第37卷第5期2020年10月
《研究简报$
卜
LABORATORY ANIMAL SCIENCE
Vol . 37 No . 5
October 2020
高保栓康莉刁立琴付钊
(河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院，石家庄050061)
摘要：目的研究2015版国家药包材标准（简称Y B B 标准）中异常毒性试验的变化，旨在关注实验动 物福利^ 方法比较新旧Y B B 标准。结果发现2015版Y B B 标准除了滴眼剂瓶和聚乙烯/铝/聚乙烯复合药用软膏管外， 其他塑料瓶和复合膜类均新增加了空白对照，而药用铝箔和硬片类、药用低密度聚乙烯膜、袋均未增加空白对照。 结论药包材的异常毒性检查应按非生物制品试验，认为不需要设立空白对照。建议在相关的药包材标准修订时 考虑舍去异常毒性试验的空白对照。 关键词：药包材标准；异常毒性；空白对照；实验动物福利中图分类号：R 979. 9
文献标识码：A
文章编号：〖006-6179(2020)05-0066-05
D O I ： 10. 3969/j . issn . 1006-6179. 2020. 05. 012
直接接触药品的包装材料和容器（简称药包 材）按材质不同可分为塑料类、金属类、玻璃类、陶 瓷类、橡胶类和其他类（如纸、干燥剂）等，也包括由 两种或两种以上的材料复合或组合而成的复合膜和 铝塑组合盖等[1]。药包材作为药品的一部分，其本 身的质量、安全性等对药品质量、临床使用安全性有 着十分重要的影响。国家药包材标准包括药包材标 准（Y B B 标准）和产品注册标准（企业标准）。目前，塑料类、金属类及复合膜等国家药包材标准均规定了 异常毒性检查[2]。但是，发现在2015版YBB 标准中 异常毒性试验方法有的增加了空白对照，有的未增加 空白对照；甚至存在着许多
企业注册标准与相关的 YBB 标准不一致，国内各省的同类药包材注册标准不 统一现象。显然，增加空白对照试验就意味着增加实 验动物的使用数量。如果没有科学依据，就违背了实 验动物福利的“3R”（减少、替代、优化）基本原则[3+。因此，我们对于2015版YBB 标准中异常毒性试验设 立空白对照的意义和必要性进行了探讨，对于保障实 验动物福利及有效实施具有一■定的积极意义。
1 对异常毒性的认识
1.1异常毒性概念[1]
异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征，
收稿日期：2019-04-02
作者简介：高保栓（1963—），男，高级工程师，主要从事医疗器械和药用包装材料的微生物检验和生物学评价试验工作.E-mail :ga〇b s @
是指由生产过程中引人或其他原因所致的毒性。
异常毒性检查法系给予动物一定剂量的供试品 溶液，在规定时间内观察动物出现的异常反应或死 亡情况，检查供试品中是否污染外源性毒性物质以 及是否存在意外的不安全因素。1.2异常毒性检查法
试验用动物：质量合格的动物，在试验前及试验 的观察期内均应按正常饲养条件饲养。做过本试验 的动物不得重复使用。
1.2.1非生物制品试验：《中华人民共和国药典》[1 ] 规定：除另有规定外，取（中国药典未作规定，一般使 用清洁级或SPF 级动物试验）小鼠5只，体质量18~ 22 g ，每只小鼠分别（中国药典未作规定，一般采用尾 静脉注射）静脉给予供试品溶液0.5 mL 。应在4〜5 s 内匀速注射完毕。除另有规定外，全部小鼠在给药后 48 h 内不得有死亡；如有死亡时，应另取体质量19~ 21 g 的小鼠10只复试，全部小鼠在48 h 内不得有死 亡。试验未规定设立动物空白对照。
1.2.2生物制品试验：《中华人民共和国药典》m 规定：除另有规定外，异常毒性试验应包括小鼠试验 和豚鼠试验，试验中应设同批动物空白对照。按照 规定的给药途径缓慢注人动物体内。小鼠试验和豚 鼠试验均采用腹腔注射给药法进行，要求在观察期
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第5期高保栓等：刍议药包材的异常毒性检查和实验动物福利• 67 •
内，动物应全部健存，且无异常反应，到期时每只动 物体质量应增加，判定供试品符合规定。
1.3急性全身毒性和异常毒性的区别
1.3.1概念：药包材的急性全身毒性试验系将一定 剂量的供试品溶液由静脉注人小鼠体内，在规定时 间内观察小鼠有无毒性反应和死亡情况，以判定供 试品是否符合规定[5]。
1.3.2 急性全身毒性检查法[5]：供试用(YBB00042003-2015未作规定，一般使用清洁级或SPF级动物试验）小鼠，体质量17~23 将小鼠随机
表1分为试验组和对照组，每组5只，放入固定器内，自尾 静脉分别注人供试品溶液和空白对照液，注射速度为0. 1mL/s，注射剂量为50 mL/k g体质量。注射完毕 后，观察小鼠即时反应，试验后待观察小鼠喂养方法同试验前，并于4、24、48、72 h观察和记录试验组和对 照组动物的一般状态、毒性表现和死亡动物数，在 72 h时称量动物体质量。整个观察期内，试验组动物 的反应不大于对照组动物，则判定供试品合格。
1.3.3两种毒性试验法的区别：药包材的急性全身 毒性和异常毒性的区别见表1。
药包材两种毒性试验法的区别
Table 1Difference of two methods for toxicity test of pharmaceutical packaging materials 内容异常毒性试验急性全身毒性试验
供试液制备500 c m2加0. 9%无菌氯化钠溶液50 niL，置高压
蒸汽灭菌器中丨丨〇尤、保持30 min
不规则形状0.2 g/m L、0. 9%无菌氯化钠溶液，置高压蒸汽
灭菌器中115 t、保持30 min
实验动物小鼠，体质量18 ~ 22 g小鼠，体质量17~23 g 试验方法有或没有空白对照有空白对照
给药量0. 5 m L/只50 m L/k g体质量
观察时间48 h72 h
观察项目判定标准
死亡情况
全部小鼠均无死亡则供试品符合规定
一般状态、毒性表现和死亡情况
试验组动物的反应不大于对照组动物则供试品合格。如试验组动
物有2只或2只以上出现中度毒性症状（出现明显腹部刺激症状，
呼吸困难，运动减少，眼睑下垂，腹泻，体质量下降至15~丨7 g)或死
亡（注射后死亡）则供试品不合格。
2新旧药包材标准在异常毒性检查方面的变化
将新版国家药包材标准（即2015版Y B B标准）与原版Y B B标准（国家食品药品监督管理局2002 ~ 2006年陆续颁布的《直接接触药品的包装材料和容器标准汇编》，共6辑）进行比较，发现部分品种的异常毒性试验增加了空白对照，详见表2~表5。
表2塑料瓶类药包材新旧标准的变化比较
Table 2 Comparison of the changes of new and old standards for plastic bottls for pharmaceutical packaging
序号现用名称原版Y B B标准
异常毒性试验
陶瓷运输
2015版Y B B标准
异常毒性试验
1低密度聚乙烯药用滴眼剂瓶
Y B B00062002
以同批氯化钠注射液作空白对照
YBB00062002-2015
以同批氣化钠注射液作空白对照
2聚丙烯药用滴眼剂瓶
Y B B00072002
以同批氯化钠注射液作空白对照
YBB00072002-2015
以同批氯化钠注射液作空白对照
3口服液体药用聚丙烯瓶Y B B00082002
无空白对照
YBB00082002-2015
以同批氯化钠注射液作空白对照
4口服液体药用高密度聚乙烯瓶Y B B00092002
无空白对照
YBB00092002-2015
以同批氯化钠注射液作空白对照
5口服液体药用聚酯瓶Y B B00102002
无空白对照
YBB00102002-2015
以同批氯化钠注射液作空白对照
6外用液体药用高密度聚乙烯瓶Y B B00392003
无空白对照
YBB00392003-2015
无空白对照
7口服固体药用聚丙烯瓶Y B B00112002
无空白对照
Y B B00112002-2015
以同批氯化钠注射液作空白对照
8口服固体药用高密度聚乙烯瓶Y B B00122002
无空白对照
YBB00122002-2015油质检测
以同批氯化钠注射液作空白对照
9口服固体药用聚酯瓶
Y B B00262002
无空白对照
YBB00262002-2015
以同批氯化钠注射液作空白对照
• 68 •实验动物科学37卷
表3金属类药包材新旧标准的变化比较
Table 3 Comparison of the changes of new and old standards for metals for pharmaceutical packaging
序号现用名称原版Y B B标准
异常毒性试验
2015版Y B B标准
异常毒性试验
药用铝箔
铝质药用软膏管
聚乙烯/铝/聚乙烯复合
药用软膏管
Y B B00152002
无空白对照
Y B B00162002
无空白对照
Y B B00252005
空调节能器以同批氯化钠注射液作空白对照
Y B B00152002-2015
无空白对照
YBB00152002-2015
无空白对照电极片
YBB00252005-2015
以同批氯化钠注射液作空白对照表4复合膜、硬片类药包材新旧标准的变化比较
Table 4 Comparison of the new and old standards for laminated films and sheets for pharmaceutical packaging
序号现用名称原版Y B B标准
异常毒性试验
2015版Y B B标准
异常毒性试验
1药用复合膜、袋通则Y B B00132002
无空白对照
YBB00132002-2015
red5集以同批氯化钠注射液作空白对照
2聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜、袋
Y B B00172002
同 Y B B00132002
YBB00172002-2015
同 YBB00132002-2015
3聚酯/低密度聚乙烯药用复合膜、袋
Y B B00182002
同 Y B B00132002
YBB00182002-2015
同 YBB00132002-2015
4双向拉伸聚丙烯/低密度聚乙烯药用复合膜、袋
Y B B00192002
同 Y B B00132002
YBB00192002-2015
同 YBB00132002-2015
5双向拉伸聚丙烯/真空镀铝流延聚丙烯药用复合膜、袋
Y B B00192004
同 Y B B00132002
Y B B00192004-2015
同 YBB00132002-2015
6玻璃纸/铝/聚乙烯药用复合膜、袋
Y B B00202004
同 Y B B00132002
YBB00202004-2015
同 YBB00132002-2015
7聚氯乙烯固体药用硬片Y B B00212005
无空白对照
YBB00212005-2015
无空白对照
8聚氯乙烯/低密度聚乙烯固体药用复合硬片Y B B00232005
无空白对照
YBB00232005-2015
无空白对照
9聚氯乙烯/聚偏二氧乙烯固体药用复合硬片Y B B00222005
无空白对照
YBB00222005-2015
无空白对照
10铝/聚乙烯冷成型固体药用复合硬片Y B B00182004
无空白对照
Y B B00182004-2015
无空白对照
11聚氯乙烯/聚乙烯/聚偏二氯乙烯固体药用复合硬片Y B B00202005
无空白对照
YBB00202005-2015
无空白对照
12聚酰胺/铝/聚氯乙烯冷冲压成型固体药用复合硬片Y B B00242002
无空白对照
YBB00242002-2015
无空白对照
13药用低密度聚乙烯膜、袋Y B B00072005
无空白对照
YBB00072005-2015
无空白对照
表5铝塑组合盖类药包材新旧标准的变化比较
Table 5 Comparison of the changes of the new and old standards for aluminum-plastics combination caps for pharmaceutical packaging
序号现用名称原版Y B B标准
异常毒性试验
2015版Y B B标准
异常毒性试验
1口服固体药用低密度聚乙烯防潮组合瓶盖2铝塑组合盖类
3 药用铝塑封口垫片通则
Y B B00172004
无空白对照
Y B B00372003.YBB00402003
1-甲基环戊醇
无异常毒性项
Y B B00212004
无异常毒性项
Y B B00172004-2015
无空白对照
YBB00372003-2015.YBB00402003-2015
无异常毒性项
YBB00212004-2015
无异常毒性项
第5期高保栓等：刍议药包材的异常毒性检查和实验动物福利.69 •
3讨论
3.1药包材作为药品的一部分[2]，应属于非生物制品。《中华人民共和国药典》2015版四部异常毒 性检查法中非生物制品试验并没有规定设立空白对照。
3.2由表2~表5可以看出，2015版Y B B标准除了 滴眼剂瓶和聚乙烯/铝/聚乙烯复合药用软膏管原标 准就有空白对照外，其他塑料瓶和复合膜类均新增加了空白对照，而药用铝箔和硬片类等却没有增加空白对照，甚至药用低密度聚乙烯膜、袋未增加空白 对照，与同材质的低密度聚乙烯药用滴眼剂瓶原标准就有空白对照也不一致。
3.3根据异常毒性的毒性特征，检查的是药包材样 品是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不 安全因素，关注的是否引起小鼠死亡，这是不同于急 性全身毒性试验的关键点。况且，众所周知氯化
钠 注射液是临床输液常用的生理盐水，一般来说，不可 能引起动物死亡。因此，增加以生理盐水为动物空白对照必要性值得商榷。
近年来，国内外实验动物福利的发展在很多领域令人可喜。早在1959年，英国动物学家威廉•拉 塞尔和微生物学家雷克斯•伯奇就在《人道主义实 验技术原理》中提出理念：科学、合理、人道地使用 实验动物及鉴别和减少“非人道”的动物实验。目前，已成为国际社会普遍认可的实验动物福利“3R”基本原则，即替代（replacement)、减少（reduction)和 优化（refinement)原则。为了规范实验动物工作，保 障实验动物福利，据了解我国的《实验动物福利法》现正在加紧制订中。倡导“减少”“替代”“优化”的“3R”原则，更要求科学、合理、人道地使用实验动物。作为从事实验动物工作的人员，如何最大限度
地保障实验动物的福利，值得大家思考和关注！
针对药包材的异常毒性检查，如果不能科学、合 理的安排试验，随意增加动物空白对照，直接增加了 实验动物小鼠的使用数量，显然不符合“白对照原 则。异常毒性试验中没有必要地设立动物空白对照，将使成千上万的小鼠白白为人类做出牺牲和贡献，实验动物作为人类的替难者，这是不人道、不公 平的。因此，建议在相关的药包材标准修订、更新时 考虑舍去异常毒性试验的空白对照，将对有效地保
障和实施实验动物福利产生积极的影响。
参考文献
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部.北京：中国医药科技出版社，2015:4丨3-415+153.
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医药科技出版社，2015.
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[4 ]贺争鸣，尚昌连，王禄增，等.关注和提高实验动物福利[J].
中国比较医学杂志，2004,14(6) :381-383.
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检查法.国家药包材标准[S].北京：中国医药科技出版社，
2015:336-337.
• 70 •实验动物科学37卷
Discussion on Test for Abnormal Toxicity in Pharmaceutical
Packaging Standards and Laboratory Animal Welfare
GAO Baoshuan, KANG Li, DIAO Liqin, FU Zhao
(H e b e i In s titu te f o r th e C o n tr o l o f M e d ic a l D evices a n d P h a r m a c e u tic a l P a c k a g in g M a te r ia ls, S h ijia z h u a n g050061, C h in a)
Abstract ：Objective To study the changes of abnormal toxicity test in 2015 edition of YBB standard in order to protect the welfare of laboratory animals. Method The new and old YBB standards were compared. Result It showed that blank controls were added to all plastic bottles and laminated films except bottles for eye drops and composite tube ( PE/A1/PE ) for ointment in the 2015 edition of YBB standards, while blank controls were not added to aluminum foil for medicine, sheets for solid p
reparation and LDPE films and pouches for pharmaceutical packaging. Conclusion Abnormal toxicity test in pharmaceutical packaging material standards should be based on non-biological product test, and it is not necessary to set up blank control. It suggested that the blank control of abnormal toxicity test should be taken into account when revising and updating the relevant pharmaceutical packaging material standards.
Key words ：pharmaceutical packaging standards ；test for abnormal toxicity ；blank control; laboratory animal welfare
(上接第65页）
The Method of Establishing Mouse Osteoarthritis Model by
Intraarticular Injection of MIA
ZHONG Yuchen1, WANG Shichun1 , ZHAO Feng1, ZHANG Tingting1,
CHEN Meng1，SHI Ping2, PANG Xining12
(1.C o lle g e o f b a sic m e d ic a l s c ie n c e, C h in a M e d ic a l U n iv e r s ity, S h e n y a n g110122,C h in a)
(2.S h e n y a n g A m n io n B io lo g ic a l E n g in e e r in g T e c h n o lo g y R e se a rc h a n d D e v e lo p m e n t C e n te r L im ite d C o m p a n y, S h e n y a n g110015,C h in a )
Abstract ：Objective To observe and analyze the damage on the mice cartilage and bone tissue produced by different dosages of MIA and find out the most suitable MIA dosage for building mouse osteoarthritis models. Method We choose healthy male C57BL/6 mice randomly divided into 4 groups. The left knee was injected for MIA as treated group，the right knee was injected for PBS as control group. Knee joint width was measured 1,2 and 4 weeks after the injection of MIA. Microscopic and histological scores were submitted to evaluated the damage degree of knee joint. Result We find out that different kinds of pathological change were noticed in experimental groups. The scores of the experimental groups were significantly higher than that of the control group (P<0. 05). In the experimental group, there were 2 relative differences between the large dose group ( ^ 0. 1mg) and the small dose group ( < 0. 1m g). Conclusion We recommended 0. 1mg as the respective dose for the large dose group, which produce obvious cartilage destruction and inflammatory, and 0. 05 mg as the respective dose for the small dose group which produce mild cartilage tissue damage and reversible inflammatory reaction.
Key words ： osteoarthritis ；articular cartilage ；knee joint scoring system ；monoiodoacetic acid
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