设计实验方案
1．土壤标本的采集
放线菌属好气性微生物，主要生活在较干燥、透气性好、中性到微碱性、有机质丰富的土壤中，特别是在我国南方热带及亚热带地区肥沃的土壤中，防线菌种类丰富。采集土壤标样时，应根据放线菌的生活特性，有针对性地进行采样。宜选择菜地、茶园、果园等地采样。选定采样地点后，先铲去表层土，挖取5～3Ocm深的土壤数十克，装入牛皮纸信封，封好袋口；潮湿的土壤宜装入塑料袋或铝盒内，做好编号记录，带回实验室供分离用。采回的土壤标本一般宜及时进行分离，如不能做到随采随分，宜将土壤放在阴凉、通风干燥处，使其风干，保藏备用，但保藏时间不宜过长。
链路层劫持分离放线菌常用的培养基主要有：
a．高氏1号培养基：可溶性淀粉2．0、KHP040．05、NaC10．05、KN040．1、MgS(~·7H(
0．电磁阀总成05、FeSO40．001、琼脂1．5～2．0、pH7．2～7．4、在121℃(15磅)高温高压灭菌20min。
b．葡萄糖一天门冬素琼脂培养基：葡萄糖1．0、天门冬素0．05、牛肉膏0．2、KHP040．05、琼脂2．0、pH6．8或自然、8磅灭菌30rain。
C．精氨酸一甘油琼脂培养基：精氨酸0．1、甘油1．25、KHPOa0．1、MgS()4·7H：O0．05、NaC10．1、ZnS04·7H2O0．0001、CuSO4·5H2O0．0001、(SO4)。·6HO0双面针织机．001、M~SO4·HO0．0001、琼脂2．O，pH9．0，8磅灭菌30min。
1．2客户端开发．2平板培养基制备
根据分离量多少，准备好消毒高氏一号培养基500mL或1000mL，灭菌的7cm或9cm直径培养
皿中倒入1O～2OmL培养基，制成平板备用。
3.放线菌的分离方法很多，这里主要介绍分离普通放线菌的弹土法和稀释画线法。
（1）放线菌的弹土分离法
土壤准备与接种
将土壤用研钵研细，6O目过筛，取一定量细土平铺于灭过菌的光滑硬纸板上，纸面积略大于培养皿的口径，将多余的土轻轻倾去，见纸板上有一层细土粒粘附着则较为理想。接种时将倒好培养基的皿盖微微揭开，将土壤纸板粘土面向下轻轻插入覆盖其上，用皿盖微微触动一下纸板并立刻抽出，盖好皿盖即接种完毕。取下的土壤纸板，还可用于第2、第3及第4套分离培养皿接种。用于第2套接种时，轻轻弹动一下纸板；用于第3、第4套皿接种时，可 在纸板背面稍加重弹力，使粘附于纸板上残留的少量土粒落下，达到控制理想的出菌率。如果要分离罕见的放线菌，如小单孢菌、小双孢菌、游动放线菌或嗜热放线菌等，则可将土壤研细后作干热处理(120℃下处理1h)。这样在分离时可以大大降低细菌、霉菌和链霉菌的数量，使罕见的放线菌出现的比率提高。
（2）稀释分离法
此法的准备工作与弹土法相同，但稀释比应根据土壤中放线菌数量的多寡来决定。因此，往往在正式分离前需做一次预备分离试验，出适当的稀释比。通过预备分离试验，可以观察到不同的土中放线菌、细菌和霉菌的数量关系，启示在分离工作中应采取何种对策。若土壤中细菌和霉菌过多时，可考虑在分离培养基中加入相应的抑菌剂。如抑制霉菌可加制霉菌素(50单位／mL)或多菌灵(30单位／mL)抑制细菌可加链霉素(25～5O单位／mL)等。在高氏1号培养基中加入150㎎/L美工刀片重铬酸钾（有利于放线菌生长，抑制真菌和细菌生长）。称取研细的土壤5g，加入盛有45mL灭菌水的三角瓶中，充分振荡之后在28℃或室温风干10-20天，制成10%的土壤悬浮液。PH值为7，40-50℃条件下加6%的酵母膏（6%的蛋白胨）和0.05%sps(5mol/L磷酸缓冲液)，震荡10-20分钟。灭菌水稀释一分钟后含250㎎/L重铬酸钾的高氏1号培养基制成平板。
三．1．4放线菌培养、挑菌和纯化
将上述接种好的培养皿倒置于28℃恒温培养箱中培养。若分离嗜热放线菌，则应放在45～5O℃下培养。3～4d后即可长出放线菌单菌落。在分离放线菌之前，必须学习、了解放线
菌的形态特征、颜等。初次分离，如果没有固定目标菌类，应将所有的放线菌单菌落都及时转接到高氏一号琼脂或葡萄糖一天门冬素琼脂斜面上，进行纯化培养。一般链霉菌的菌落大，气生菌丝丰茂，泽多种多样；而小单孢菌、诺卡氏菌、游动放线菌等菌落小，光秃无气生菌丝，泽鲜艳。应注意选留后几类放线菌，在教学上可丰富分类学实验内容，同时也可
为筛选新抗生素或酶制剂等提供菌源。如果细菌、霉菌干扰不严重时，可延长分离平板
的培养时间，让一些生长速度慢的放线菌陆续地生长出来，分批挑菌。一般纯化培养7～14d，待生长成熟后终止培养，编号登记，备用。
注意事项：放线菌生长速度慢，培养期长，注意无菌操作，防菌防污染，观察时注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和泽差异。
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