜下观察组织病理变化，以i00倍放大率观察切片。【下载本文档，可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和关注，我将一如既往为您服务】
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