腺病毒既可以⽤于体内实验,也可以⽤于体外实验。如果是⽤于体外实验,可以选择⾮纯化的病毒;当⽤于体内实验时,则需要进⾏病毒纯化。因为未纯化的病毒液中含有缺损病毒颗粒、细胞碎⽚、培养基等杂质,这些杂质如果被注⼊动物体内,会引起宿主显著的免疫学反应。另外,纯化浓缩后的病毒滴度更⾼,更适合体内注射。
腺病毒常⽤的纯化⽅法为氯化铯或碘克沙醇密度梯度离⼼法,现以碘克沙醇密度梯度离⼼法为例,介绍⼀下腺病毒的纯化浓缩⽅法:
程控步进衰减器系统1.腺病毒纯化
(1)配制不同浓度的碘克沙醇;
(2)取⼀个超离管,⽤电动移液器逐层加⼊不同浓度的碘克沙醇。
(3)将处理好的病毒液加⼊到最上层;
(4)超速离⼼,48000rpm 2.5h。离⼼前应将对应的超离管配平,误差控制在0.1g以内。自锁装置
2.腺病毒浓缩
(1)离⼼完毕后,将超离管底⽤针头刺破,收集腺病毒所在层⾄15mL管中;横向线性马达
(2)将收集的病毒液⽤冻存缓冲液稀释⾄体积15mL,然后⽤0.2µm的滤膜过滤;
(3)将过滤后的液体置于⼀个15mL的超滤管中,3500g离⼼50min,⼀般离⼼2-3次达到预定体积;
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(4)将超滤管中剩下的液体反复吹打后吸⾄病毒储存管中,标明名称和⽇期。
(5)将收集起来的病毒涡旋震荡混匀后离⼼,吸10µl病毒液进⾏滴度检测。