一种霍山石斛中药组合物及其制备方法与流程

1.本发明涉及石斛属配制品技术领域，尤其涉及一种霍山石斛中药组合物及其制备方法。

背景技术：

2.霍山石斛为兰科石斛属多年生草本植物，主产于大别山区安徽省霍山县，是最为名贵的中药石斛，自古以来因其品质上乘而备受历代医家推崇。霍山石斛含有石斛碱、石斛胺、石斛次碱等生物碱及黏液质，对酶活性异常变化有抑制或纠正作用，具有增强机体免疫功能及延缓衰老的功效。随着霍山石斛及其衍生产品的开发应用，霍山石斛在中药制品中占有重要地位。跟众多中药材一样，霍山石斛的有效成分复杂，需经过多次提取方能将各类水溶性及脂溶性不一的成分提取出来；为了让提取物发挥更好的释放效果，将其与各类辅料混合制成不同剂型是常见的技术手段。
3.中药具有药效平缓、既治标又治本的特点，主要以调节人体机能为主，因此中药提取物需要避免初始的过度释放。中国专利cn101670109a公开了一种掺杂有药物的有机干凝胶药物缓释载体材料及其制备方法，该发明通过氨基酸类衍生物凝胶剂和有机溶剂混合形成有机凝胶后，药物分子掺杂在有机凝胶中，再将有机溶剂经真空干燥除去得到有机干凝胶，制备成具有药物缓释功能的材料，该材料可抑制药物分子的初始过度释放，在较长的时间内缓慢释放。该发明的材料通过物理手段对药物进行包覆，在实际应用中，凝胶剂的比易与水分子结合发生溶胀，使得有效负载空间变小，释放通路部分堵塞，可能出现对药物的负载性能及释放性能降低的技术问题。
4.中国专利cn109908366a提供了一种改性壳聚糖载体与药物的包合物及其制备方法，将乳糖胆酸改性壳聚糖、半乳糖胆酸改性壳聚糖对淫羊藿苷、紫杉醇、索拉非尼进行包合，壳聚糖药物包合物具有一定的水溶性和稳定性。相比于有机凝胶材料，壳聚糖的结构较硬，不易发生溶胀；在扩散或壳聚糖降解等后期作用的驱动下，活性物质可从壳聚糖溶液中缓慢释放。该专利虽然解决了有机凝胶材料存在的技术问题，然而依然存在壳聚糖比表面积不高导致的吸附不理想的问题；此外改性壳聚糖载体与脂溶物成分的结合性有待优化，仅通过物理结合的方式进行包覆难以提高脂溶物成分的负载效果。
5.基于现有技术存在的上述缺陷可以看出，霍山石斛及其衍生的中药组合物具有良好的效果，提供一种具有优异负载效果的载体对拓展霍山石斛的应用而言具有重要的意义。

技术实现要素：

6.有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的问题是提供一种增强人体免疫力、滋阴润肺及祛风去湿的霍山石斛中药组合物及其制备方法。
7.本发明提供了一种霍山石斛中药组合物的制备方法，包括下述步骤，以重量份计：
8.s1、称取霍山石斛8～12份、土茯苓1.5～3份、赤芍2～4份、白术1～2.5份、金银花1
～2份、枸杞子1～3份、杜仲2～3份、泽泻2.5～4份，清洗去除上述原料药表面灰尘杂质，常温干燥，得到除杂的原料药，除杂的原料药经混合、粉碎、过筛，得到粉末状原料混合物，备用；
9.s2、采用中药提取机，分别以水及无水乙醇为提取剂，依次对上述原料混合物进行水提和醇提；回收提取剂后将提取到的水提产物及醇提产物合并，得到中药提取物，备用；
10.s3、另取4～6份所述中药提取物，与2～3份糊精、1～2份共聚维酮、0.1～0.15份硬脂酸镁、0.5～1.5份羟丙基纤维素、0.25～0.75份崩解剂，0.25～0.5份稠环亲脂性载体混合，采用成型设备成型，随后经灭菌、封装，得到所述霍山石斛中药组合物。
11.优选的，步骤s1中所述粉末状原料混合物的细度为60～120目。
12.优选的，步骤s2中所述水提的温度为60～85℃，原料与提取剂质量比为1：2～3，提取时间1～4h；所述醇提的温度为50～70℃，原料与提取剂质量比为1：2～3，提取时间1～3h。
13.优选的，步骤s3中所述崩解剂为微晶纤维素、磷酸氢钙中任意一种或两种的组合物。
14.优选的，步骤s3中所述成型为制成颗粒剂、片剂或丸剂中的任意一种。
15.本发明以均苯三甲酸经氯化得到的氯化产物与非那烯发生反应并相互交联，形成了一种多孔硬质的有机碳框架结构；随后将1,2-环氧氯丁烷与三氟乙醇反应制备的取代产物，通过癸二胺为桥接链连接至该有机碳框架结构，在其表面引入了具有长链的三氟甲基。
16.发明人以非那烯为起始单体来构建多孔的交联聚合物，非那烯作为一种具有扩展共轭结构的芳香分子，由于芳香单体的交联，交联产物的基本框架是质硬且高度疏水的，不会与水分子结合发生溶胀来堵塞药物成分的释放通路。通过癸二胺为桥接链引入三氟甲基，三氟甲基具有较大空间位阻、良好的亲脂性以及稳定性，增强了有机碳框架结构对亲脂物成分的结合和负载；而癸二胺的长链结构能够防止三氟甲基过于贴近有机碳框架结构表面，让其在发挥分散作用来避免载体聚集的同时也能防止堵塞药物释放通道。
17.本发明通过与类似芳香基团的化学共轭以及π-π叠加来实现与水溶物成分的负载及结合，由于微孔的高比表面积和约束作用，使得药物成分得以容纳，与长链结构结合可以阻碍药物的过度释放，达到高负载及缓释的效果。
18.优选的，所述稠环亲脂性载体的制备方法如下，以重量份计：
19.m1、无氧条件下将5.3～8份1,2-环氧氯丁烷与5～7.5份三氟乙醇混合均匀，提高二者混合物的温度以进行取代反应；反应结束后向粗产物中添加1～2mol/l的氢氧化钠水溶液以调节粗产物的ph至中性，随后经去离子水洗、干燥，得到纯化取代产物，备用；
20.m2、取2.1～5.5份均苯三甲酸与50～100份氯化亚砜混合至均匀，并向二者的混合物中加入0.15～0.45份n,n-二甲基甲酰胺来活化反应物，得到氯化反应液；升高氯化反应液的温度以开始氯化反应，反应结束后，产物经减压蒸馏去除剩余的氯化亚砜，得到氯化产物，备用；
21.m3、将3.3～5份非那烯溶于75～150份二氯甲烷，继续向该溶液中加入4.5～6.5份所述氯化产物，混合均匀后加入2.4～4份氯化铁作为催化剂，升温并进行交联反应；反应结束后，过滤得滤饼，滤饼经无水乙醇洗涤、干燥，得到纯化交联产物，备用；
22.m4、无氧条件下，另取2.5～4份所述纯化交联产物与1.7～3.4份癸二胺、50～100
份甲醇混合均匀；升温并进行羰氨反应，反应结束后经减压蒸馏去除甲醇，剩余的固体产物经去离子水洗、干燥，得到纯化羰氨反应产物，备用；
23.m5、将3.2～5份所述纯化羰氨反应产物与50～100份水混合，随后加入0.9～1.5份所述纯化取代产物，在无氧条件下进行加成反应；反应结束后产物经过滤得滤饼，经去离子水洗、干燥，得到所述稠环亲脂性载体。
24.优选的，步骤m1中所述取代反应的温度为50～65℃，反应时间为4～12h。
25.优选的，步骤m2中所述氯化反应的温度为75～90℃，反应时间为18～36h。
26.优选的，步骤m3中所述交联反应分为两阶段，第一阶段在45～60℃反应2～4h；第二阶段在75～90℃反应4～8h。
27.优选的，步骤m4中所述羰氨反应的温度为55～70℃，反应时间为18～36h。
28.优选的，步骤m5中所述加成反应的温度为10～30℃，反应时间为3～9h。
29.在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以任意组合，即得本发明各较佳实施例。
30.本发明配方中部分原料的介绍及作用如下：
31.霍山石斛：别名米斛、霍山米斛、霍石斛，兰科植物dendrobium huoshanense.的新鲜或干燥茎。性微寒，味甘。归胃经、肾经。益胃生津、滋阴清热。属补虚药下属分类的补阴药。
32.土茯苓：别名禹余粮、白余粮、饭团根、红土苓、土萆薜、硬饭头、冷饭团，百合科植物光叶菝葜smilax glabra roxb.的根茎。性平，味甘、淡。归胃经、肝经。解毒，除湿，通利关节。属清热药下分类的清热燥湿药。
33.赤芍：别名赤芍药，毛茛科植物川赤芍paeonia veitchii lynch.的根。性微寒，味苦。归肝经、脾经。清热凉血、散瘀止痛。属清热药下属分类的清热凉血药。
34.白术：别名于术、冬术、浙术、山蓟、山精，菊科植物白术atractylodes macrocephala koidz.的根茎。性温，味甘、苦。归脾经、胃经。健脾、益气、燥湿利水、止汗、安胎。属补虚药下属分类的补气药。
35.金银花：别名忍冬花、双花、二花、银花、鹭鸶花、金花、双苞花、金藤花，忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb.的花蕾。性寒，味甘。归肺经、心经、胃经。清热解毒、凉散风热。属清热药下属分类的清热解毒药。
36.枸杞子：别名西枸杞、中宁枸杞、山枸杞、杞红实、甜菜子，茄科植物宁夏枸杞lycium barbarum l.的成熟果实。性平，味甘。归肝经、肾经。滋补肝肾、益精明目。属补虚药下属分类的补阴药。
37.杜仲：别名川杜仲、丝连皮、扯丝皮、思仙、思仲、玉丝皮、丝棉皮，杜仲科植物杜仲eucommia ulmoides oliv.的树皮。性温，味甘。归肝经、肾经。补肝肾、强筋骨、安胎。属补虚药下属分类的补阳药。
38.泽泻：别名水泽、如意菜、水白菜、水泻、芒芋、泽芝、天鹅蛋，泽泻科植物泽泻alisma plantago-aquatica l.var.orientalis(sam.)juzep.的块茎。性寒，味甘、淡。归肾经、膀胱经。利小便、清湿热。属利水渗湿药下分类的利尿通淋药。
39.本发明的有益效果：
40.与现有技术相比，本发明以霍山石斛、土茯苓、赤芍、白术、金银花、枸杞子、杜仲、
泽泻为原料制备而成，配伍科学，具有良好的增强免疫效果；以霍山石斛为主药，其余成分为臣药，主臣合用，滋阴潜阳，益阴和阳之意，诸药合用，标本兼治，而以治标为主。
41.相比于现有技术，本发明在霍山石斛中药组合物中使用了稠环亲脂性载体，该载体的主体为由非那烯为起始单体构建而成多孔的交联聚合物，基本框架质硬且高度疏水，不会与水分子结合发生溶胀来堵塞药物成分的释放通路。
42.与现有技术相比，稠环亲脂性载体通过与类似芳香基团的化学共轭以及π-π叠加来实现与水溶物成分的负载及结合，由于微孔和长链结构起到的约束作用，可以阻碍药物的过度释放，进而对药物起到缓释的作用。
具体实施方式
43.下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
44.本发明对照例及实施例中部分原材料参数如下：
45.霍山石斛，全干条状，产地：安徽省霍山县；
46.土茯苓，全干片状，产地：广西省柳州市；
47.赤芍，全干片状，产地：陕西省宝鸡市；
48.白术，全干片状，产地：安徽省六安市；
49.金银花，全干条状，产地：山东省淄博市；
50.枸杞子，全干粒状，产地：宁夏中宁县；
51.杜仲，全干片状，产地：湖北省麻城市；
52.泽泻，全干片状，产地：福建省福州市；
53.非那烯，cas号：203-80-5，上海倍卓生物科技有限公司提供；
54.药用级共聚维酮，型号：va64，cas号：25086-89-9，陕西唐尧生物科技有限公司提供；
55.药用级麦芽糊精，型号：cp2015，cas号：9050-36-6，山西锦洋药用辅料有限公司提供；
56.药用级低取代羟丙基纤维素，cas号：9004-65-3，西安晋湘药用辅料有限公司提供；
57.药用级微晶纤维素，cas号：9004-34-6，西安晋湘药用辅料有限公司提供；
58.药用级壳聚糖，cas号：9012-76-4，陕西唐尧生物科技有限公司提供。
59.实施例1
60.一种霍山石斛中药组合物，采用如下方法制备而成：
61.s1、称取霍山石斛8kg、土茯苓1.5kg、赤芍2kg、白术1kg、金银花1kg、泽泻2.5kg，清洗去除上述原料药表面灰尘杂质，常温干燥，得到除杂的原料药，除杂的原料药经混合、粉碎、过筛，得到细度为80目的粉末状原料混合物，备用；
62.s2、采用中药提取机，分别以水及无水乙醇为提取剂，依次对上述原料混合物进行水提和醇提；回收提取剂后将提取到的水提产物及醇提产物合并，得到中药提取物，备用；
63.s3、另取4kg所述中药提取物，与2kg麦芽糊精、1kg共聚维酮、0.1kg硬脂酸镁、
0.5kg羟丙基纤维素、0.25kg微晶纤维素混合，采用成型设备制成0.5g/片的片剂，随后经灭菌、封装，得到所述霍山石斛中药组合物。
64.步骤s2中所述水提的温度为85℃，原料与提取剂质量比为1：3，提取时间3h；所述醇提的温度为60℃，原料与提取剂质量比为1：2.5，提取时间1.5h。
65.实施例2
66.一种霍山石斛中药组合物，采用如下方法制备而成：
67.s1、称取霍山石斛8kg、土茯苓1.5kg、赤芍2kg、枸杞子1kg、杜仲2kg、泽泻2.5kg，清洗去除上述原料药表面灰尘杂质，常温干燥，得到除杂的原料药，除杂的原料药经混合、粉碎、过筛，得到细度为80目的粉末状原料混合物，备用；
68.s2、采用中药提取机，分别以水及无水乙醇为提取剂，依次对上述原料混合物进行水提和醇提；回收提取剂后将提取到的水提产物及醇提产物合并，得到中药提取物，备用；
69.s3、另取4kg所述中药提取物，与2kg麦芽糊精、1kg共聚维酮、0.1kg硬脂酸镁、0.5kg羟丙基纤维素、0.25kg微晶纤维素混合，采用成型设备制成0.5g/片的片剂，随后经灭菌、封装，得到所述霍山石斛中药组合物。
70.步骤s2中所述水提的温度为85℃，原料与提取剂质量比为1：3，提取时间3h；所述醇提的温度为60℃，原料与提取剂质量比为1：2.5，提取时间1.5h。
71.实施例3
72.一种霍山石斛中药组合物，采用如下方法制备而成：
73.s1、称取霍山石斛8kg、土茯苓1.5kg、赤芍2kg、白术1kg、金银花1kg、枸杞子1kg、杜仲2kg、泽泻2.5kg，清洗去除上述原料药表面灰尘杂质，常温干燥，得到除杂的原料药，除杂的原料药经混合、粉碎、过筛，得到细度为80目的粉末状原料混合物，备用；
74.s2、采用中药提取机，分别以水及无水乙醇为提取剂，依次对上述原料混合物进行水提和醇提；回收提取剂后将提取到的水提产物及醇提产物合并，得到中药提取物，备用；
75.s3、另取4kg所述中药提取物，与2kg麦芽糊精、1kg共聚维酮、0.1kg硬脂酸镁、0.5kg羟丙基纤维素、0.25kg微晶纤维素混合，采用成型设备制成0.5g/片的片剂，随后经灭菌、封装，得到所述霍山石斛中药组合物。
76.步骤s2中所述水提的温度为85℃，原料与提取剂质量比为1：3，提取时间3h；所述醇提的温度为60℃，原料与提取剂质量比为1：2.5，提取时间1.5h。
77.实施例4
78.一种霍山石斛中药组合物，采用如下方法制备而成：
79.s1、称取霍山石斛8kg、土茯苓1.5kg、赤芍2kg、白术1kg、金银花1kg、枸杞子1kg、杜仲2kg、泽泻2.5kg，清洗去除上述原料药表面灰尘杂质，常温干燥，得到除杂的原料药，除杂的原料药经混合、粉碎、过筛，得到细度为80目的粉末状原料混合物，备用；
80.s2、采用中药提取机，分别以水及无水乙醇为提取剂，依次对上述原料混合物进行水提和醇提；回收提取剂后将提取到的水提产物及醇提产物合并，得到中药提取物，备用；
81.s3、另取4kg所述中药提取物，与2kg麦芽糊精、1kg共聚维酮、0.1kg硬脂酸镁、0.5kg羟丙基纤维素、0.25kg微晶纤维素，0.25kg稠环载体混合，采用成型设备制成0.5g/片的片剂，随后经灭菌、封装，得到所述霍山石斛中药组合物。
82.步骤s2中所述水提的温度为85℃，原料与提取剂质量比为1：3，提取时间3h；所述
醇提的温度为60℃，原料与提取剂质量比为1：2.5，提取时间1.5h。
83.所述稠环载体的制备方法如下：
84.m1、取2.1kg均苯三甲酸与50kg氯化亚砜混合至均匀，并向二者的混合物中加入0.15kg n,n-二甲基甲酰胺来活化反应物，得到氯化反应液；升高氯化反应液的温度以开始氯化反应，反应结束后，产物经减压蒸馏去除剩余的氯化亚砜，得到氯化产物，备用；
85.m2、将3.3kg非那烯溶于75kg二氯甲烷，继续向该溶液中加入4.5kg所述氯化产物，混合均匀后加入2.4kg氯化铁作为催化剂，升温并进行交联反应；反应结束后，过滤得滤饼，滤饼经无水乙醇洗涤、干燥，得到纯化交联产物，备用；
86.m3、无氧条件下，另取2.5kg所述纯化交联产物与1.7kg癸二胺、50kg甲醇混合均匀；升温并进行羰氨反应，反应结束后经减压蒸馏去除甲醇，剩余的固体产物经去离子水洗、干燥，得到所述稠环亲脂性载体。
87.步骤m1中所述氯化反应的温度为85℃，反应时间为24h。
88.步骤m2中所述交联反应分为两阶段，第一阶段在50℃反应3h；第二阶段在85℃反应6h。
89.步骤m3中所述所述羰氨反应的温度为65℃，反应时间为24h。
90.实施例5
91.一种霍山石斛中药组合物，采用如下方法制备而成：
92.s1、称取霍山石斛8kg、土茯苓1.5kg、赤芍2kg、白术1kg、金银花1kg、枸杞子1kg、杜仲2kg、泽泻2.5kg，清洗去除上述原料药表面灰尘杂质，常温干燥，得到除杂的原料药，除杂的原料药经混合、粉碎、过筛，得到细度为80目的粉末状原料混合物，备用；
93.s2、采用中药提取机，分别以水及无水乙醇为提取剂，依次对上述原料混合物进行水提和醇提；回收提取剂后将提取到的水提产物及醇提产物合并，得到中药提取物，备用；
94.s3、另取4kg所述中药提取物，与2kg麦芽糊精、1kg共聚维酮、0.1kg硬脂酸镁、0.5kg羟丙基纤维素、0.25kg微晶纤维素，0.25kg稠环亲脂性载体混合，采用成型设备制成0.5g/片的片剂，随后经灭菌、封装，得到所述霍山石斛中药组合物。
95.步骤s2中所述水提的温度为85℃，原料与提取剂质量比为1：3，提取时间3h；所述醇提的温度为60℃，原料与提取剂质量比为1：2.5，提取时间1.5h。
96.所述稠环亲脂性载体的制备方法如下：
97.m1、无氧条件下将5.3kg 1,2-环氧氯丁烷与5kg三氟乙醇混合均匀，提高二者混合物的温度以进行取代反应；反应结束后向粗产物中添加1mol/l的氢氧化钠水溶液以调节粗产物的ph至中性，随后经去离子水洗、干燥，得到纯化取代产物，备用；
98.m2、取2.1kg均苯三甲酸与50kg氯化亚砜混合至均匀，并向二者的混合物中加入0.15kg n,n-二甲基甲酰胺来活化反应物，得到氯化反应液；升高氯化反应液的温度以开始氯化反应，反应结束后，产物经减压蒸馏去除剩余的氯化亚砜，得到氯化产物，备用；
99.m3、将3.3kg非那烯溶于75kg二氯甲烷，继续向该溶液中加入4.5kg所述氯化产物，混合均匀后加入2.4kg氯化铁作为催化剂，升温并进行交联反应；反应结束后，过滤得滤饼，滤饼经无水乙醇洗涤、干燥，得到纯化交联产物，备用；
100.m4、无氧条件下，另取2.5kg所述纯化交联产物与1.7kg癸二胺、50kg甲醇混合均匀；升温并进行羰氨反应，反应结束后经减压蒸馏去除甲醇，剩余的固体产物经去离子水
洗、干燥，得到纯化羰氨反应产物，备用；
101.m5、将3.2kg所述纯化羰氨反应产物与50kg水混合，随后加入0.9kg所述纯化取代产物，在无氧条件下进行加成反应；反应结束后产物经过滤得滤饼，经去离子水洗、干燥，得到所述稠环亲脂性载体。
102.步骤m1中所述取代反应的温度为60℃，反应时间为8h。
103.步骤m2中所述氯化反应的温度为85℃，反应时间为24h。
104.步骤m3中所述交联反应分为两阶段，第一阶段在50℃反应3h；第二阶段在85℃反应6h。
105.步骤m4中所述所述羰氨反应的温度为65℃，反应时间为24h。
106.步骤m5中所述加成反应的温度为25℃，反应时间为6h。
107.对照例1
108.一种霍山石斛中药组合物，采用如下方法制备而成：
109.s1、称取霍山石斛8kg、土茯苓1.5kg、赤芍2kg、白术1kg、金银花1kg、枸杞子1kg、杜仲2kg、泽泻2.5kg，清洗去除上述原料药表面灰尘杂质，常温干燥，得到除杂的原料药，除杂的原料药经混合、粉碎、过筛，得到细度为80目的粉末状原料混合物，备用；
110.s2、采用中药提取机，分别以水及无水乙醇为提取剂，依次对上述原料混合物进行水提和醇提；回收提取剂后将提取到的水提产物及醇提产物合并，得到中药提取物，备用；
111.s3、另取4kg所述中药提取物，与2kg麦芽糊精、1kg共聚维酮、0.1kg硬脂酸镁、0.5kg羟丙基纤维素、0.25kg微晶纤维素，0.25kg壳聚糖混合，采用成型设备制成0.5g/片的片剂，随后经灭菌、封装，得到所述霍山石斛中药组合物。
112.步骤s2中所述水提的温度为85℃，原料与提取剂质量比为1：3，提取时间3h；所述醇提的温度为60℃，原料与提取剂质量比为1：2.5，提取时间1.5h。
113.测试例1
114.霍山石斛中药组合物提升免疫力的测试通过动物实验以表征，测试对象动物为小鼠。测试参考文献(周霞，张尧，张焕新，等.金钗石斛与绿茶复方对小鼠免疫力的影响[j].湖南生态科学学报，2021，8(2)：47-53.doi：10.3969/j.issn.2095-7300.2021.02.007.)中的具体方法进行。实验对象为雄性c57bl/6j小鼠，spf级，8周龄，体重18～22g/只，c57bl/6j小鼠由杰克森艾特生物科技(北京)有限公司。饲养环境条件为室温20～26℃、相对湿度40～70％、光照/黑暗周期12h。实验组分别取各实施例及对照例的霍山石斛中药组合物15.0g加去离子水200ml混合，小鼠灌胃体积为10ml/kg bw。通过灌胃对实验组动物进行给药，体积为0.1ml/10g bw，对照组给予等体积的生理盐水，每日一次，持续30d，每组小鼠为10只。根据文献中的记载，采用cona诱导小鼠淋巴细胞转化实验(mtt法)来测试霍山石斛中药组合物对小鼠t淋巴细胞增殖能力的影响，数据的处理及计算与文献方法相同，测试结果以增值率表示，结果见表1。
[0115]
表1
[0116]
名称t淋巴细胞增值率(％)实施例176.15实施例249.62实施例3101.53
实施例4198.46实施例5246.81对照例1132.70
[0117]
t细胞为重要的免疫细胞，主要介导细胞免疫，t细胞受cona刺激后母细胞会发生增殖反应，服用霍山石斛中药组合物后增殖反应的增值率越高则t淋巴细胞免疫力越强。通过上述测试结果可以看出，在未使用载体的实施例1～3中，实施例3的增值率最高，说明实施例3的组方可以协同增强霍山石斛对小鼠免疫力的提升效果。在使用了载体的实施例4～5及对照例1中，实施例4～5使用的载体要优于市售的医用壳聚糖载体带来的效果，其中实施例5的效果最佳。出现这种结果的原因可能在于，载体的添加有助于提高药物成分的稳定性及负载量，使其能够更好的发挥提升免疫力的效果；实施例5中，以非那烯为起始单体来构建多孔的交联聚合物，其基本框架是质硬且高度疏水的，不会与水分子结合发生溶胀来堵塞药物成分的释放通路，而通过癸二胺为桥接链引入三氟甲基，具有较大空间位阻、良好的亲脂性以及稳定性，增强了有机碳框架结构对亲脂物成分的结合和负载，使其表现出最佳的增强免疫力效果。
[0118]
测试例2
[0119]
霍山石斛中药组合物中制备的载体的体外细胞毒性试验参照gb/t 16886.5-2017《医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验》中的具体方法及步骤进行。测试细胞系为人正常结肠上皮细胞(编号：bncc339288，ncm-460，北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心提供)，测试为浸提液试验，测试方案参照上述国家标准中8.2节浸提液试验的步骤进行。浸提液细胞毒性形态学定性分级参考表2，载体的体外细胞毒性试验结果见表3。
[0120]
表2
[0121][0122]
表3
[0123][0124][0125]
根据上述国家标准中的定义，分级大于2级时被认为有细胞毒性作用。通过表3中的结果可以得知，实施例4～5制备的两种载体性质稳定并在1000μg/ml的浓度下也未表现出细胞毒性，不会导致细胞溶解、细胞增殖下降的情况。
[0126]
测试例3
[0127]
霍山石斛中药组合物中载体的比表面积测试参考gb/t 19587-2017《气体吸附set法测定固态物质比表面积》中的具体步骤进行。测试用气体为纯度不小于99.99％的氮气，测试采用静态容量法，仪器为bsd-pm1/2型高性能比表面积及微孔分析仪(北京贝士德仪器科技、有限公司提供)，每组测试5次，结果取算术平均值，保留三位有效数字。载体的比表面积测试结果见表4。
[0128]
表4
[0129]
名称比表面积(m2/g)实施例4731实施例5746对照例1312
[0130]
载体的比表面积越大，其孔隙能够为吸附药物活性成分提供的空间也越大，负载能力越强。通过表4中的测试结果可以看出，实施例4～5制备的载体比表面积大，优于市售的产品。其原因可能在于，实施例4～5以非那烯为起始单体来构建多孔的交联聚合物，非那烯作为一种具有扩展共轭结构的芳香分子，由于芳香单体的交联形成了分布密集的微孔结构，使得比表面积增大，有利于容纳被吸附物质。

技术特征：

1.一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤，以重量份计：s1、称取霍山石斛8～12份、土茯苓1.5～3份、赤芍2～4份、白术1～2.5份、金银花1～2份、枸杞子1～3份、杜仲2～3份、泽泻2.5～4份，清洗去除上述原料药表面灰尘杂质，常温干燥，得到除杂的原料药，除杂的原料药经混合、粉碎、过筛，得到粉末状原料混合物，备用；s2、采用中药提取机，分别以水及无水乙醇为提取剂，依次对上述原料混合物进行水提和醇提；回收提取剂后将提取到的水提产物及醇提产物合并，得到中药提取物，备用；s3、另取4～6份所述中药提取物，与2～3份糊精、1～2份共聚维酮、0.1～0.15份硬脂酸镁、0.5～1.5份羟丙基纤维素、0.25～0.75份崩解剂，0.25～0.5份稠环亲脂性载体混合，采用成型设备成型，随后经灭菌、封装，得到所述霍山石斛中药组合物。2.根据权利要求1所述的一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤s1中所述粉末状原料混合物的细度为60～120目。3.根据权利要求1所述的一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤s3中所述崩解剂为微晶纤维素、磷酸氢钙中任意一种或两种的组合物。4.根据权利要求1所述的一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于，所述稠环亲脂性载体的制备方法如下，以重量份计：m1、无氧条件下将5.3～8份1,2-环氧氯丁烷与5～7.5份三氟乙醇混合均匀，提高二者混合物的温度以进行取代反应；反应结束后向粗产物中添加1～2mol/l的氢氧化钠水溶液以调节粗产物的ph至中性，随后经水洗、干燥，得到纯化取代产物，备用；m2、取2.1～5.5份均苯三甲酸与50～100份氯化亚砜混合至均匀，并向二者的混合物中加入0.15～0.45份n,n-二甲基甲酰胺来活化反应物，得到氯化反应液；升高氯化反应液的温度以开始氯化反应，反应结束后，产物经减压蒸馏去除剩余的氯化亚砜，得到氯化产物，备用；m3、将3.3～5份非那烯溶于75～150份二氯甲烷，继续向该溶液中加入4.5～6.5份所述氯化产物，混合均匀后加入2.4～4份氯化铁作为催化剂，升温并进行交联反应；反应结束后，过滤得滤饼，滤饼经无水乙醇洗涤、干燥，得到纯化交联产物，备用；m4、无氧条件下，另取2.5～4份所述纯化交联产物与1.7～3.4份癸二胺、50～100份甲醇混合均匀；升温并进行羰氨反应，反应结束后经减压蒸馏去除甲醇，剩余的固体产物经水洗、干燥，得到纯化羰氨反应产物，备用；m5、将3.2～5份所述纯化羰氨反应产物与50～100份水混合，随后加入0.9～1.5份所述纯化取代产物，在无氧条件下进行加成反应；反应结束后产物经过滤得滤饼，经水洗、干燥，得到所述稠环亲脂性载体。5.根据权利要求4所述的一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤m1中所述取代反应的温度为50～65℃，反应时间为4～12h。6.根据权利要求4所述的一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤m2中所述氯化反应的温度为75～90℃，反应时间为18～36h。7.根据权利要求4所述的一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤m3中所述交联反应分为两阶段，第一阶段在45～60℃反应2～4h；第二阶段在75～90℃反应4～8h。8.根据权利要求4所述的一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤m4中
所述羰氨反应的温度为55～70℃，反应时间为18～36h。9.根据权利要求4所述的一种霍山石斛中药组合物的制备方法，其特征在于：步骤m5中所述加成反应的温度为10～30℃，反应时间为3～9h。10.一种霍山石斛中药组合物，其特征在于：采用如权利要求1～9任一项所述的方法制备而成。

技术总结

本发明公开了一种霍山石斛中药组合物及其制备方法，属于石斛属配制品技术领域。本发明以霍山石斛为主药，辅以土茯苓、赤芍、白术、金银花、枸杞子、杜仲、泽泻为臣药，主臣合用，滋阴潜阳，益阴和阳之意，诸药合用，标本兼治，而以治标为主。本发明以上述中药的提取物与辅料结合，经灭菌、封装制成霍山石斛中药组合物，能够增强人体免疫力，达到滋阴润肺及祛风去湿的效果。效果。