一、红细胞渗透性试验
【目的】
通过红细胞渗透性实验，观察红细胞在不同渗透压的盐水中发生的变化，进而了解细胞外渗透压的相对恒定对维持细胞正常形态与生理功能的重要性。
【原理】
生理状态下，哺乳动物红细胞的渗透压与血浆的渗透压相等，约相当于0.9%NaCl溶液的渗透压，因此，将红细胞悬浮于等渗的NaCl溶液中，其形态与体积可保持不变。若将红细胞悬浮于低渗的NaCl溶液中，则水分过多进入红细胞，使之膨胀甚至破裂，血红蛋白释出，程之为红细胞溶血。红细胞对低渗溶液具有不同的抵抗能力，即红细胞具有不同的脆性，故临床上用不同浓度的NaCl溶液来测定红细胞的渗透脆性。对低渗NaCl溶液抵抗力小，表示红细胞的渗透脆性大；对低渗NaCl溶液抵抗力大，表示红细胞的渗透性小。开始出现溶血时的NaCl溶液浓度，为红细胞的最小渗透抵抗力。正常人红细胞的最小渗透抵抗力为0.42%～电磁线圈
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6%NaCl溶液，最大渗透抵抗力为0.32%～0.34%NaCl溶液。刚成熟的红细胞渗透脆性小，而衰老的红细胞渗透脆性较大，遗传性球形红细胞增多症患者，红细胞渗透性增加。生理学上将能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形状的溶液，成为等张溶液。等张溶液一定是等渗溶液，但等渗溶液不一定是等张溶液。
【器材与药品】
试管架、小试管、2ml注射器、滴管、棉签、1000U/ml肝素、1%NaCl溶液、蒸馏水、碘酒、75%乙醇、人或兔血等。 【步骤】
1、制备不同浓度的NaCl溶液
取试管12支，做好编号，依次排列在试管架上，按表3-7-1配备不同浓度的NaCl溶液。
2、人或兔血的制备
（1）先在试管内加入0.2ml1000U/ml肝素（抗凝剂），取人（或兔）血6炸薯条机，加入盛有抗凝
剂的试管里，混匀备用。
（2医用洗手刷）取人血的方法：先用碘酒、75%乙醇消毒皮肤后，再用灭菌干燥的注射器从肘正中静脉取血6ml。
表3-7-1 不同浓度NaCl溶液的制备
试管编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
1%NaCl | 1.70 | 1.60 | 1.50 | 1.40 | 1.30 | 1.20 | 1.10 | 1.00 | 0.90 | 0.80 | 0.70 | 0.60 |
蒸馏水 | 0.80 | 0.90 | 1.00 | 1.10 | 1.20 | 1.30 | 1.40 | 1.50 | 1.60 | 1.70 | 1.80 | 1.90 |
NaCl浓度（%） | 0.68 | 0.64 | 0.60 | 0.56 | 0.52 | 0.48 | 0.44 | 0.40 | 0.36 | 0.32 | 0.28 | 0.24 |
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（3）取兔血的方法：
①心脏采血：将兔仰卧固定，剪去左侧相当于心脏部位的皮毛，用碘酒和75%乙醇消毒皮肤，选择心脏跳动明显处作穿刺。一般由锁骨左边缘外3cm处刺入兔的第3肋间隙。穿刺时，
最好用左手触诊心脏以作配合。当针头接近心脏时，就会感到心脏的搏动，血液自然进入注射器。如认为针头进入心脏但抽不出血液，可把针头稍微退出或进入一点。心脏采血经6～7d恢复后，可以重复进行。兔一次采血量可达20～25ml。
②兔耳中央动脉采血：将兔置于固定箱内，用酒精棉球擦揉兔耳片刻，使其充血。在兔耳中央有一条纵行、较粗、颜鲜红的中央动脉。用左手固定兔耳，右手持注射器。在中央动脉末端，沿动脉平行地向心脏方向刺入动脉，轻轻抽动针筒，即可见血液进入注射器。一次可采血约15ml（采血后应注意止血）。采血一般采用6号针头，不可太细。需要注意的是兔耳中央动脉易发生痉挛性收缩，因此，采血前必须使兔耳充血。当动脉扩张未发生痉挛性收缩前立即进行，抽血的时间过长，动脉血管会发生较长时间的收缩，采血难以进行。
3、红细胞悬液的制备
用滴管向每支试管中滴加人或兔血1滴，摇匀，静置半小时后观察各管的颜、透明度有何差别。
按下列标准判断有无溶血、不完全溶血或完全溶血：
（1）上层清液无，管低为混浊红，表明没有溶血。
（2）上层清液呈淡红，管低为混浊红，表明有部分红细胞破裂溶解，为不完全溶血。这代表红细胞的最小渗透抵抗力。
（3）管内液体完全变成透明的红，管低无细胞沉积，为完全溶血。这代表红细胞的最大渗透抵抗力。
【注意事项】
（1）试管一定要编号，避免混淆。
（2）配备不同浓度的低渗溶液时，小试管应干燥。
（3）加抗凝血量一定要准确一致，只加一滴。
（4）混匀时，用手指堵住试管口，轻轻倾倒1～2次，减少机械振动，避免人为的溶血。
（5）抗凝剂最好用肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透压。
（6）抽取静脉血时动作要缓慢，向试管滴加血液时要靠近液面轻轻滴入溶液中，避免人为造成红细胞破裂而出现假性溶血。
（7）观察结果应在光线明亮处，必要时吸取试管底部悬液1滴在显微镜下观察。不良图片过滤
二、血浆的缓冲性质试验
【目的】
了解血浆对酸碱的缓冲能力和血浆在维持内环境PH中的作用。
【原理】
体内细胞机能的正常进行要求内环境必须保持相对稳定性。在正常情况下，血液中存在着一个由许多缓冲对组成的完整的缓冲系统，每一缓冲对是由一种弱酸与这种弱酸的盐按一定的比例组成，对进入机体的酸性或碱性物质具有中和作用。机体在代谢过程中不断地产生的二氧化碳和酸性物质进入血液后，能够得到及时的中和，从而保持血液正常的PH。血浆内环境的维持主意取决于NaCO3/H2CO3的浓度比例。
【器材与药品】
试管、滴定管、玻璃棒、注射器、离心机、甲基橙、酚酞试剂、0.1mmol·L-1盐酸溶液、0.1 mmol·L-1氢氧化钠溶液、蒸馏水、生理盐水、抗凝剂（1000U/ml肝素：1支2ml12500 U甘肃，加生理盐水10.5ml混匀）。
【步骤】
（1）将5ml的血液装入离心试管中，并放进离心机内进行离心沉淀，使血浆与血液形成分离。将已分离出来的血浆倒入试管中，以备用。
（2）取3支空试管并编号，然后分别向1号管注入1ml连续流砂过滤器蒸馏水；2号管注入1ml生理溶液，3号管注入1ml血浆。
（3）向3支试管中各加入甲基橙指示剂1滴。
（4）用滴定管向滴有血浆的试管即3号试管中逐滴加入0.1mol·L-1的盐酸溶液，同时记下盐酸溶液的滴数，并注意观察试管中血浆颜的变化，待血浆呈酸性反应时，即甲基橙由
黄变为红，记录共需盐酸的滴数。
（5）方法同上，分别向装有生理盐水（2号管）和蒸馏水（1号管）的2支试管中滴加0.1 mol·L-1溶液，待液体呈酸性反应，即甲基橙由黄变为红，记录共需盐酸的滴数。
（6）比较3支试管中的甲基橙变为红所需要的盐酸溶液的滴数，则可以看到血浆呈酸性反应所需要的盐酸溶液的数量比蒸馏水和生理盐水多。
（7）另取3支空试管分别放入等量（1ml）的血浆、蒸馏水和生理盐水溶液。方法同上，用酚酞试剂作指示剂和0.1mol·L-1氢氧化钠溶液滴定时，则可看到血浆呈碱性反应，酚酞变为紫红所需的氢氧化钠溶液的数量比生理盐水和蒸馏水多。
【注意事项】
（1）用作滴定酸和碱的滴定管要分开使用。
（2）用作搅拌每支试管溶液的玻璃棒不得混用。
（3）加酸或加碱时，要边滴定、边搅拌、边观察颜变化。
【作业与思考题】
1、输液时为什么要用等张溶液？
2、红细胞的形态特点与生理功能有何联系？
3、根据结果分析血浆晶体渗透压保持相对稳定的生理意义。
4、不同强度的运动对血液酸碱度有何影响？
5、不同强度的长期运动对血浆的缓冲能力有何影响？
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