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DH5α
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Takara Code : D9057A 包 装 量 Competent Cells DH5α 100 μl × 10 支 Control DNA （pUC19，0.1 ng/μl ） 10 μl × 1 支 保 存 : -80℃ 制品说明 感受态细胞（Competent Cells ）是一种具有摄入外源DNA 能力的受容菌，它可以摄取外源的质粒DNA 等。在进行基因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。在制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况时，使用高效的感受态细胞显得十分重要。 Takara 公司在Hanahan 方法的基础上进行了改良，制备出了高效的感受态细胞（都为EK1系列的宿主大肠杆菌）。 Genotype F -,φ80d lac Z △M15, △(lacZYA-argF )U169, deoR , recA 1, endA 1, hsdR 17(r k -,m k + ), phoA , supE 44, λ-, th i -1, gyrA 96, relA 1 细胞种类 α-互补性选择宿主 E.coli DH5α E.coli DH5α在使用pUC 系列质粒载体进行DNA 转化时，由于载体DNA 产生的LacZ α多肽和DH5α编码的lacZ △M15相结合，从而显示β-半乳糖苷酶活性（α-互补性）。利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。DH5α可以用于制作基因库、进行亚克隆等，由于DH5α具有decR 变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。 细胞浓度 : 1～2×109 Bacteria/ml 质量标准 1. 使用1 ng 的质粒DNA 进行转化时： 100 μl Competent Cells DH5α/1 ng pUC19 Plasmid 进行转化时产生的菌落＞1×108 transformants/1 μg pUC19 Plasmid 2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认 对E.coli Competent Cells DH5α使用pUC19 DNA 进行转化后，在含有100 μg/ml 的Ampicillin 、40 μg/ml 的X-Gal 的L-琼脂平板培养基上，产生蓝菌落。 3. 100 μl 的E.coli Competent Cells DH5α在含有 100 μg/ml Ampicillin 的L-琼脂平板培养基上过夜培养40 hr 不产生菌落。 使用方法 质粒DNA 的转化方法* 1. 把感受态细胞置于冰中融化。 2. 把100 μl 的感受态细胞移至灭菌处理的试管内。 3. 加入用于转化的DNA （10 ng 以下）。 4. 冰中放置30分钟。 5. 42℃ 放置45～60秒。 6. 冰中放置2～3分钟。 7. 加入37℃预温好的SOC 培养基，使终体积为1 ml 。 8. 37℃振荡培养1小时（160～225 rpm ）。 9. 取适量涂布琼脂平板培养基。
10. 37℃过夜培养。
*：也可以使用以下快速转化方法，但效率会有所下降。 1. 取适量质粒加入到microcentrifuge tubes 中，冰上冷却2 min 。 2. 取100 μl 感受态细胞加入到上述microcentrifuge tubes 中，混匀 并冰浴5 mi
复方川羚定喘胶囊n 。 3. 在含有X-Gal 、IPTG 、Amp 的L-琼脂平板培养基上培养（平板 使用前需要在37℃预热30分钟），形成单菌落。计数白、蓝 菌落。 注意事项 1. 一定要用干冰运输。 2. 不立即使用的感受态细胞请在-80℃下保存（融化后的感受态细胞不能再冻结保存）。 3. 转化时请使用传热性能较好的试管。一般的 1.5 ml 微型离心管也可使用，但转化效率会有所下降（此时请在使用方法5.的42℃下放置60秒）。 4. 对100 μl 的感受态细胞，用于转化的质粒DNA 量请控制在10 ng 以下，并保证DNA 溶液的体积在20 μl 以下。否则会影响转化效率。 5. 使用SOC 培养基的地方也可使用 LB 培养基，但此时转化效率会有所下降。 6. 包装中附有0.1 ng/μl 的pUC19 DNA ，供作对照实验使用。 备 注
奶报箱V2012.01
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