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实验二镜检技术
温调节不染的细菌标本的镜检，虽可观察细菌的大小、形态，但主要用于观察细菌的动力。（一）悬滴法
〖操作方法〗
1 取凹玻片，于凹窝内周围涂凡士林(可浆糊)少许。 挂马检测
3 将凹玻片反转，使凹窝对准盖玻片中央并盖于其上，然后翻转玻片，以小镊子或接种环
柄轻加压力，使盖玻片与凹窝边缘沾紧。如无凹玻片时，亦可在载玻片之适当位置上加凡士林，其中垫以其他物体，然后使盖玻片重叠于玻片之上。酒罐
4 将制好的悬滴标本置于显微镜载物台中央，先以低倍镜到悬滴的边缘以后，将集光器
下降缩小光圈，再换高倍镜观察。
〖结果〗有鞭毛的细菌为真正运动，无鞭毛的细菌则为布朗运动。
〖用途〗用以观察的形态及动力。
（二）悬滴法
〖操作方法〗
1用接种环取菌液（或将少许固体培养物悬于一滴生理盐水中）2-3环。置于载玻片中央。
2 用镊子夹好盖玻片、覆盖开菌液上，在放置时，先将盖玻片一边接触菌液，缓缓放一，
以不产生气泡为泡佳。
3 先以低倍镜好位置，再以高倍镜观察。
〖结果〗与悬滴法相同。排油烟气防火止回阀
〖用途〗用以观察细菌的形态及运动，本法较悬滴法简单，但标本容易干涸，不易长时间观
察。
二染标本的检查法
（一）细菌染的基本步骤
1涂片
1.1于洁净无油脂载玻片中央加一滴生理盐水。
1.2 用经火灭菌的接种环挑取标本少许，放在生理盐水滴内研匀涂成菲薄的菌膜，若为液
体标本，直接挑取少许涂抹即可。
1.3 若为多标本而行用一染时，可事先用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面标明
标本编号。
2干燥一般在室温中待其自然干燥，若须加速干燥，可在火焰上方的热空气中加温干燥，但切勿紧靠火焰，以防标本烤枯，不堪检视。
3固定固定的目的主要使细菌的细胞质凝固，杀死细菌，使菌体与玻片粘附得较牢，以及改变菌体对梁料的通透性，通常用加热法，即将涂片迅速通过火焰2-3次，以玻片反面触及皮肤，热而不烫为度。
4染将涂片置染架上，滴加染液以覆盖标本为度。
5媒染主要是增强菌体与染液间的作用力，其方法有用热、金属盐、碘等。
6脱目的在于测知染料与被染物之间结合的牢固程度，起鉴别鉴别细菌的作用，将脱剂（例如酒精和酸等）滴加于经过染的标本上，作用一定时间后除去脱剂。
7 复染目的在于使已脱的菌体重新染与前染液颜呈明显对比之颜。
8染标本的保存与封片法观察细菌染标本均用油浸镜。如需要保存标本，可于观察后，拭镜纸沾二甲苯轻轻将镜油擦去即可，若长期保留，最好于标本中央滴一滴加拿大
树胶，上覆盖一洁净载盖片。待其自然干燥后，保存于玻片盒内，可多年不变。（二）革兰氏染法
〖染液〗
1 结晶紫溶液称取结晶紫4-8g，溶于95%酒精100ml中，制成饱和液，再取饱和液20ml
与10g/L的草酸铵溶液80ml混合即成。编织袋折边器
2 卢戈氏碘液先溶碘化钾2g于10ml蒸馏水中，再加碘1g，待碘全部溶解后，加蒸馏
水200ml即成。
3 脱剂
(1) 95%酒精
(2) 丙酮乙醇溶液(95%乙醇70ml加丙酮30ml)。此两种脱剂均可应用，但混合脱剂比
单用95%酒精好，易于掌握，反应准确。
4 复染液
(1) 稀释石炭酸复红液：取萋-尼二氏抗酸染液中的石炭酸复红液(碱性复红酒精饱和液
10ml与5%石炭酸90ml混合)10ml加入蒸馏水90ml即成。
(2) 沙黄溶液(25g/L的沙黄乙醇溶液10ml加蒸馏水90ml)。
〖操作方法〗
1 将结晶紫染液滴加在已固定的涂片上，染1min后水洗。
2 加卢戈氏碘液适量，染1min后水洗。
3 用95%酒精脱，摇动玻片至紫不再为酒精脱落为止(根据涂片上之厚薄约需0.5-1min)
后水洗
4 用稀释石炭酸复红染30S至1min。
5 用水冲洗，待干，镜检。
〖结果〗革兰氏阳性菌染成紫，革兰氏阴性菌染成红。
〖注意事项〗
1新配制的染液应先用已知的革兰氏阳性菌和阴性菌（通常用金黄葡萄球菌与大肠杆菌的16小时培养物）进行对照试验。以检查染液的质量是否适用。
2 结晶紫与草酸铵溶液混合后不能保存太久。如有沉淀出现，应重新配制使用。
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