城肉食品加工有限公司化验室 作业指导书 | 文件编号 | 渣土车管理系统LC/CEC-05 | ||
版本/修订 | A/0 | |||
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1 范围 参考文献农业部《关于加强兽药残留检测试剂（盒）管理的通知》，（农办医（2005）3号的要求，该试剂盒2007年6月在农业部实行了备案（中华人民共和国农业部公告第866号文件）。 本方法可定性，定量检测动物源性食品中7种磺胺类残留量。 2 检测项目 磺胺“七和一”（磺胺间甲氧嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺噻唑，酞酰磺噻唑，磺胺甲噻二唑，磺胺吡啶） 3 原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留物磺胺间甲氧嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺甲噁唑，磺胺噻唑，酞酰磺噻唑，磺胺甲噻二唑，磺胺吡啶与微孔条上预包被偶联抗原竞争抗七者的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显，样本吸光值与其所含磺胺类药物的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中磺胺类药物的残留量。 4 试剂和材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为蒸馏水。 4.1 96孔酶标板（包被有偶连抗原） 4.2 标准液6瓶：0ppb,2ppb,4ppb,8ppb,16ppb,32ppb 4.3 高浓度标准品：1 ppm 4.4 酶标二抗 | ||||
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标题：磺胺类药物残留量检测方法 ELISA方法 | ||||
4.5 抗体工作液 4.6底物A液 4.7 底物B液 4.8 终止液 4.9 20*浓缩洗涤液 4.10 20*浓缩提取液 4.11 洗涤工作液的配制：用去离子水将20*浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。 4.12提取工作液的配制：用去离子水将20*浓缩提取液按1：19体积比进行稀释用于样本的提取，提取工作液在4℃环境可保存一个月。 5 仪器和设备 5.1 ST-360酶标仪。 5.2 离心机 5.3 旋涡振荡器 5.4 均质机 5.5 DSY-Ⅲ氮吹仪 5.6 电子天平 5.7 空气压缩机 5.8 样品瓶三维网页:2ml,带聚四氟乙烯旋盖 | ||||
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标题：磺胺类药物残留量检测方法 ELISA方法 | ||||
5.9 聚四氟乙烯离心管:50ml 5.10 单道移液:20~200μL,100~1000μL 5.11 多道移液：250μL 5.12 刻度移液管：10 ml 5.13 恒温培养箱 叶片锁6 样品制备 6.2试样保存：将试样于-20℃下保存。 7测定步骤 7.1提取 称取试样2g(±0.05),置于50ml的离心管中,加入10mL提取工作用力震荡10分钟混匀，放入37℃恒温箱，30分钟后取出以4000转／分离心10分钟.取上清夜50μL 用于分析。 7.2 测定前须知 7.2.1 使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25℃）。 7.2.2 使用之后立即将所有试剂放回2~8℃. 7.3 测定 7.3.1 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做两孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置。 | ||||
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标题：磺胺类药物残留量检测方法 ELISA方法 | ||||
7.3.2 加标准品/样本：加标准品/样品20μL到应对的微孔中，再加入抗体工作液80μL/孔，轻轻震荡混均，用盖板膜盖板后，置25℃避光环境中反应30分钟。 7.3.3 洗板：小心揭开板膜，将孔内的液体甩干，用洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10秒，用吸水纸拍干。 7.3.4 加酶标二抗：加入酶标二抗100μL/孔，轻震混均，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应20分钟，取出重新洗板拍干。 7.3.5 显：加入底物A液50μL/孔，再加入底物B液50μL/孔，轻震混均用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15分钟。 7.3.6 测定：加入终止液50μL/孔，轻轻震荡混均，设定酶标仪（双波长450/630nm），测定没孔OD值。 7.4 结果：酶标仪导出数据经试剂盒专业分析软件进行计算，直接读取样本结果。 7.5测定低限：本方法测定样本最低检测限为4ppb. | ||||
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