阳离子交换树脂如何进行前处理
你先用乙醇浸泡,然后用5%盐酸洗涤至强酸性,用蒸馏水洗涤至中性,在用5%氢氧化钠洗涤至强碱性,然后水洗至中性,酸-水-碱-水,洗涤三次,然后洗涤至强酸性,蒸馏水洗涤至中性,就可以使用了
732阳离子交换树脂的活化方法
阳离子交换树脂,可在体内活化活化.液用量为树脂体积的2倍.活化液用浓度为3.0MOL/L的盐酸配制,以1.2-4.0M/H的流速通过树脂层，再采用体积为树脂体积的1-2倍、浓度为2.0-2.5MOL/L的硫酸浸泡3H以上
732阳离子交换树脂如何转型
阳树脂分弱树脂和强树脂两大类。分子式H-R（当然也可以是Na-R型）, H就是氢离子。树脂高度约0.8米到1.6米。当水从上向下，通过树脂层时，水中的阳离子与树脂的H离子发生交换，树脂最上层是铁钙镁离子，接着是钾钠氨离子。
出水水质是酸性的，PH值一般小于3。当运行约一天左右时，出水开始出现钠离子，表示反应到了终点，需要用酸（HCl）反洗，将钠钙离子再置换出来。 再生方法是用水泡3天在加7%盐酸泡2天然后用的，盐酸是36%分析纯的。
刚开始的时候应该先用10%食盐水泡一天，再用水洗至清液，然后用7%盐酸泡一天，用水洗到中性
谷氨酸等电点3.22
磷酸酯酶临床试用于迁延性肝炎、慢性肝炎、早期肝硬化、心血管系统疾病、
胶原性硬皮病、小儿顽固性牛皮癣、再生性障碍性贫血、白血球减少症及矽肺的
辅助，对于促进或调节人体的正常代谢及以上疾病有较好疗效，且无副作用。
酸性磷酸酯酶（Acid pHospHatase E.C.3.1.3.2）广泛分布于动物和植物中，
植物的种子、霉菌、肝脏和人体的前列腺中。它对生物体核苷酸、磷蛋白和磷脂
的代谢，骨的生成与磷酸的利用，都起着重要的作用。
酸性磷酸酯酶是酶动力学研究的好材料。它能专一性水解磷酸单酯键。本实
验选用绿豆芽做材料，运用一系列的提取手段，从中提取磷酸脂酶。
一、实验目的
系统地学习酸性磷酸酯酶粗酶液的制备方法
二、实验原理
绿豆芽细胞破裂后，磷酸脂酶溶于水中，离心分离后得磷酸脂酶原液。
三、实验材料
绿豆芽
四、仪器设备
冷冻离心机、研缸、冰箱
五、实验器皿
石英砂、50容量瓶、冰盘、剪刀、纱布
六、实验步骤
1、萌发5天的绿豆芽，剪去叶、根和头部，取豆芽茎，蒸馏水洗净，置吸
水纸上吸干表面水分，准确称取25g，剪成小段，置研缸中，加少量蒸馏水及少
许石英砂，在冰盘中研磨成匀浆。
2、将绿豆芽匀浆用纱布过滤，去残渣，滤液置冰箱中静置1h充分提取，然
后滤液再6000r/min冷冻离心20—30min，弃去沉淀，上清液再过滤至50ml容量
瓶中，用蒸馏水沉淀至50ml，所得澄清原酶液置冰箱备用。
七、思考题
提取酶活时，为减少酶活损失，操作时有哪些注意点？
实验六pH 对酶活力的影响——最适pH 的测定
影响酶促反应的因素有底物的浓度、温度、pH、抑制剂及激活剂。 pH 对酶活力的影响极为显著。酶表现其最高活性时所处的pH 即酶的最适
pH，因为通常各种酶只在一定pH范围内才表现它的活力；一种酶在不同pH条
件下所表现出来的活性不同。
pH 之所以对酶活性有很大影响，很可能是因为它改变了酶活性部位有关基
团的解离状态。在最适pH时，酶分子上活性基团的解离状态，最适于酶与底物
的结合；而高于或低于最适pH时，酶活性部位基团解离状态不利于酶与底物的
结合，酶活力也相应降低。pH 也可影响底物的解离及反应系统中其它组分的解
离。缓冲系统的离子性质和离子强度，也可能对酶反应产生影响。另外，pH 除
了对酶活性有很大影响外，对酶的稳定性也有很大影响。过高过低的pH会改变
酶的活性中心的构象，或甚至改变整个酶分子的结构使其变性失活。
对苯乙烯磺酸钠一、实验目的
1.本实验考察pH对酶活力的影响；
2.通过pH~酶活力曲线得制作，求出酸性磷酸脂酶的最适pH。
二、实验原理
本实验通过配置一系列不同pH值的缓冲试剂，再将酶加入各缓冲试剂中，
以维持一定的pH值，再分别加入底物β—甘油磷酸钠，酶使β—甘油磷酸钠催
化水解成β—甘油和磷酸氢根离子，反应一定时间后，加入10%三终止反
应。再加入定磷试剂，磷酸氢根离子与定磷试剂反应生成钼蓝，产生的钼蓝在
660纳米处有最大吸收，吸光度的大小在一定范围内与无机磷酸含量成正比，因
此可用光密度O.D 值代替酶活性，作出O.D~pH 曲线，从曲线上可知表现其最
高活力时所处的最适pH值。
三、实验材料
酸型磷酸脂酶原液
四、仪器设备
恒温水浴槽、秒表、721型分光温度计；
五、实验药剂
_________（1）0.01Mβ—甘油磷酸钠；
（2）0.1NHCl；
21
(3) 8.5%NaCl溶液；
(4) 10%三；
(5) 0.143M—醋酸钠溶液:称取4.875gNaAc?3H2O 和7.357g钠，溶
于500ml蒸馏水中。
(6)系列pH值-醋酸缓冲液:取25ml容量瓶6个，各加入5ml0.143M巴比
妥-醋酸钠溶液和2ml8.5% NaCl溶液，再按下表加入0.1N HCl，摇匀后，用pH
计测定pH值，并用0.5 N HCl或0.5N NaOH 调节至所需pH值，最后用蒸馏水
定容至刻度。
pH 0.1 N HCl(ml) pH 0.1 N HCl(ml)
3.5 15.0 5.0 8.0
4.0 12.0 5.5 7.0
4.5 10.0 6.0 6.0
六、实验步骤
取12 支10ml 离心管，编号，按下表操作:
pH3.5 pH4.0 pH4.5 试管编号pH5.0 pH5.5 pH6.0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
-醋酸缓冲液（ml） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
酶液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
10%三（ml） 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0
摇匀后，在35℃水浴中保温5min
β-甘油磷酸钠（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
摇匀后，在35℃水浴中准确反应10min
10%三（ml） 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0
取出后，冷却至室温，4000r/min离心5min备用。
取12支10ml刻度试管，编号，按照下表加入对应酶反应液和试剂，摇匀后，
在45℃水浴中保温20min；以奇数管为对照，测出偶数管的值。
试管编号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
对应酶反应液（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
H2O（ml） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
剑式机器人定磷试剂3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
O.D660
七、实验结果与分析
以酶活力(O.D600值代替)为纵坐标，pH值为横坐标，绘出O.D600~pH曲线，
求出最适pH。
22
八、思考题
pH值影响酶催化的机理是什么？
23
实验七温度对酶活力的影响—最适温度的测定
温度对酶活力的影响有双重作用。一方面，温度加速酶反应的速度；另一方
面，酶是蛋白质，温度升高会加速酶蛋白的变性。因此，在较低范围内酶反应速
度随温度升高而增大；超过一定温度后，反应速度下降，酶反应速度达到最大值
时的温度称最适温度。如果保持其他反应条件恒定，而在一系列变化的温度下测
酶活力，再以温度为横坐标，酶活性为纵坐标作图，可得一条温度—酶活力曲线，
从中可求得最适温度。
一、实验目的
通过温度~酶活力曲线的制作，求出酸性磷酸脂酶表现活力的最适温度
巡线机器人
二、实验原理
本实验通过将酶加入pH5.0的-醋酸缓冲液中，以维持一定的pH值，
再将试管分别放在一系列温度的恒温水浴槽中保温，加入底物β—甘油磷酸钠，
酶使β—甘油磷酸钠催化水解成β—甘油和磷酸氢根离子，反应一定时间后，加ic卡防水水表
入10%三终止反应。再加入定磷试剂，磷酸氢根离子与定磷试剂反应生成
蚀刻液再生钼蓝，产生的钼蓝在660nm 处有最大吸收，吸光度的大小在一定范围内与无机
磷含量成正比，因此可用光密度O.D660值代替酶活性，作出O.D660～温度曲线，
从曲线上可知表现最高活力时所处的最适温度值。
三、实验材料
酸性磷酸酯酶原液
四、仪器设备
恒温水浴槽，秒表，721型分光光度计；
五、实验试剂
(1)0.01Mβ—甘油磷酸钠；
(2)0.1NHCl；
(3)8.5%NaCl溶液；
(4)10%三；
(5)0.143M-醋酸钠缓冲液（参见实验六）。
(6)pH5.0-醋酸缓冲液（参见实验六）
六、实验步骤
取12支10ml离心管，编号，按表操作:
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试管编号25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 45℃ 50℃
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12风力摆控制系统
-醋酸缓冲液（ml） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
酶液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
10%三（ml） 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0
摇匀后，在分别在一定温度的水浴槽中保温5min
β-甘油磷酸钠（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
摇匀后，在一定温度的恒温水浴槽中准确反应10min
10%三（ml） 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0
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