计莹，韩凤云*
(常州制药厂有限公司，江苏常州213011)
Determination of Related Substance of Pregabalin Capsules by HPLC
Ji Ying, Han Fengy un*
(Changzhou Pharmaceutical Factory Co., Ltd., Changzhou 213011, China)
Abstract: Objective: To establish an HPLC method f or determination of related substance of Pregabalin Capsules. Method: The analytical column was C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)column. The mobile phase A was composed of acetonitrile and 20 mmol/L dipotassium hydrogen phosphate of whic
h adjusted pH to 2.5(80∶20). The mobile phase B was acetonitrile .The whole run carried out by gradient elution at a f low rate of 1.0ml/min. The wavelength of UV detector was 210 nm . Results: Both of linear ranges of impurity I and II was 4~24 μg . The average recovery of impurity I and II were 99.6 %、98.5 %, respectively. Conclusion: This method is simple, repeatable to determine related substance of Pregabalin Capsules.
Keywords: pregabalin capsules；HPLC method；related substance
普瑞巴林胶囊可抑制中枢神经系统电压依赖性钙通道的α2-δ亚基，减少钙离子内流，随之减少谷氨酸盐、去甲肾上腺素、P 物质等兴奋性神经递质的释放，从而有效控制神经病理性疼痛，并具有抗焦虑、抗惊厥的作用[1-2]。普瑞巴林胶囊有关物质质量研究国内尚无报道，为此，本文建立该有关物质方法的研究和验证[3-4]。
1 仪器与试药
高效液相谱仪(waters 公司)；谱柱：C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)。
普瑞巴林及杂质对照品(常州制药厂有限公司)；乙腈为谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯，普瑞巴林胶囊(常州制药厂有限公司)。
(1)对照品贮备液的制备：精密称取10 mg 普瑞巴林对照品、10 mg 杂质I、10 m g 杂质II 对照品置入50 mL 容量瓶中，加入水溶解并稀释至刻度。
(2)样品溶液：取本品20 片，精密称定，计算出平均片重，研细。精密称取细粉适量(相当于普瑞巴林100 mg)于置入10 mL 容量瓶中，加入水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤。
2.2 谱条件及系统适用性
采用C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)谱柱；流动相A 为乙腈：20 mmol/L 磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节pH 至2.5)=80∶20；流动相B 为乙腈；梯度洗脱；稀释液：水；流速为1.0 mL/min；检测波长为210 nm。在本条件下，系统适用性溶液中普瑞巴林、杂质
I 与杂质II 分离度均大于1.5，其他成分对测定无干扰。
2.3 线性关系
线性溶液配制：分别精密量取普瑞巴林、杂质I 与杂质II 对照品贮备液(浓度0.2 mg/mL)0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL 分别至10 mL 量瓶中，用稀释液稀释至刻度。精密吸取上述对照品溶液各进20 μL记录峰面积，以峰面积Y 为纵坐标，浓度X(μg/mL)为横坐标进行线性回归，结果见表1。
表 1 线性数据
Tab.1 Linear data
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名称普瑞巴林杂质I 杂质II
线性方程y=425.4x+74.42 y=8755.x+128.0 y=8593x+1803 相关系数r 0.9997 0.9998 0.9999
结果表明普瑞巴林、杂质I 与杂质II 浓度在4~24 μg/mL 范围[收稿日期] 2014-10-31 内与峰面积呈良好线性关系。
2.4 专属性试验
取本品20 片，精密称定，计算出平均片重，研细，精密称取细粉适量(相当于普瑞巴林100 mg)置10 mL 量瓶中分别加入1 M 盐酸溶液、1 M 氢氧化钠溶液、双氧水(30 %)各1 mL，加热1 小时后放冷，调
节pH 至中性后用稀释液溶解定容，同时做空白试验。精密称取细粉适量(相当于普瑞巴林100 mg)分别置于条件4500LUX 光照24 小时、RH 75 %高湿24 小时、高温60 ℃放置24 小时后，加水分别转移至10 mL 量瓶中溶解定容，各破坏溶液20 μL，记录峰面积。结果总杂质分别为0.6 %、0.6 %、0.7 %、
0.8 %、0.9 %、0.6 %。各峰之间分离度均大于1.5，结果表明本法专属性良好。
2.5 检测限和定量限
分别配制普瑞巴林、杂质I 与杂质II 对照品溶液(浓度为20 μg/mL)，逐级稀释，信噪比(S/N)为3 时，最低检测限普瑞巴林为0.14 μg/mL；杂质I 为4.5 ng/mL；杂质II 为5.1 ng/mL；信噪比为10 定量限普瑞巴林为0.45 μg/mL；杂质I 为15 ng/mL；杂质II 为16 ng/mL；连续3 针的峰面积RSD 分别为2.5 %、3.9 %、4.1 %。
2.6 稳定性试验取对照品溶液和普瑞巴林胶囊的供试品溶液，分别
于(0、4、
8、12、24 h)进样20 μL记录峰面积，结果对照品溶液中普瑞巴林、杂质I 与杂质II 峰面积的RSD 为1.0 %、0.9 %、1.2 %，供试品
溶液中杂质I 未检出、杂质II 均为0.1 %，总杂质含量结果均小于1.0 %，总杂结果差值均小于0.1 %，并没有新增杂质生成，结果表明供试品溶液在24 h 内基本稳定。
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2.7 精密度试验
(1)按上述供试品溶液配制溶液，平行 6 份，记录峰面积计算，结果平均值杂质I、杂质II、总杂质含量结果分别为未检出、0.1 %、0.6 %，总杂结果差值均小于0.1 %。
(2)不同人、不同仪器、不同天、不同柱子测试同一批样品，结果平均值杂质I、杂质II、总杂质含量结果分别为未检出、0.1 %、0.6 %，总杂结果差值均小于0.1 %。
精密度总杂结果的差值均小于0.1 %，表明本法精密度良好。
2.8 准确度(回收率)试验采用标准加入法，精密称取普瑞巴林胶囊
细粉适量(相当于普
瑞巴林100 mg)，分别加入杂质I 和杂质II 贮备液适量，按供试品溶液制备项下制备供试品溶液，制备杂质限度的80 %、100 %、120 %各水平，平行3 份，测定结果见表2。
结果表明本法回收率良好。
(下转第216 页)
[作者简介] 计莹(1981-)，女，黑龙江黑河人，硕士，工程师，主要从事药物开发与管理。*为通讯作者。
合规定。
表 2 检测限测定
Tab.2 Determination of detection l imit
表 3 定量限测定配制三份。
100 %水平回收率溶液：
精密称定约1.0 g 样品于10 mL 量瓶中，移取200 %回收率储备溶液 5 mL 于此容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。同法配制三份。
120 %水平回收率溶液：
从茶叶中提取
精密称定约1.0 g 样品于10 mL 量瓶中，移取200 %回收率储备溶液 6 mL 于此容量瓶中，加稀释液稀
释至刻度，摇匀。同法配制三份。
定量限溶液：根据各溶剂定量限浓度配制定量限溶液。同法配制三份。 供试溶液：精确称取 1.0 g 样品到10 mL 容量瓶中，加稀释液溶解、定容。同法配制两份。
进样：空白溶液一针，对照品溶液进样六针，样品溶液两针，各回收率溶液各两针。
结论：平均回收率均在90 %~110 %之间，RSD 均不大于10
Tab.3 Quantitative determination of limited
溶剂名称水平% 浓度/(μg·mL-1) S/N
乙醇0.3 1.50 9.4
乙腈 3 1.22 9.7
二氯甲烷8 4.91 10.5
正己烷 3 0.87 10.0
异丙醚0.35 1.75 10.5
乙酸乙酯0.25 1.25 11.0
四氢呋喃 1.8 1.30 10.5
2.6 准确度试验(回收率)
200 %回收率储备溶液：
精确称取正己烷约58 mg，四氢呋喃约144 mg，二氯甲烷约120 mg，乙腈约82 mg，到已加有适量稀释液的10 mL 容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀作为对照品储备溶液。精确称取乙醇约100 mg，乙酸乙酯约100 mg，异丙醚约100 mg，到已加有适量稀释液的100 mL 容量瓶中，精密移取1 mL 对照品储备溶液到此容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀为200 %对照品储备溶液。
80 %水平回收率溶液：
精密称定约1.0 g 样品于10 mL 量瓶中，移取200 %回收率储备溶液 4 mL 于此容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。同法%，符合可接受标准。
3 讨论
由验证数据可以看出：
(1)该方法各溶剂彼此分离，分离度符合要求，系统适应性也符合要求。
(2)该方法线性较好，各溶剂线性相关系数R 均大于0.999。
(3)该方法各溶剂的平均回收率在90 %~110 %之间，相对标准偏差均不大于10 %。(4)该方法各溶剂的定量限水平浓度小于限度含量，该水平溶
液的进样精密度(RSD)均不大于10 %。结论：经过验证，该方法适用于阿戈美拉汀残留溶剂的测定。
参考文献
[1]国家食品药品监督管理局药品评审中心．编号：[H]GPH7-1 化学药物残留溶剂研究的技术指导原则．2005，3．[2]国家药典委员会．中国药典(2010 年版第二部)[s]．中国医药科技出版社，2010，31-32：194-195．
(本文文献格式：唐健，殷学治．气相谱法测定阿戈美拉汀的残留溶剂[J]．广东化工，2014，41(22)：215-216)
(上接第214 页)钢副框角码>糖炒栗子机
3 讨论
3.1 检测波长的选择配制对照品溶液，进行全波长扫描，结果
均为末端吸收，所
以选取210 nm 作为检测波长。
3.2 耐用性试验按测试方法制备系统适应性溶液，分别使用正
常流动相、不
同有机相比例的流动相、不同的柱流速以及不同波长，待仪器系统稳定后测试溶液，试验结果如表3。
表 2 回收率
Tab.2 The recovery r ate
名称杂质I 杂质II 回收率/%(n=9) 97.4 98.7 RSD/% 4.0 3.1
变化参数
表 3 耐用性结果
Tab.3 Results of durability
分离度理论塔板数N 拖尾因子T
正常条件流动相A 配比流速/(mL·min-1)
波长/nm
结果表明：说明检验方法的谱条件变化不大范围内对检测结果无明显影响。
(1)滤膜干扰试验：配制对照品溶液和供试品溶液，分别取初滤液、弃去1 mL/3 mL/5 mL 之后的滤液及离心过后的溶液进行分析，各结果的吸附率均小于2.0 %。
(2)本文利用二极管阵列检测器在200~400 nm 范围内进行扫描，对破坏试验中普瑞巴林主峰纯度进行检查，结果表明本法谱条件下能有效分离杂质，不影响测定。
参考文献
[1]赵立波，谢代鑫．抗癫痫新药普瑞巴林[J]．临床神经电生理学杂志，2008，17(3)：177-178．
[2]普瑞巴林胶囊说明书．
[3]肖健，曹杨远．H PLC 测定普瑞巴林含量．药物鉴定，2011，20(19)：23-24．[4]中国药典2010 附录．XIXA 药品质量标准分析方法验证指导原则．(本文文献格式：计莹，韩凤云．HPLC 法测定普瑞巴林胶囊的有关物质[J]．广东化工，2014，41(22)：214)
溶剂名称水平/%浓度/(μg·mL-1) S/N
乙醇0.1 0.50 3.4
乙腈 2 0.82 3.5
二氯甲烷 2 1.23 2.6
正己烷0.7 0.20 2.4
异丙醚0.12 0.60 2.8
乙酸乙酯0.12 0.60 2.9设备铭牌制作
四氢呋喃0.7 0.50 3.6
普瑞巴林杂质I 杂质II 普瑞巴林杂质I 杂质II 普瑞巴林杂质I 杂质II
- 12.5 38.5 10174 14119 42069 1.1 1.1 1.2 76∶24 - 12.3 39.3 11381 21894 39211 1.1 1.2 1.1
84∶16 - 13.6 40.0 8903 9509 41925 1.1 1.2 1.1
0.8 - 10.7 38.3 9549 12572 39838 1.1 1.2 1.1
1.2 - 11.7 38.1 9918 13471 41689 1.1 1.2 1.1
205 - 12.0 39.0 9343 14706 38991 1.1 1.2 1.1
215 - 12.8 38.5 10068 11516 40969 1.0 1.2 1.1
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