[收稿日期]2018-07-10 [修回日期]2019-03-01[作者单位]蚌埠医学院第二附属医院病理科，安徽蚌埠233040
[作者简介]梅 娟(1982-)，女，主治医师.
[文章编号]1000⁃2200(2021)02⁃0228⁃04
㊃临床医学㊃
安徽省蚌埠地区某医院妇科病人HPV 感染及亚型分布 梅 娟，姚利利
[摘要]目的：研究安徽蚌埠地区妇科病人宫颈脱落细胞人乳头状瘤病毒(HPV)感染和亚型分布情况㊂方法：收集2016-2017年在蚌埠医学院第二附属医院接受HPV 检测的4773例妇科病人为研究对象，采用PCR 反向点杂交技术，进行23种HPV 亚型的基因分型检测㊂结果：共检查HPV 阳性标本1069例(高危型943例，低危型88例，高低危混合亚型38例)，感染率为22.40%；其中，单一亚型感染868例，占81.20%，多重感染201例，占18.80%；前五位高危亚型分别为HPV16型(280例)㊁HPV52型(198例)㊁HPV58型(109例)㊁HPV33型(84例)㊁HPV56型(81例)，其阳性率分别为26.19%㊁18.52%㊁10.20%㊁ 7.86%㊁7.58%㊂各年龄组感染率差异有统计学意义(P <0.01)，其中≥55岁组感染率为31.96%最高,<25岁组为25.41%㊁25~岁组为20.62%㊁35~岁组为21.76%,45~岁组为21.55%㊂结论：该院妇科病人HPV 感染以单一高危感染为主,HPV16㊁52㊁58型为前三大常见感染亚型,55岁以上年龄段HPV 感染率较高㊂[关键词]人乳头状瘤病毒；感染率；基因分型；年龄
[中图法分类号]R 711 [文献标志码]A DOI :10.13898/jki.issn.1000⁃2200.2021.02.024
Investigation of the human papilloma virus infection and genotype distribution
of gynecological patients in a hospital of Bengbu ,Anhui province
MEI Juan,YAO Li⁃li
(Department of Pathology ,The Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233040,China )
[Abstract ]Objective :To investigate the infection and genotype distribution of human papilloma virus (HPV)in female cervical exfoliative cells in gynecological patients in a hospital of Bengbu,Anhui province.Methods :The cervical exfoliated cells from 4773gynecological patients in the Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College from 2016to 2017were collected.Twenty⁃three HPV su
btypes were examined using PCR reverse dotblot hybridization technique.Results :Among the 4773samples,1069HPV positive cases were detected(including 943cases of high⁃risk HPV,88cases of low⁃risk HPV,and 38cases of high⁃low risk HPV),and the total infection rate of HPV was 22.40%.Among these positive samples,the single⁃subtype infection rate was 81.20%(868cases),and the multiple⁃subtype infection rate was 18.80%(201cases).HPV16(280cases,26.19%),HPV52(198cases,18.52%),HPV58(109cases,10.20%),HPV33(84cases,7.86%)and HPV56(81cases,7.58%)were the top five high⁃risk subtypes.The differences of the infection rates among different age groups were statistically significant(P <0.01).The infection rates in age≥55group,age <25group,35>age≥25group,45>age≥35group and 55>age≥45group were 31.96%,25.41%,20.62%,21.76%and 21.55%,
respectively.Conclusions :The single high⁃risk infection is the main type of HPV infection in gynecological patients,HPV16,HPV52and HPV58are the top three prevalent subtypes,and the HPV infection rate in female with age more than 55years is higher.[Key words ]human papilloma virus;infection rate;genotype;age
宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，我国每年新发宫颈癌13万余例[1]㊂人乳头状瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发生的重要原因[2]㊂流行病学研究[3]证实高危型HPV 感染的检测是
宫颈癌预防的关键㊂安徽蚌埠地区经济发展相对落后，卫生医疗条件相对匮乏，目前相关HPV 感染流行病学调查的报道较少㊂本研究通过分析我院妇科4773例就诊病人HPV 检测结果，旨在积累本地区妇科病人HPV 感染的流行病学资料,
以供预防和临床工作参考㊂1 资料与方法
1.1 研究对象 收集2016-2017年在我院妇科进行HPV 分型检测的4773例病人作为研究对象，年龄16~68岁㊂所有标本采集和检测过程均经病人本人同意㊂
1.2 仪器与试剂 核酸提取液试剂盒㊁HPV 分型检测PCR 试剂盒及HPV 分型检测杂交试剂盒均购自亚能生物技术(深圳)有限公司;PCR 扩增仪器(杭州博日科技有限公司)；自动杂交仪器(亚能生物技术深圳有限公司)㊂1.3 方法
1.3.1 样本采集 由专业妇科医生用扩阴器暴露宫颈口，用无菌棉拭子擦拭宫颈口可见的分泌物，将宫颈刷置于宫颈口，轻柔旋转宫颈刷使其顺时针旋转4~5圈，然后将宫颈刷放入加有专用细胞保存液的取样管中保存㊂样本采集后立即送检病理科㊂4℃保存,3d内检测㊂
1.3.2 DNA分离提取与PCR扩增 取保存有宫颈细胞的细胞保存液1.0mL，以14000r/min离心5min，弃去上清液，采用核酸提取试剂盒提取DNA㊂取5μL DNA提取液，加入PCR扩增体系，扩增条件:95
℃预变性10min;95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,40个循环;72℃延伸3min㊂1.3.2 PCR产物杂交 按照试剂说明书及仪器操作指南进行操作㊂加入25μL PCR扩增产物预热至45℃的杂交液，开启自动杂交程序㊂杂交结束后用镊子取出杂交膜放在吸水纸上,1h内分析结果㊂1.4 结果判定 检测结果阳性点为清晰可见的蓝圆点；根据膜条HPV分型分布图，判断阳性点为HPV哪种类型;Biotin对照点，反映酶与显底物反应，在检测中应为阳性㊂内对照点(IC)为质控模板DNA探针，若扩增反应体系中没有抑制因素,IC点出现；以上两对照点为阳性，其他点为阴性，应判定该样本检测结果为阴性，如果有一个HPV分型点为阳性，表示该样本为单重HPV感染，一个以上分型点为阳性表示多重HPV感染㊂
1.5 统计学方法 采用χ2检验㊂
2 结果
2.1 总体感染情况 在接受HPV检测的4773名妇科病人中，一共检出1069例HPV阳性病例，阳性率为22.40%；其中高危感染(h⁃HPV)率为19.76%(943/1069)，低危感染(l⁃HPV)率为1.84%(88/1069)，混合感染(h+lHPV)率为0.80%(38/1069)，分别占HPV感染的88.21%㊁8.23%和
3.55%㊂
2.2 不同年龄段病人HPV感染状况 ≥55岁年龄组感染率为31.96%，高于其他4个年龄组感染率(P<0.01)；其他4个年龄组感染率之间差异无统计学意义(P>0.05)(见表1)㊂
2.3 HPV单一及多重感染情况 在检测的4773例样本中既有单一型HPV感染，也有两种及以上基因型的混合感染㊂样本的阳性例数为1069例，其中单一感染阳性数为868例，阳性率为81.20%；多重感染阳性数为201例，阳性率为4.21%㊂在多重感染中以二重感染最为常见，占多重感染的78.61% (158/201)，三重及以上感染少见(见表2)㊂
表1 各年龄段病人HPV感染情况(n)
年龄/岁n h⁃HPV l⁃HPV h+lHPV阳性率/% χ2P <251852711922.41
25~90216022420.62
35~
45~
1778
1545
351
301
25
20
11
12
21.76
21.5522.72<0.01≥5536310410231.96**△△##◇◇
合计4773943883822.40
分割检验：与<25岁组比较**P<0.01；与25~岁组比较△△P<0.01；与35~岁组比较##P<0.01；与45~岁组比较◇◇P<0.01
表2 HPV单一和多重感染情况
感染类型
单一
感染[n(%)]占比/%
矩阵干扰四甲基环丁烷多重
感染[n(%)]占比/%
合计
感染[n(%)]占比/% h⁃HPV782(16.38)73.15 161(3.37) 15.06 943(19.76) 88.21 l⁃HPV86(1.80)8.042(0.04)0.1988(1.84)8.23 h+lHPV 38(0.80) 3.5538(0.80) 3.55合计868(18.19)81.20201(4.21)18.801069(22.40)100.00 2.4 HPV感染亚型分布 23种基因亚型在检测中均出现，高危HPV亚型感染以HPV16亚型为最高，其次是HPV52㊁HPV58，低危HPV亚型感染以HPV6亚型为最高，其次为HPV11㊁HPV42㊂1069例阳性标本由于有多重感染的标本共检出1320例HPV 亚型，其中高危型1192例，低危型128例，占受检人数比例分别为24.97%㊁2.68%，占总检出亚型的比例分别为90.30%㊁9.70%(见表3)㊂
3 讨论
近年来研究[4]发现，我国宫颈癌的发病率明显升高，严重影响妇女的心身健康㊂HPV感染类型不同，其致病风险差别亦较大㊂有研究[5]证实HPV基因分型结果可以预测患高级别鳞状上皮内瘤变及以上病变的风险，有助于宫颈病变病人的分层管理，具有较高的临床应用价值㊂所以，对HPV的检测及分型有着重要意义㊂不同地域HPV感染阳性率和型别存在差异[6]㊂关于安徽省蚌埠地区妇女HPV感染情况的研究报道极少，因此有必要对该地区妇科病人HPV感染情况及亚型分布特点进行研究，以期对该地区宫颈癌的防治进行指导㊂
本研究对安徽蚌埠地区4773例受检妇科病人进行HPV检查，共检出HPV阳性样本1069例，阳性率为22.40%㊂高危感染(h⁃HPV)率为19.76%㊂
与许晓红等[7]报道的安徽合肥地区高危型HPV感染率为18.62%的结果相似，与金夏等[8]报道的安徽合肥地区HPV感染率为12.43%相比偏高，与田斌等[9]报道的安徽铜陵地区宫颈炎女性HPV检出率为35.3%相比偏低，这些差异存在可能与报道时间不同或者与地区差异有关，需进一步调查研究分析㊂与国内相关报道比较，丁雪晴等[10]报道的泰州地区阳性率为25.57%，本研究结果与之相近㊂与靳大川等[11-12]报道相比，本研究结果HPV感染率偏高，这与他们的研究对象是普通人，而本研究是妇科病人，可能本身存在宫颈病变有关，所以感染率偏高，这也证实了宫颈病变与HPV感染存在关系㊂
表3 HPV感染的检出情况
基因型类别
检出
亚型例数
占受检人数
比例/%
占总检出
亚型比例/%
h⁃HPV
16280 5.8721.21 52198 4.1515.00 58109 2.288.26 3384 1.76 6.36 5681 1.70 6.14 5178 1.63 5.91 3167 1.40 5.51 6864 1.34 4.85 1860 1.26 4.55 5950 1.05 3.79 3548 1.01 3.64 45280.59 2.12 39250.52 1.89 5390.190.68 6690.190.68 7310.020.08 8210.020.08
l⁃HPV
658 1.22 4.40 1150 1.05 3.79 81100.210.76 4250.100.38 4340.080.30 8310.020.08 合计132027.66100.00
本研究结果显示,HPV感染率在各年龄组间存在差异,≥55岁年龄组感染率为31.96%，高于其他4个年龄组感染率(P<0.01)；其他4个年龄组感染率之间差异无统计学意义(P>0.05)㊂本研究类似于先前的报道[10-11]，但也与其他地区HPV感染相关文献[8-9,12-14]报道明显不同㊂这充分说明HPV 感染具有明显地域差异性㊂本研究结果中≥55岁年龄组感染率明显较高的原因可能为绝经期妇女卵巢功能下降造成激素水平不稳，衰老导致免疫功能下降以及老年人就诊意识差等因素提高了HPV的感染率㊂因此，本研究结果提示安徽蚌埠地区应该更多地关注年龄≥55岁女性妇科病人的HPV基因分型和宫颈癌的筛查㊂
HPV感染分高危型和低危型感染㊂HPV基因型的分布在不同地域显示出多样性，这种多样性特点对未来针对特定地区人设计有效预防HPV疫苗至关重要㊂西方国家HPV16和HPV18是两个主要的基因型，与70%的宫颈癌发生相关[15]㊂本研究中1069例HPV感染病例共检测出17种高危HPV基因型，其中排名前五位基因型为HPV16㊁HPV52㊁HPV58㊁HPV33㊁HPV56型㊂这与李军等[12]报道的高危HPV基因型排列顺序前三位一致，这与其他报道[11,14]存在一定的差异，但排列前三位的基因型是一
样的，此差异的存在尚需进一步的研究㊂HPV感染分为单重感染和多重感染㊂HPV多重感染可能对宫颈癌的发生㊁发展具有协同作用[16-17]㊂有研究[18]表明,HPV多重感染引起的宫颈癌比单重感染在中更具有耐药性，失败率是单重感染的5倍㊂本研究4773例样本中，单重感染868例，占81.20%；多重感染201例，占18.80%，与研究[12]报道相近㊂多重感染中主要为二重感染，占多重感染的78.61%(158/201)，这与相关报道[11-12]一致㊂本研究存在一定局限性，研究中使用的HPV试剂盒只能检测出已知HPV基因型中的23种类型，导致检测出的多重感染的例数可能比实际要低㊂
总之，我院妇科病人HPV感染检测共发现15个高危基因型，以单一高危感染为多见,HPV16㊁HPV52㊁HPV58㊁HPV33㊁HPV56为排列前五位的基因型；各年龄段中以≥55岁年龄组HPV感染率最高，因此，该地区需更加关注此年龄段妇科病人的HPV基因分型和宫颈癌的筛查㊂
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(本文编辑 周洋)
(上接第227页)
注重PCOS病人心血管病变的筛查，及时有效干预，以改善病人预后㊂
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(本文编辑 刘璐)
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