试剂名称:izo4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠:40ml
500ml配方
所需药品及剂量:A液:多聚甲醛 20g 溶于200ml蒸馏水
B液:Na2HPO4·2H2O 3.44g溶于150ml蒸馏水
C液:NaOH 1.93g 200ml蒸馏水
操作过程
A液最好在500ml的三角烧瓶中加热配制(低温比较难溶),至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后,将B液倒入C液中,混合后再加入A液,将pH调至7.2~7.4,最后,补充蒸馏水至500ml充分混合。 或者将多聚甲醛 20g、Na2HPO4·2H2O 3.44g、NaOH 1.93g直接溶于500ml时子环蒸馏水,将pH调至7.2~7.4即可。
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液(配制it运维系统详细设计
1L溶液各成分的用量) Tris碱 54 g
硼酸 27.5 g
双列角接触球轴承EDTA 2.92 g
实际配500ml,那么Tris碱27g, 硼酸 13.75g,EDTA 1.46g
Western bloting
10%分离胶(两块胶,15ml ) | 4%浓缩胶(两块胶,5ml) |
超纯水 | 6ml | 超纯水 | 3.2ml |
40%Acr/Bic(37.5:1) | 5.25ml | 40%Acr/Bic(37.5:1) | 0.55ml |
LT | 3.75 | HT | 1.25 |
10%AP | 80 l | 10%AP | 50 l |
TEMED | 7.6 l | TEMED | 12.5 l |
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Running buffer (1×): Trisbase 3.03g;
Glycine 18.8g;
SDS1.0g加水至1L
可以配成5×(5×电泳缓冲液配方:总量为1L;15.1g Tris 碱;72.0g 甘氨酸;5.0g SDS)
Transfer Buffer (1×): 甘氨酸2.9g
Tris(MW121.14) 5.8g
SDS 0.37g
甲醇 200ml,加蒸馏水至 1000ml 溶解后4℃保存,溶液可重复使用2-3ktkp-073次。 (可以配制成10×Transfer Buffer进行保存,稀释10倍使用,再加甲醇) TBS缓冲液(1×): 1 mol/L Tris·HCl(pH7.5) 10ml NaCl 8.8g 蒸馏水至 1000ml
(可以配制成10×TBS缓冲液进行保存,稀释10倍使用)
TBS配方(10*):
Tris 12.1g, NaCl 88 g蒸馏水至 1000ml + 6ml 浓HCl
马达驱动TBST配方:按照1:1000体积比例加入Tween 20。
封闭液(5%): 脱脂奶粉 5g 溶于TBST 100ml
4×Lower Tris, 500ml:90.83g Tris base,20ml 10%SDS,adjust PH to 8.8(浓盐酸12ml)
4×upper Tris, 200ml:12.12g Tris base,8ml 10%SDS,adjust PH to 6.8(浓盐酸8ml)