核糖核酸(rna)的提取方法

专利名称

：核糖核酸(rna)的提取方法

技术领域

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本发明涉及一种RNA(核糖核酸)样品的制备方法，适用于生物样品，特别是从海产品中提取RNA的方法。
现有的从海产品中提取RNA(核糖核酸)样品的方法有美国德州baylormedicalcallge的分子病毒学研究中心的Robertl，Atmar等人在“Appliedenvironmentalmicrobilogy”vol59，NO.21993。发表的用PCR检测贝类病毒方法，这种方法采用有机絮凝作用和聚乙二醇沉淀法提取RNA样品，其方法较复杂且耗资大。
本发明旨在提出一种快速、简便的提取海产品，特别是贝类产品中的RNA的方法。
本发明提出的提取RNA的方法包括1、从新鲜海产品、如贝类、虾类中摘取内脏，低温保存，(可选择4℃至-70℃)。
2、取上述低温保存的样品若干，置入碱性缓冲液中匀浆、摇匀、离心使颗粒物沉淀，3、往上清中加入6-12%聚乙二醇，混匀，在0℃-6℃中放置2小时以上，4、分离去上清，将沉淀物溶于碱性缓冲液中，混匀，去不溶物。
5、往上清中加入有机酸(可选用5-10%的三或三氟乙酸或0.5-1%磺基水杨酸)，使蛋白质变性，然后析出变性蛋白，高速离心，使不溶物沉于管底。
6、按常规方法沉淀、洗涤、干燥溶液中的RNA样品。
上述碱性缓冲液可优先选用Tris或甘氨酸或磷酸盐等，PH值7.5-11，浓度0.05M-0.5M。
本发明公开的提取RNA的方法快速、简便、仅需8-10小时即可完成。特别是能从大样中提取微量的RNA。用本法提取海产品中的RNA不含有破坏RNA和抑制逆转录及PCR反应的因子，为使用RT-PCR检测法提供理想、合格的RNA样品。
以下结合实施例对本发明作进一步描述。
本实施例是从新鲜贝类或虾中提取甲肝病毒的RNA或肠道病毒的RNA。具体步骤如下1、从新鲜贝类或虾样品中摘取内脏，置-20℃保存。
2、称取样品10克，置入100ml0.05M甘氨酸，0.15MNaClpH9.5中匀浆，振摇10分钟，12000rpm离心20分钟。
3、往上清中加入8克聚乙二醇，混匀。4℃放置2小时以上。
4、12000rpm离心10分钟。去上清，沉淀溶于10ml0.1MNaCl·0.05MTris-HClpH9.5中，混匀。20000rpm离心20分钟。
5、向上清中加入1ml50%三，煮沸10分钟，冰浴10分钟。20000rpm离心10分钟。上清移入另管中。
6、加1ml3M乙酸钠pH5.0，再加入2.5倍的乙醇。离心后，沉淀用70%乙醇洗涤，干燥，即得RNA样品。
7、将RNA样品溶于10-20微升水中，-70℃保存即可。

权利要求

1.一种RNA的提取方法，适用于生物样品，特别是从海产品中提取RNA的方法，包括以下步骤1)取新鲜海产品的内脏，低温保存，然后，2)置入碱性缓冲液匀浆，摇匀，离心使颗料物沉淀，然后，3)往上清中加入聚乙二醇，混匀，在0℃-6℃中放置2小时以上，然后，4)分离去上清，将沉淀物溶于碱性缓冲液中，去不溶物，然后，5)往上清中加入有机酸，去不溶物，然后，6)上清中的RNA按常规方法沉淀，洗涤、干燥。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是采用的有机酸可以是5-10%的三或5-10%的三氟乙酸或0.5-1%磺基水杨酸。