选择培养基是用来将某种或某类微生物从混杂的微生物体中分离出来的培养基。根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。 一种类型选择培养基是依据某些微生物的特殊营养需求设计的，例如，利用以纤维素或石蜡油作为唯一碳源的选择培养基，可以从混杂的微生物体中分离出 能分解纤维素或石蜡油的微生物；利用以蛋白质作为唯一氮源的选择培养基，可以分离产胞外蛋白酶
的微生物；缺乏氮源的选择培养基可用来分离固氮微生物。另一 类选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，这种化学物质没有营养作用，对所需分离的微生物无害，但可以抑制或杀死其他微生物，例如，在培养基中加入数滴 10%酚可以抑制细菌和霉菌的生长，从而由混杂的微生物体中分离出放线菌；在培养基中加入亚硫酸铵，可以抑制革兰氏阳性细菌和绝大多数革兰氏阴性细菌的 生长，而革兰氏阴性的伤寒沙门氏菌(Salmomnella typhi)可以在这种培养基上生长；在培养基中加入染料亮绿(brilliant green)或结晶紫(crystal vio1et)，可以抑制革兰氏阳性细菌的生长，从而达到分离革兰氏阴性细菌的目的；在培养基中加人 青霉素、四环素或链霉素，可以抑制细菌和放线菌生长， 而将酵母菌和霉菌分离出来。现代基因克隆技术中也常用选择培养基，在筛选含有重组质粒的基因工程菌株过程中，利用质粒上具有的对某种(些)抗生素的抗性选 择标记，在培养基中加入相应抗生素，就能比较方便地淘汰非重组菌株，以减少筛选目标菌株的工作量。
粪大肠菌标准检验方法及注解 GB 7918.3-87
化妆品微生物标准检验方法粪大肠菌及注解
中华人民共和国国家标准
化妆品微生物标准检验方法粪大肠菌 UDC 668：576 .85.07
(GB7918.3－87)
Standard methods of microbiological examination for cosmetics
Fecal coliforms
粪大肠菌细菌来源于人和温血动物的粪便。检出粪大肠菌表明该化妆品已被粪便污染，有可能存在其他肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。因此粪大肠菌被列为重要的卫生指标菌。
1 方法提要
根据粪大肠菌所具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌在44℃培养24～48h能发酵乳糖产酸并产气，能在选择性培养基上产生典型菌落，能分解氨酸产生靛基质。
2 培养基和试剂
成分： 蛋白胨 20g
猪胆盐 5g
乳糖 5g
机械钻孔桩0.4％溴甲酚紫水溶液 2.5ml
蒸馏水 1000ml
制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH到7.4，加入指示剂，混匀，分装试管(每支试管中加一个小例管)。115℃(10 1b)20min灭菌。
2.2 双倍浓度乳糖胆盐培养基
按上述乳糖胆盐培养基成分，蒸馏水量不变，其他成分量加倍。
2.3 伊红美蓝(EMB)琼脂
成分：蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 20g
2％伊红水溶液 20ml
0.5％美蓝水溶液 13ml
蒸馏水 1000ml
制法：先将琼脂加到900ml蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾蛋白胨，混匀，使之溶解。再以蒸馏水补足至1000ml。校正pH值为7.2～7.4，分装于烧瓶内，121℃(15 1b)15min高压灭菌备用。临用时加入乳糖并加热融化琼脂。冷至60℃左右以无菌手续加入灭菌的伊红美蓝溶液，摇匀。倾注平皿备用。
2.4 蛋白胨水(作靛基质试验用)
成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000ml
制法：将上述成分加热熔化，调pH值为7.0～7.2，分装小试管，高压灭菌121℃(15 1b)15min。
2.5 靛基质试剂 stimulsoft
柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25ml。
试验方法：接种细菌于蛋白胨水中，于44℃培养24h。沿管壁加柯凡克试剂0.3～0.5ml，轻摇试管。阳性者于试剂层显深玫瑰红。
注：蛋白胨应含有丰富的氨酸，每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。
2.6 革兰氏染法
2.6.1 染液制备
2.6.1.1 结晶紫染液：
结晶紫 1g
95％酒精 20ml
1％草酸铵水溶液 80ml
将结晶紫溶于洒精中，然后与草酸铵溶液混合。
2.6.1.3 脱液：95％乙醇。
2.6.1.4 复染液：
a. 沙黄复染液：
沙黄 0.25g
导电银胶95％酒精 10ml
蒸馏水 90ml
将沙黄溶解于酒精中，然后用蒸馏水稀释。
b. 稀石碳酸复红液：称取碱性复红10g，研细，加95％乙醇100ml，放置过夜，滤纸过滤。取该液10ml，加5％石碳酸水溶液90ml混合，即为石碳酸复红液。再取此液10ml加水90ml即为稀石碳酸复红液。
2.6.2 染法
2.6.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗。 船用靠球
2.6.2.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
2.6.2.3 滴加95％酒精脱，约30s，或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，脱10s，水洗。
2.6.2.4 滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。
2.6.3 染结果
革兰氏阳性菌呈紫，革兰氏阴性菌呈红。
注：如用1：10稀释石碳复红染液作复染液，复染时间仅需10s。
亚克力水晶字制作3 仪器
3.1 恒温水浴或隔水式恒温箱：44℃。
3.2 温度计。
3.3 显微镜。
3.4 载玻片。
3.5 接种环。
3.6 电炉。
3.7 锥形瓶。
3.8 试管。
3.9 小倒管。
3.10 pH计或pH试纸。
3.11 高压消毒锅。
3.12 灭菌吸管。
3.13 灭菌平皿。
4 操作步骤
4.1 取10ml 1：10稀释的样品，加到10ml双倍浓度的乳糖胆盐培养基中，置44℃培养箱中培养24～48h，如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌阴性。
4.2 如产酸产气，划线接种到伊红美蓝琼脂平板上，置37KKS689℃培养18～24h。同时取该培养液1～2滴接种到蛋白胨水中，置44℃培养24h。
经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长。大肠菌在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽。也有的呈紫黑，不带或略带金属光泽，或粉紫，中心较深的菌落。亦常为大肠菌，均应注意挑选。
4.3 挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染镜检。
4.4 在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5ml，观察靛基质反应。阳性者液面呈玫瑰红；阴性反应液面呈试剂本。
5 检验结果报告
平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌。
附加说明：
本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。
本标准由“化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草。
本标准主要起草人周淑玉。
本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释
注解：
（1）用粪大肠菌作为化妆品受粪便污染的指示菌是比较合适的。考虑到总大肠菌中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境（水与土壤）中亦经常存在。在粪大肠菌这一组
细菌中大肠埃希氏菌（E.coli）数量最多，是较理想的指示菌，但欲正确鉴定此细菌，手续较繁复，因此在化妆品检验中采用粪大肠菌作为指示菌。
（2）本方法采用乳糖胆盐培养基，是具有选择性作用的培养基。其中胆盐具有抑制革兰氏阳性菌的作用。胆盐的品种来源及用量不同，其抑菌效果也不同。目前国内常见的胆盐有国产的生检7号和3号胆盐，进口的Difco和Oxoid,No.3胆盐，以及牛胆盐、羊胆盐、猪胆盐，免胆盐和家禽胆盐等。
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