篇一：柱层析实验报告
微波热疗机柱层析分离素
一、【实验目的】
1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
二、【实验原理】
叶绿体素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、
胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离叶绿体素是对其认识和了解的前提。利
奶茶杯架用叶绿体素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。 分离素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。柱层析法是谱法中的一种，它是根据
混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分 离。常用的柱谱有吸附柱谱和分配柱谱两类。 吸附柱谱通常是在玻璃管中填入表面
积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液
流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。由于不同化合
物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速
度下移，形成带。继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过
程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。 本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体素的石油醚
提取液倾于吸附柱上，素即被吸附。由于素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附
柱上排列成为不同的层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行
洗脱，从而达到叶绿体主要的4种素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
挑战者360三、【实验材料】
原料：
新鲜的菠菜叶
试剂 ：
1． 无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝
2． 石英砂 6．饱和氯化钠溶液
3． 丙酮7.水硫酸钠
4． 石油醚（电子盲人导航仪60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材 ：层析柱（1×30cm）， 研钵， 蒸馏装置， 脱脂棉， 天平， 烧杯，过滤漏斗，玻璃棒， 锥形瓶， 分液漏斗， 试管 ，铁架台
四、【实验操作】
1． 素的提取：
20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，
滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤
液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20
毫升水震荡洗涤几次，直至下层无，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干
燥5分钟，备用.
血仓
2．样品的浓缩：
将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
3．层析拄的制备：
15克碱性三氧化二铝加入30毫升石油醚搅拌，浸泡10min.。在层
析拄内加入一团棉花在底部，再加入石英砂家家乐酸奶发酵剂0.5cm以上，然后用石油醚半充满柱子，再
将浸泡好的三氧化二铝倒入柱内，倒时应该缓慢，重复使用下面的石油醚，直到装完。用石
油醚洗柱内壁，顶部加一小团棉花，然后再填入石英砂0.5厘米高。
3．样品的分离层析：吸附层析分离素 打开层析拄下部开关，向拄内加入2毫升浓缩液，至液体没入砂内， 再加入石油醚冲洗拄壁，液体浸入砂内，加洗脱液开始层析，可以看到不同带如图片
1，直至第一条带洗脱完毕，在拄下面用试管接收第一条带的洗脱液，如图片2。
五、【实验结果】
实验结果如下图：图一：层析柱中出现黄带 图二：提取出的黄胡萝卜素 结果分析：
洗脱过程中，首先有一条黄的带圈沿着层析柱下移，带圈的各个方向的移动速度
并不是完全相同，原因在于层析柱的制作过程并不完全均一，使层析柱内部不均匀，以至于
带各方向的移动速度不同。最后收集得到亮黄的胡萝卜素。
七、【注意事项】
1、萃取时不要剧烈振荡，以防止发生乳化现象。
2、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的，否则当柱中溶
剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗透和显的均一性。因此要保证整个装样过程中
溶剂要高于三氧化二铝的表面。
3、在吸附剂上端加入脱脂棉（或滤纸）是使加样品时不致把吸附剂冲起；在吸附柱下端
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