1、在血型鉴定及交叉配血时，工作人员必须有高度责任感，严格“三查七对”。
2、所用试剂要有三证，要有防伪标记。
3、不同批号试剂使用前要做一次新老试剂对照试验，合格后方可使用。 4、试剂在使用中当发现凝集效价降低时，对结果观察带来困难时，应查原因，或弃去不用。 5、碰到ABO血型罕见亚型时，不要草率报告，应报告科主任，共同核实后方可下结论。
6、在交叉配血中逐一填写ABO正反型和RH试验结果，最后综合反应结果做出结论,在发出报告单前还需审核一遍。
7、交叉配血用原始标本须保存一周，以便发生输血反应时，查原因。
ABO血型鉴定标准化操作规程
1. 检测原理：
根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。 2. 标本采集与处理
2.1受检者的准备
病人不需空腹，根据病情随时可抽血检测。
2.2静脉采血
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 标本的处理
血标本室温放置30min～45min（或在37℃水温箱放置20分钟）后离心分离血清，置洁净试管加盖低温（4-8℃）保存
3. 试剂和材料
3.1抗A、抗B血型定型试剂。（单克隆抗体）
3.2 献血员5%红细胞盐水悬液；
3.3 受检者血清；
3.4 受检者5%红细胞盐水悬液。
4.方法
4.1玻片法：
4.1.1取清洁玻片1张（或用白瓷板1块），用蜡笔标明抗-A、抗-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B分型血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴，混和。
4.1.2取洁净玻片一张（或白瓷板1块）用蜡笔标明A细胞、B细胞，然后分别滴加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B红细胞悬液1滴。将玻片不断轻轻转动，使分型血清与红细胞充分混匀。连续15min，以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。
4.2试管法
4.2.1 取洁净小试管2支，分别标明抗-A 和抗-B，分别滴加抗-A和抗-B分型血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴，混和。
4.2.2 另取洁净小试管2支，分别表明A、B细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别滴加入A、B型5%试剂红细胞悬液1滴，混和。4.2.3 立即以1000r/min离心5min。
4.2.4 将试管轻轻摇动，使沉于底部的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
4.2.5 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B自动检测系统亚型、类B的发现。
5. 结果判断
凡红细胞凝集成大块者，为凝集；仍分散着，为不凝集。凝集者用“+”表示，不凝集者，用“-”表示。
6. ABO血型正反定性结果，见下表
ABO血型正反定性结果表
分型血清+受检者红细胞 受检者血清+试验红细胞
受检者血型
抗-A+抗-B 抗-A 抗-B A型细胞+B型细胞 A型细胞 B型细胞
+ + - A - - +
+ - + B - + -
+ - - O - + +
+ + + AB - - -
7.正反定型结果不一致的原7.1分型血清效价太低、亲和力不抗-A血清效价不高可将A亚型误定为ca1214O型，AB型误定为B型。
7.2红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。
7.3受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及类B等。
7.4受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。
7.5受检者血清中缺乏应有的抗-A及/抗-B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。
7.6各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶
性血型物质中和了相应的抗体。
7.7由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。
7.8血清中有意外抗体，如自身抗-I，常引起干扰。
7.9老年人血清中抗体水平大幅度下降。
8正反定型结果不一致的解决办法：
如发现ABO正反定型结果不一致，首先要重新作实验一次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步研究。初步的检查步骤包括：
8.1另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。
大规模生产8.2将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗-A、抗-B作试验可以得到其它有用的信息。
8.3对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。
8.4用A、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如怀疑是抗-I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。
8.5如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃
放置30min，用显微镜检查核实。
8.6如凝为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗-A或抗-B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作身份证保护A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。
8.7如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混合，往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。
8.8如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用以下方法进行鉴别：
8.8.1观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要于抗-B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。
8.8.2用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。
8.8.3检查液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。
8.8.4核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。
8.9如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点：
8.9.1能被人和许多家兔的血清凝集。
8.9.2能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。
8.9.3不被脐带血清凝集。
8.9.4通常不与自身的血清凝集。
8.9.5如有条件可用外源凝集素加以鉴别。
RH(D)血型的签定
方法：
1、取5%红细胞盐水悬液1滴加抗-D标准试剂1滴（1：1）加入混匀离心沉淀1000g/10秒。
2、结果观察：
出现凝集反应为RH阳性，不出现凝集反应为RH阴性。
3、RH血型范围：
RH血型阳性率高，据统计达99%以上，RH血型阴性率低，据统计达1%以下。
交叉配血试验
1. 检测原理
根据红细胞ABO血型系统，红细胞有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A自行葫芦型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，在盐水或胶体介质中，利用抗原抗体反应，将献血员红细胞和病人血清设为主侧，将献血员血清和病人红细胞设为次侧。在同型输血的条件下，主次侧试验均无凝集为配血合格。
2. 标本采集与处理
2.1受检者的准备
病人不需空腹，根据病情随时可抽血检测。
2.2静脉采血
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 标本的处理
血标本室温放置30min～45min（或在37℃水温箱放置20分钟）后离心分离血清，置洁净试管加盖低温（4-8℃）保存
3. 试剂
3.1抗A、抗B血型定型试剂。（单克隆抗体）
3.2 献血员5%红细胞盐水悬液；
3.3 受检者血清；
3.4 受检者5%红细胞盐水悬液。
4. 仪器
目视显微镜及离心机
5.交叉配血方法
5.1 盐水介质配血法
本法是目前常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO不配合性。当受血者和供血者细胞经混合并离心后，如有ABO不配合问题，就会很快显示出来，所以常称为“立即离心”配血试验。
5.1.1抽取受血者静脉血3～4ml，待凝固后分离血清，并将红细胞配成2%盐水悬液。
5.1.2将供血者血样以同样方法分离血清，并配制2%红细胞悬液。
5.1.3取洁净小试管2支，1支标明主侧（受检者血清+供血者红细胞）；另一支标明次侧（供者血清+受者红细胞）。
5.1.4按标记主侧管放1滴受血者血清，加供血者红细胞悬液1滴。次侧管放供血者血清1滴，加受血者红细胞悬液1滴。混匀，以1000r/min离心3～5min，轻轻侧动试管，观察结果。冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。
6. 结果判断:
ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血及凝集表示无输血禁忌,可以输血。如急需输血但一时无同型血液，作异型配血时主侧试验无溶血及凝集，但次侧必然有凝集或溶血。故实际上不必再做次侧交叉配血试验，如发现次侧无凝集，应进一步分析原因。如因故急需进行异型输血，应检查供血者血清中抗A（B）效价，如效价＜200、无溶血者，可给予少量输血。
7. 交叉配血试验中的配血不合问题
交叉配血试验中发现有不配合时，首先应考虑受血者和供血者的ABO定型是否错误，必要时进行Rh飞行模拟舱血型鉴定及抗体筛检。其次，应注意有无特异性同种抗体、特异性未知的同种抗体存在，或者患者的血清在室温37℃或抗球蛋白血清中凝集所有的其他红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步作有关试验进行鉴定。
8.注意事项
血液样本的保留和存放：受血者和供血者的血样必须密封或盖紧，在每次输血后，在2～6℃保存至少3～7天。如患者在输血中发生不良反应，或在输血后数天内发生迟发性溶血性输血反应时，保留的患者和供血者的血样就有可能要重做或追加试验，必要时对发生溶血性输血反应的患者重新采取血样与输血前患者血样同时检查，以资比较。
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